Marqueurs épithéliaux de transition mésenchymateuse dans OSMF
Évaluation des risques de transformation maligne dans la fibrose sous-muqueuse buccale à l'aide de signatures épithéliales de transition mésenchymateuse (EMT) dans des échantillons de tissus et de salive
La fibrose sous-muqueuse orale (OSMF) est essentiellement un déséquilibre entre le métabolisme du collagène et le mécanisme de cicatrisation des plaies induit par l'habitude de mâcher de la noix d'arec. Cliniquement, la maladie évolue par étapes avec des patients présentant une sensation de brûlure, une intolérance aux aliments épicés, des vésicules en particulier sur le palais, une ulcération et une sécheresse de la bouche, une fibrose de la muqueuse buccale, entraînant une rigidité des lèvres, de la langue et du palais et enfin un trismus. Comme la maladie est progressivement débilitante et a le potentiel de se transformer en cancer malin, une étude a été conçue pour évaluer s'il existe des marqueurs tissulaires ou salivaires qui peuvent être évalués pour un diagnostic précoce et indiquer une transformation maligne, le cas échéant.
Les participants qui avaient une OSMF et des antécédents d'habitude, les patients sans OSMF mais des antécédents d'habitude formaient le groupe de cas où les patients normaux sans OSMF et sans histoire d'habitude faisaient partie du groupe témoin. Les candidats éligibles qui ont consenti à participer à l'étude ont été soumis à une procédure de biopsie et leurs échantillons de salive ont également été collectés. Les échantillons de biopsie ont été soumis à l'immunohistochimie (IHC) et à la réaction en chaîne par polymérase (PCR) pour évaluer les marqueurs EMT comme la vimentine, l'e-cadhérine et le collagène IV. Des copies de miARN ont été extraites de la salive et ont été soumises à une RT-PCR.
La question de recherche était :
- EMT est-il une signature positive dans OSMF.
- Le classement histopathologique et la dysplasie dans l'OSMF ont-ils une corrélation avec l'EMT.
- Les marqueurs EMT aberrants peuvent-ils être un indicateur fiable pour l'évaluation du risque de transformation maligne précoce.
- L'expression de mi ARN 21 dans la salive peut-elle prédire la gravité de la maladie et, plus important encore, évaluer le risque de transformation maligne précoce dans l'OSMF.
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
La transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT) décrit le processus par lequel les cellules perdent leurs propriétés épithéliales et adoptent un phénotype plus mésenchymateux et invasif. Une interaction moléculaire continue entre les cellules épithéliales et mésenchymateuses est nécessaire au cours du développement embryonnaire (transition mésenchymateuse épithéliale) et joue probablement un rôle important dans les processus pathologiques tels que la cicatrisation des plaies et la progression tumorale. Le développement des carcinomes est dû aux changements génétiques au sein de l'épithélium cible. Comme il y a conversion de l'épithélium normal en carcinome épidermoïde potentiellement malin, le stroma passe également de normal à activé ou associé à une tumeur appelée réaction stromale. 10 L'EMT peut générer des cellules mésenchymateuses qui expriment l'actine du muscle lisse α (αSMA), comme on le voit dans les myofibroblastes. Il n'est cependant pas clair si les myofibroblastes fonctionnels observés dans la fibrose ou le cancer dérivent de cellules épithéliales ou endothéliales
Par conséquent, les marqueurs EMT dans OSMF ont été évalués dans cette étude. les marqueurs suivants choisis comme :
- miARN-21 régule la prolifération cellulaire, l'apoptose et la transition épithéliale à mésenchymateuse au cours de la progression néoplasique et est régulé positivement dans une variété de cancers. Une expression accrue de miARN-21 est observée dans les myofibroblastes.12 Puisque nous connaissons le rôle des myofibroblastes dans l'OSMF, l'expression salivaire de mi RNA-21 a été incluse comme marqueur.
- Le collagène de type IV a la caractéristique unique de s'auto-associer par des liaisons covalentes intramoléculaires, fournissant des propriétés de barrière et de résistance mécanique aux membranes basales. L'augmentation du dépôt de collagène dans l'OSMF implique de nombreux fibroblastes qui sont convertis en myofibroblastes trouvés dans les coupes histologiques d'échantillons de tissus. il a été démontré qu'un microenvironnement ou stroma altéré, tel que des myofibroblastes persistants, entraîne une tumorigenèse et une progression tumorale
Les cadhérines sont une classe de protéines transmembranaires de type 1 connues pour leur propriété d'adhésion cellule-cellule dépendante du calcium. Les E-cadhérines sont des membres de cette famille de protéines présentes dans les cellules épithéliales qui jouent un rôle important dans l'adhésion cellulaire en garantissant que les cellules des tissus sont liées les unes aux autres. La perte de la fonction ou de l'expression de la E-cadhérine a été impliquée dans la progression du cancer et les métastases. L'expression de la E-cadhérine dans l'épithélium de la tête et du cou est essentielle pour la morphogenèse et l'homéostasie des tissus épithéliaux. Les contacts cellule-cellule médiés par la cadhérine sont nécessaires à la croissance dépendante de l'ancrage des cellules épithéliales.
Par conséquent, une expression plus faible de la E-cadhérine est un signe de perte d'intégrité épithéliale
- La vimentine, une protéine de filament intermédiaire, est impliquée dans la régulation du comportement, de la morphologie et des propriétés mécaniques des cellules. La vimentine est un marqueur EMT exprimé dans le tissu conjonctif. L'expression de la vimentine dans l'épithélium est une signature positive de l'EMT, et son évaluation dans l'OSMF peut dévoiler l'importance de la signature EMT dans la fibrose buccale.
Type d'étude
Inscription (Réel)
Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
Accepte les volontaires sains
Sexes éligibles pour l'étude
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critère d'intégration:
- Tout patient ayant des antécédents de mastication de noix d'arec avec des manifestations cliniques d'OSMF.
- Patients qui mâchaient des noix d'arec depuis plus d'un an et ne présentaient aucun symptôme clinique d'OSMF.
- Volontaires humains en bonne santé qui sont indiqués pour l'extraction d'une dent et qui n'avaient pas de caractéristiques cliniques d'OSMF et n'avaient pas d'antécédents d'habitude
Critère d'exclusion:
- Patients ayant des troubles de la coagulation
- les patients chez qui on a diagnostiqué des troubles des glandes salivaires pouvant altérer le flux ou la composition salivaire
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
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Patient avec des habitudes et ayant OSMF
Patients ayant des antécédents de mastication de noix d'arec sous quelque forme et composition que ce soit et qui n'ont subi aucun traitement pour leur état actuel, c'est-à-dire OSMF
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échantillons de biopsie pour coloration IHC et PCR
Échantillons de salive pour l'analyse de l'expression du miARN 21
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Patients ayant des habitudes et ne présentant aucun symptôme clinique d'OSMF
Patients ayant des antécédents de mastication de noix d'arec sous quelque forme et composition que ce soit et ne présentant cliniquement aucun symptôme d'OSMF
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échantillons de biopsie pour coloration IHC et PCR
Échantillons de salive pour l'analyse de l'expression du miARN 21
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Volontaires humains en bonne santé
les patients qui n'ont signalé aucun antécédent d'habitudes de mastication de noix de cajou et qui n'ont présenté aucun symptôme clinique d'OSMF
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échantillons de biopsie pour coloration IHC et PCR
Échantillons de salive pour l'analyse de l'expression du miARN 21
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Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Changement dans l'expression des niveaux d'E-cadhérine dans tous les groupes en IHC
Délai: 10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Pour l'IHC : les critères utilisés pour définir les cellules positives à la E-cadhérine étaient la coloration brune de la membrane cellulaire des cellules épithéliales ; le pourcentage de cellules colorées positivement a été noté comme - Pourcentage de SCORE DE CELLULES POSITIVES Aucune cellule 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 %-80 % 3 ≥81% 4 L'intensité de la coloration a également été évaluée par rapport au tissu témoin positif et notée en conséquence SCORE D'INTENSITÉ Négatif 0 Faible 1 Modéré 2 Fort 3 |
10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Changement dans l'expression des niveaux de vimentine dans tous les groupes en IHC
Délai: 10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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les cellules positives à la vimentine étaient colorées en brun dans le cytoplasme des cellules épithéliales ; le pourcentage de cellules colorées positivement a été noté comme - Pourcentage de SCORE DE CELLULES POSITIVES Aucune cellule 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 %-80 % 3 ≥81% 4 L'intensité de la coloration a également été évaluée par rapport au tissu témoin positif et notée en conséquence SCORE D'INTENSITÉ Négatif 0 Faible 1 Modéré 2 Fort 3 |
10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Changement dans l'expression des niveaux de collagène IV dans tous les groupes en IHC
Délai: 10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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les cellules positives au collagène IV étaient colorées en brun dans les cellules de la membrane basale ; le pourcentage de cellules colorées positivement a été noté comme - Pourcentage de SCORE DE CELLULES POSITIVES Aucune cellule 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 %-80 % 3 ≥81% 4 L'intensité de la coloration a également été évaluée par rapport au tissu témoin positif et notée en conséquence SCORE D'INTENSITÉ Négatif 0 Faible 1 Modéré 2 Fort 3 |
10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification de l'expression du miARN 21 dans les trois groupes à l'aide de la PCR en temps réel
Délai: 10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Considérant l'expression de miRNA21 dans l'échantillon normal (N) comme 1, l'expression de tous les échantillons a été calculée La formule utilisée est : nombre de copies = (quantité * 6.022x1023) / (longueur * 1x109 * 650)
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10 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Changement des niveaux de cadhérine E dans la PCR
Délai: 20 jours après le prélèvement de l'échantillon
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Après extraction de l'ADN des échantillons de biopsie, les amorces pour la E-cadhérine ont été conçues à l'aide du logiciel Primer Express, synthétisées et purifiées par HPLC pour une PCR en temps réel pour la quantification.
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20 jours après le prélèvement de l'échantillon
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Changement des niveaux de vimentine dans la PCR
Délai: 20 jours après le prélèvement de l'échantillon
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Après extraction de l'ADN des échantillons de biopsie, les amorces pour Vimentin ont été conçues à l'aide du logiciel Primer Express, synthétisées et purifiées par HPLC pour une PCR en temps réel pour la quantification
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20 jours après le prélèvement de l'échantillon
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Modification clinique de l'expression de l'e-cadhérine par rapport à la catégorie de maladie chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de cadhérine E dans les échantillons de tissus par rapport à différentes expressions cliniques de la maladie selon le système de classification de Kerr et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification histologique de l'expression de l'e-cadhérine par rapport à la catégorie de maladie chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de cadhérine E dans les échantillons de tissus par rapport à différentes expressions cliniques de la maladie selon le système de classification de Kanna et Andrade et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification clinique de l'expression de la vimentine par rapport à la catégorie de maladie chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de vimentine dans les échantillons de tissus par rapport à différentes expressions cliniques selon le système de classification de Kerr et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification histologique de l'expression de la vimentine par rapport à la catégorie de maladie chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de vimentine dans les échantillons de tissus par rapport à différentes expressions histologiques selon le système de classification de Khanna et Andrade.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification de l'expression du collagène IV par rapport à la catégorie de maladie cliniquement chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de collagène-IV dans les échantillons de tissus par rapport à différentes catégories d'expression clinique selon le système de classification de Kerr et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification de l'expression du collagène IV par rapport à la catégorie de maladie sur le plan histologique chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de collagène-IV dans les échantillons de tissus par rapport à différentes expressions histologiques selon le système de classification de Khanna et Andred et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification de l'expression de mi ARN 21 par rapport à la catégorie de maladie cliniquement chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de miARN 21 dans les échantillons de salive par rapport à différentes expressions cliniques de l'OSMF selon le système de classification de Kerr et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Modification de l'expression de l'ARN mi 21 par rapport à la catégorie de maladie sur le plan histologique chez les patients OSMF ayant des habitudes
Délai: 15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Niveau de miARN 21 dans les échantillons de salive par rapport à différentes expressions histologiques selon le système de classification de Khanna et Andred et al.
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15 jours à compter du prélèvement de l'échantillon
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Collaborateurs et enquêteurs
Collaborateurs
Publications et liens utiles
Publications générales
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (RÉEL)
Achèvement primaire (RÉEL)
Achèvement de l'étude (RÉEL)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (RÉEL)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (RÉEL)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Mots clés
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
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