Epiteelin mesenkymaaliset siirtymämerkit OSMF:ssä
Suun submukoosisen fibroosin pahanlaatuisen transformaation riskinarviointi käyttämällä epiteelin mesenkymaalisen siirtymän (EMT) allekirjoituksia kudosnäytteissä ja syljessä
Oral Sub mucous Fibrosis (OSMF) on pohjimmiltaan epätasapaino kollageeniaineenvaihdunnan ja haavan paranemismekanismin välillä, jonka aiheuttaa arecanut-purutapa. Kliinisesti tauti etenee vaiheittain, jolloin potilailla esiintyy polttavaa tunnetta, mausteisen ruoan intoleranssia, rakkuloita erityisesti kitalaessa, haavaumia ja suun kuivumista, suun limakalvon fibroosia, joka johtaa huulten, kielen ja kitalaen jäykkyyteen ja lopulta trismukseen. Koska tauti on asteittain heikentävä ja voi kehittyä pahanlaatuiseksi syöväksi, tutkimus suunniteltiin arvioimaan, onko olemassa kudos- tai sylkimarkkereita, jotka voidaan arvioida varhaista diagnoosia varten ja jotka osoittavat mahdollisen pahanlaatuisen transformaation.
Osallistujat, joilla oli OSMF ja tapahistoria, potilaat, joilla ei ollut OSMF: tä, mutta tapahistoriaa, muodostivat tapausryhmän, jossa normaalit potilaat, joilla ei ollut OSMF: tä ja joilla ei ollut tapahistoriaa, olivat kontrolliryhmässä. Hakijoille, jotka suostuivat osallistumaan tutkimukseen, tehtiin biopsia ja myös heidän sylkinäytteensä otettiin. Biopsianäytteille suoritettiin immunohistokemia (IHC) ja polymeraasiketjureaktio (PCR) EMT-markkerien, kuten vimentiinin, e-kadheriinin ja kollageeni IV:n, arvioimiseksi. miRNA-kopiot uutettiin syljestä ja niille suoritettiin RT-PCR.
Tutkimuskysymys oli:
- Onko EMT positiivinen allekirjoitus OSMF:ssä.
- Onko histopatologisella luokittelulla ja dysplasialla OSMF:ssä mitään korrelaatiota EMT:n kanssa.
- Voivatko poikkeavat EMT-markkerit olla luotettava indikaattori varhaisen pahanlaatuisen transformaation riskin arvioinnissa?
- Voiko mi-RNA 21:n ilmentyminen syljessä ennustaa taudin vakavuutta ja mikä tärkeämpää, arvioida varhaisen pahanlaatuisen transformaation riskiä OSMF:ssä.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Epiteeli-mesenkymaalinen siirtymä (EMT) kuvaa prosessia, jossa solut luopuvat epiteeliominaisuuksistaan ja omaksuvat mesenkymaalisemman ja invasiivisemman fenotyypin. Epiteelisolujen ja mesenkymaalisten solujen välinen jatkuva molekylaarinen ristikeskustelu vaaditaan alkion kehityksen aikana (epiteelin mesenkymaalinen siirtymä), ja sillä on todennäköisesti tärkeä rooli patologisissa prosesseissa, kuten haavan paranemisessa ja kasvaimen etenemisessä. Karsinoomien kehittyminen johtuu geneettisistä muutoksista kohdeepiteelin sisällä. Koska normaali epiteeli muuttuu mahdollisesti pahanlaatuiseksi ja levyepiteelikarsinoomaksi, myös strooma muuttuu normaalista aktivoituneeksi tai kasvaimeen liittyväksi, jota kutsutaan stroomareaktioksi. 10 EMT voi tuottaa mesenkymaalisia soluja, jotka ilmentävät α-sileänlihaksen aktiinia (αSMA), kuten myofibroblasteissa nähdään. On kuitenkin epäselvää, havaitaanko fibroosissa tai syövässä epiteelisoluista tai endoteelisoluista peräisin olevia toiminnallisia myofibroblasteja
Tästä syystä EMT-markkerit OSMF:ssä arvioitiin tässä tutkimuksessa. seuraavat merkit valittuna:
- miRNA-21 säätelee solujen proliferaatiota, apoptoosia ja epiteelin siirtymistä mesenkymaaliseen neoplastisen etenemisen aikana, ja sitä säätelee useissa eri syövissä. MiRNA-21:n lisääntynyt ilmentyminen havaitaan myofibroblasteissa.12 Koska tiedämme myofibroblastien roolin OSMF:ssä, mi-RNA-21:n syljen ekspressio sisällytettiin markkeriksi.
- Tyypin IV kollageenilla on ainutlaatuinen ominaisuus, että se yhdistyy itsestään molekyylinsisäisten kovalenttisten sidosten kautta, mikä tarjoaa este- ja mekaanisia lujuusominaisuuksia tyvikalvoille. OSMF:n lisääntynyt kollageenikertymä sisältää lukuisia fibroblasteja, jotka muuntuvat myofibroblasteiksi, joita löytyy kudosnäytteiden histologisista osista. muuttuneen mikroympäristön tai strooman, kuten pysyvien myofibroblastien, on osoitettu johtavan tuumorigeneesiin ja kasvaimen etenemiseen
Kadheriinit ovat tyypin 1 transmembraaniproteiinien luokka, joka tunnetaan kalsiumista riippuvaisesta solu-soluadheesio-ominaisuudestaan. E-kadheriinit ovat tämän proteiiniperheen jäseniä, joita löytyy epiteelisoluista ja joilla on tärkeä rooli soluadheesiossa varmistamalla, että kudoksissa olevat solut sitoutuvat toisiinsa. E-kadheriinin toiminnan tai ilmentymisen menetys on osallisena syövän etenemisessä ja etäpesäkkeissä. E-kadheriinin ilmentyminen pään ja kaulan epiteelissä on välttämätöntä epiteelikudosten morfogeneesille ja homeostaasille. Kadheriinivälitteisiä solu-solukontakteja tarvitaan epiteelisolujen kiinnittymisestä riippuvaiseen kasvuun.
Tästä syystä E-kadheriinin alhaisempi ilmentyminen on merkki epiteelin eheyden menetyksestä
- Välimuotoinen filamenttiproteiini vimentiini osallistuu solujen käyttäytymisen, morfologian ja mekaanisten ominaisuuksien säätelyyn. Vimentin on sidekudoksessa ilmentyvä EMT-markkeri. Vimentiinin ilmentyminen epiteelissä on EMT:n positiivinen allekirjoitus, ja sen arviointi OSMF:ssä voi paljastaa EMT-allekirjoituksen merkityksen suun fibroosissa.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Kaikki potilaat, joilla on ollut OSMF:n kliinisiä oireita.
- Potilaat, joilla on ollut yli 1 vuoden purutapa ja joilla ei ollut kliinisiä OSMF:n oireita.
- Terveet vapaaehtoiset ihmiset, jotka on tarkoitettu hampaanpoistoon ja joilla ei ollut OSMF:n kliinisiä piirteitä ja joilla ei ollut tapahistoriaa
Poissulkemiskriteerit:
- Potilaat, joilla oli verenvuotohäiriöitä
- potilaat, joilla on diagnosoitu sylkirauhashäiriöt, jotka voivat muuttaa syljen virtausta tai koostumusta
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Potilas, jolla on tottumuksia ja jolla on OSMF
Potilaat, joilla on aiempia pureskelutapauksia missä tahansa muodossa ja koostumuksessa ja joita ei ole hoidettu nykyisen tilansa, eli OSMF:n, vuoksi.
|
biopsianäytteet IHC-värjäystä ja PCR:ää varten
Sylkinäytteet miRNA 21 -ekspressioanalyysiä varten
|
|
Potilaat, joilla oli tottumuksia ja joilla ei ollut kliinisiä oireita OSMF:stä
Potilaat, joilla oli aiempia pureskelutapauksia missä tahansa muodossa ja koostumuksessa ja joilla ei ollut kliinisesti OSMF:n oireita
|
biopsianäytteet IHC-värjäystä ja PCR:ää varten
Sylkinäytteet miRNA 21 -ekspressioanalyysiä varten
|
|
Terveitä vapaaehtoisia ihmisiä
potilaat, joilla ei ollut aiemmin esiintynyt pintapähkinän pureskelutottumuksia ja joilla ei ollut kliinisiä OSMF:n oireita
|
biopsianäytteet IHC-värjäystä ja PCR:ää varten
Sylkinäytteet miRNA 21 -ekspressioanalyysiä varten
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Muutos E-kadheriinitasojen ekspressiossa kaikissa IHC-ryhmissä
Aikaikkuna: 10 päivää näytteenottopäivästä
|
IHC:lle: E-kadheriinipositiivisten solujen määrittämiseen käytetty kriteeri oli ruskea värjäys epiteelisolujen solukalvossa; positiivisesti värjäytyneiden solujen prosenttiosuus pisteytettiin seuraavasti: POSITIIVISTEN SOLUJEN PISTEET prosenttiosuus Ei soluja 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 % -80 % 3 ≥81 % 4 Värjäytymisen intensiteetti arvioitiin myös verrattuna positiiviseen kontrollikudokseen ja pisteytettiin vastaavasti INTENSITEETTIPISTEET Negatiivinen 0 Heikko 1 Keskitaso 2 Vahva 3 |
10 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos vimentiinitasojen ilmentymisessä kaikissa IHC-ryhmissä
Aikaikkuna: 10 päivää näytteenottopäivästä
|
vimentiinipositiiviset solut värjäytyivät ruskeasti epiteelisolujen sytoplasmassa; positiivisesti värjäytyneiden solujen prosenttiosuus pisteytettiin seuraavasti: POSITIIVISTEN SOLUJEN PISTEET prosenttiosuus Ei soluja 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 % -80 % 3 ≥81 % 4 Värjäytymisen intensiteetti arvioitiin myös verrattuna positiiviseen kontrollikudokseen ja pisteytettiin vastaavasti INTENSITEETTIPISTEET Negatiivinen 0 Heikko 1 Keskitaso 2 Vahva 3 |
10 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos kollageeni IV -tasojen ekspressiossa kaikissa IHC:n ryhmissä
Aikaikkuna: 10 päivää näytteenottopäivästä
|
kollageeni IV -positiiviset solut värjäytyivät ruskeasti tyvikalvosoluissa; positiivisesti värjäytyneiden solujen prosenttiosuus pisteytettiin seuraavasti: POSITIIVISTEN SOLUJEN PISTEET prosenttiosuus Ei soluja 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 % -80 % 3 ≥81 % 4 Värjäytymisen intensiteetti arvioitiin myös verrattuna positiiviseen kontrollikudokseen ja pisteytettiin vastaavasti INTENSITEETTIPISTEET Negatiivinen 0 Heikko 1 Keskitaso 2 Vahva 3 |
10 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos miRNA 21:n ilmentymisessä kaikissa kolmessa ryhmässä käyttäen Real Time-PCR:ää
Aikaikkuna: 10 päivää näytteenottopäivästä
|
Ottaen miRNA21:n ilmentymisen normaalinäytteessä (N) arvoksi 1, laskettiin kaikkien näytteiden ilmentyminen. Käytetty kaava on: kopioiden määrä = (määrä * 6,022x1023) / (pituus * 1x109 * 650)
|
10 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos E-kadheriinitasoissa PCR:ssä
Aikaikkuna: 20 päivää näytteenoton jälkeen
|
DNA:n uuttamisen jälkeen biopsianäytteistä E-kadheriinin alukkeet suunniteltiin käyttäen Primer Express -ohjelmistoa, syntetisoitiin ja HPLC-puhdistettiin reaaliaikaista PCR:ää varten kvantifiointia varten.
|
20 päivää näytteenoton jälkeen
|
|
Vimentiinitasojen muutos PCR:ssä
Aikaikkuna: 20 päivää näytteenoton jälkeen
|
DNA:n poistamisen jälkeen biopsianäytteistä Vimentinin alukkeet suunniteltiin Primer Express -ohjelmistolla, syntetisoitiin ja HPLC-puhdistettiin reaaliaikaista PCR:ää varten kvantifiointia varten.
|
20 päivää näytteenoton jälkeen
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Muutos e-kadheriinin ilmentymisessä suhteessa sairausluokkaan kliinisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
E-kadheriinitaso kudosnäytteissä suhteessa sairauden eri kliinisiin ilmentymiin Kerr et al -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos e-kadheriinin ilmentymisessä suhteessa sairausluokkaan histologisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
E kadheriinitaso kudosnäytteissä suhteessa sairauden eri kliinisiin ilmenemismuotoihin Kanna ja Andrade ym. luokittelujärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos vimentiinin ilmentymisessä suhteessa sairausluokkaan kliinisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
Vimentiinitaso kudosnäytteissä suhteessa erilaisiin kliinisiin ilmentymiin Kerr et al -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos vimentiinin ilmentymisessä suhteessa sairausluokkaan histologisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
Vimentiinitaso kudosnäytteissä suhteessa erilaiseen histologiseen ilmentymiseen Khanna ja Andrade -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos kollageeni IV ilmentymisessä suhteessa sairausluokkaan kliinisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
Kollageeni-IV-taso kudosnäytteissä suhteessa eri kliinisiin ilmentymiskategorioihin Kerr et al -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos kollageeni IV -ekspressiossa suhteessa sairausluokkaan hstologisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
Kollageeni-IV-taso kudosnäytteissä suhteessa erilaiseen histologiseen ilmentymiseen Khanna ja Andred et al -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos mi-RNA 21 -ekspressiossa suhteessa sairausluokkaan kliinisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
miRNA 21 -taso sylkinäytteissä suhteessa OSMF:n erilaisiin kliinisiin ilmentymiin Kerr et al -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
|
Muutos mi-RNA 21 -ekspressiossa suhteessa sairausluokkaan histologisesti OSMF-potilailla, joilla on tottumuksia
Aikaikkuna: 15 päivää näytteenottopäivästä
|
miRNA 21 -taso sylkinäytteissä suhteessa erilaiseen histologiseen ilmentymiseen Khanna ja Andred et al -luokitusjärjestelmän mukaan.
|
15 päivää näytteenottopäivästä
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Yhteistyökumppanit
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (TODELLINEN)
Ensisijainen valmistuminen (TODELLINEN)
Opintojen valmistuminen (TODELLINEN)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (TODELLINEN)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (TODELLINEN)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- Oxford DC
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .