Epiteliale mesenkymale overgangsmarkører i OSMF
Risikovurdering af malign transformation i oral submukøs fibrose ved hjælp af epiteliale mesenkymale overgange (EMT) signaturer i vævsprøver og spyt
Oral sub mucous fibrose (OSMF) er i bund og grund en ubalance mellem kollagenmetabolisme og sårhelingsmekanisme, der er induceret af arecanut tyggevaner. Klinisk skrider sygdommen frem i stadier med patienter, der viser sig med brændende fornemmelse, intolerance over for krydret mad, blærer især i ganen, sårdannelse og mundtørhed, fibrose i mundslimhinden, hvilket fører til stivhed i læber, tunge og gane og til sidst trismus. Da sygdommen er progressivt invaliderende og har potentiale til at udvikle sig til ondartet kræft, blev der designet en undersøgelse til at vurdere, om der er nogen vævs- eller spytmarkører, der kan vurderes for tidlig diagnose og indikere malign transformation, hvis nogen.
Deltagere, der havde OSMF og vanehistorie, patienter uden OSMF, men vanehistorie, dannede casegruppen, hvor som normale patienter uden OSMF og ingen vanehistorie var i kontrolgruppen. Kvalificerede kandidater, der gav samtykke til at deltage i undersøgelsen, blev udsat for biopsiprocedure, og også deres spytprøver blev indsamlet. Biopsiprøver blev udsat for immunhistokemi (IHC) og polymerasekædereaktion (PCR) for at vurdere EMT-markører som vimentin, e-cadherin og kollagen IV. miRNA-kopier blev ekstraheret fra spyt og blev udsat for RT-PCR.
Forskningsspørgsmålet var:
- Er EMT en positiv signatur i OSMF.
- Har histopatologisk gradering og dysplasi i OSMF nogen sammenhæng med EMT.
- Kan afvigende EMT-markører være en pålidelig indikator for risikovurdering af tidlig malign transformation.
- Kan ekspression af mi RNA 21 i spyt forudsige sygdommens sværhedsgrad og endnu vigtigere vurdere risikoen for tidlig malign transformation i OSMF.
Studieoversigt
Status
Betingelser
Intervention / Behandling
Detaljeret beskrivelse
Epitel-mesenchymal overgang (EMT) beskriver den proces, hvorved celler afgiver deres epiteliale egenskaber og antager en mere mesenkymal og invasiv fænotype. En kontinuerlig molekylær krydstale mellem epitel- og mesenkymale celler er påkrævet under embryonal udvikling (epitelial mesenchymal overgang) og spiller sandsynligvis en vigtig rolle i patologisk proces som sårheling og tumorprogression. Udviklingen af karcinomer skyldes de genetiske ændringer i målepitelet. Da der er omdannelse af normalt epitel til potentielt malignt og til pladecellecarcinom, ændres stromaet også fra normalt til aktiveret eller tumorassocieret kaldet stromal reaktion. 10 EMT kan generere mesenkymale celler, der udtrykker α-glat muskel actin (αSMA), som det ses i myofibroblaster. Det er dog uklart, om funktionelle myofibroblaster set i fibrose eller kræft afledt af epitel- eller endotelceller
Derfor blev EMT-markører i OSMF vurderet i denne undersøgelse. følgende markører valgt som:
- miRNA-21 regulerer celleproliferation, apoptose og epitel- til mesenkymal overgang under neoplastisk progression og er opreguleret i en række kræftformer. En øget ekspression af miRNA-21 ses i myofibroblaster.12 Da vi kender rollen for myofibroblaster i OSMF, blev spytekspression af mi RNA-21 inkluderet som markør.
- Type IV-kollagen har den unikke egenskab, at den associerer sig selv gennem intramolekylære kovalente bindinger, hvilket giver basalmembraner barriere- og mekanisk styrkeegenskaber. Den øgede kollagenaflejring i OSMF involverer adskillige fibroblaster, der omdannes til myofibroblaster, der findes i histologiske snit af vævsprøver. et ændret mikromiljø eller stroma såsom vedvarende myofibroblaster har vist sig at resultere i tumorgenese og tumorprogression
Cadheriner er en klasse af type-1 transmembranproteiner kendt for dets calciumafhængige cellecelleadhæsionsegenskaber. E-cadheriner er medlemmer af denne proteinfamilie, der findes i epitelceller, som tjener vigtige roller i celleadhæsion ved at sikre, at celler i væv er bundet sammen. Tabet af E-cadherin-funktion eller -ekspression har været impliceret i cancerprogression og metastase. E-cadherin-ekspression i hoved- og halsepitel er afgørende for morfogenesen og homeostasen af epitelvæv. De cadherin-medierede celle-celle-kontakter er nødvendige for den forankringsafhængige vækst af epitelceller.
Derfor er lavere ekspression af E-cadherin et tegn på tab af epitelintegritet
- Det mellemliggende filamentprotein vimentin er involveret i reguleringen af celleadfærd, morfologi og mekaniske egenskaber. Vimentin er en EMT-markør udtrykt i bindevæv. Ekspression af vimentin i epitel er en positiv signatur af EMT, og dens evaluering i OSMF kan afsløre vigtigheden af EMT-signatur ved oral fibrose.
Undersøgelsestype
Tilmelding (Faktiske)
Deltagelseskriterier
Berettigelseskriterier
Aldre berettiget til at studere
Tager imod sunde frivillige
Køn, der er berettiget til at studere
Prøveudtagningsmetode
Studiebefolkning
Beskrivelse
Inklusionskriterier:
- Enhver patient, der har haft en historie med tyggevaner med kannød med kliniske manifestationer af OSMF.
- Patienter, der havde en tyggevaner fra en nøddenød på mere end 1 år og havde ingen kliniske symptomer på OSMF.
- Raske frivillige, der er indiceret til udtrækning af tand og havde ingen kliniske træk ved OSMF og havde ingen vanehistorie
Ekskluderingskriterier:
- Patienter, der havde blødningsforstyrrelser
- patienter, der er diagnosticeret med spytkirtellidelser, der kan ændre spytflow eller sammensætning
Studieplan
Hvordan er undersøgelsen tilrettelagt?
Design detaljer
Kohorter og interventioner
Gruppe / kohorte |
Intervention / Behandling |
|---|---|
|
Patient med vaner og med OSMF
Patienter, der har haft en historie med tyggevaner af arecanut i enhver form og sammensætning, og som ikke har gennemgået nogen behandling for deres nuværende tilstand, dvs. OSMF
|
biopsiprøver til IHC-farvning og PCR
Spytprøver til miRNA 21-ekspressionsanalyse
|
|
Patienter med vaner og havde ingen kliniske symptomer på OSMF
Patienter, der tidligere har haft arecanut-tyggevaner i enhver form og sammensætning og ikke havde kliniske symptomer på OSMF
|
biopsiprøver til IHC-farvning og PCR
Spytprøver til miRNA 21-ekspressionsanalyse
|
|
Frivillige frivillige mennesker
patienter, der ikke rapporterede nogen historie med areanøddetyggevaner og havde ingen kliniske symptomer på OSMF
|
biopsiprøver til IHC-farvning og PCR
Spytprøver til miRNA 21-ekspressionsanalyse
|
Hvad måler undersøgelsen?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Ændring i ekspression af E-cadherin niveauer i alle grupper i IHC
Tidsramme: 10 dage fra prøvetagning
|
For IHC: Kriterierne anvendt til at definere E-cadherin-positive celler var brun farvning i cellemembranen af epitelceller; procentdelen af positivt farvede celler blev scoret som - Procentdel af POSITIVE CELLER SCORE Ingen celler 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81 % 4 Farvningsintensiteten blev også vurderet i sammenligning med det positive kontrolvæv og scoret i overensstemmelse hermed INTENSITETSSCORE Negativ 0 Svag 1 Moderat 2 Stærk 3 |
10 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i ekspression af vimentinniveauer i alle grupperne i IHC
Tidsramme: 10 dage fra prøvetagning
|
vimentin-positive celler var brunfarvning i cytoplasma af epitelceller; procentdelen af positivt farvede celler blev scoret som - Procentdel af POSITIVE CELLER SCORE Ingen celler 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81 % 4 Farvningsintensiteten blev også vurderet i sammenligning med det positive kontrolvæv og scoret i overensstemmelse hermed INTENSITETSSCORE Negativ 0 Svag 1 Moderat 2 Stærk 3 |
10 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i ekspression af kollagen IV-niveauer i alle grupperne i IHC
Tidsramme: 10 dage fra prøvetagning
|
kollagen IV positive celler var brunfarvning i basalmembranceller; procentdelen af positivt farvede celler blev scoret som - Procentdel af POSITIVE CELLER SCORE Ingen celler 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81 % 4 Farvningsintensiteten blev også vurderet i sammenligning med det positive kontrolvæv og scoret i overensstemmelse hermed INTENSITETSSCORE Negativ 0 Svag 1 Moderat 2 Stærk 3 |
10 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i ekspression af miRNA 21 i alle tre grupper ved hjælp af Real Time-PCR
Tidsramme: 10 dage fra prøvetagning
|
I betragtning af udtrykket af miRNA21 i normal prøve (N) som 1, blev udtrykket af alle prøverne beregnet. Den anvendte formel er: antal kopier = (mængde * 6,022x1023) / (længde * 1x109 * 650)
|
10 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i E cadherin niveauer i PCR
Tidsramme: 20 dage efter prøvetagning
|
Efter ekstraktion af DNA fra biopsiprøver blev primerne for E-cadherin designet ved hjælp af Primer Express-software, syntetiseret og HPLC-oprenset til real-time PCR til kvantificering.
|
20 dage efter prøvetagning
|
|
Ændring i vimentinniveauer i PCR
Tidsramme: 20 dage efter prøvetagning
|
Efter ekstraktion af DNA fra biopsiprøverne blev primerne til Vimentin designet ved hjælp af Primer Express-software, syntetiseret og HPLC-oprenset til real-time PCR til kvantificering
|
20 dage efter prøvetagning
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Ændring i e-cadherin-ekspression med hensyn til sygdomskategori klinisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
E cadherin niveau i vævsprøver med hensyn til forskellige kliniske ekspression af sygdom i henhold til Kerr et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i e-cadherin-ekspression med hensyn til sygdomskategori histologisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
E cadherin niveau i vævsprøver med hensyn til forskellige kliniske ekspression af sygdom ifølge Kanna og Andrade et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i vimentin-ekspression med hensyn til sygdomskategori klinisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
Vimentinniveau i vævsprøver med hensyn til forskelligt klinisk udtryk i henhold til Kerr et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i vimentin-ekspression med hensyn til sygdomskategori histologisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
Vimentinniveau i vævsprøver med hensyn til forskellig histologisk ekspression i henhold til Khanna og Andrade klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i kollagen IV-ekspression med hensyn til sygdomskategori klinisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
Kollagen-IV niveau i vævsprøver med hensyn til forskellige kliniske ekspressionskategorier i henhold til Kerr et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i kollagen IV-ekspression med hensyn til sygdomskategori hstologisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
Kollagen-IV niveau i vævsprøver med hensyn til forskellig histologisk ekspression i henhold til Khanna og Andred et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i mi RNA 21-ekspression med hensyn til sygdomskategori klinisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
miRNA 21 niveau i spytprøver med hensyn til forskellig klinisk ekspression af OSMF i henhold til Kerr et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
|
Ændring i mi RNA 21-ekspression med hensyn til sygdomskategori histologisk hos OSMF-patienter med vaner
Tidsramme: 15 dage fra prøvetagning
|
miRNA 21 niveau i spytprøver med hensyn til forskellig histologisk ekspression i henhold til Khanna og Andred et al klassifikationssystem.
|
15 dage fra prøvetagning
|
Samarbejdspartnere og efterforskere
Samarbejdspartnere
Publikationer og nyttige links
Generelle publikationer
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Datoer for undersøgelser
Studer store datoer
Studiestart (FAKTISKE)
Primær færdiggørelse (FAKTISKE)
Studieafslutning (FAKTISKE)
Datoer for studieregistrering
Først indsendt
Først indsendt, der opfyldte QC-kriterier
Først opslået (FAKTISKE)
Opdateringer af undersøgelsesjournaler
Sidste opdatering sendt (FAKTISKE)
Sidste opdatering indsendt, der opfyldte kvalitetskontrolkriterier
Sidst verificeret
Mere information
Begreber relateret til denne undersøgelse
Nøgleord
Yderligere relevante MeSH-vilkår
Andre undersøgelses-id-numre
- Oxford DC
Plan for individuelle deltagerdata (IPD)
Planlægger du at dele individuelle deltagerdata (IPD)?
Lægemiddel- og udstyrsoplysninger, undersøgelsesdokumenter
Studerer et amerikansk FDA-reguleret lægemiddelprodukt
Studerer et amerikansk FDA-reguleret enhedsprodukt
Disse oplysninger blev hentet direkte fra webstedet clinicaltrials.gov uden ændringer. Hvis du har nogen anmodninger om at ændre, fjerne eller opdatere dine undersøgelsesoplysninger, bedes du kontakte register@clinicaltrials.gov. Så snart en ændring er implementeret på clinicaltrials.gov, vil denne også blive opdateret automatisk på vores hjemmeside .