Marcadores de Transição Epitelial Mesenquimal em OSMF
Avaliação de risco de transformação maligna em fibrose submucosa oral usando assinaturas de transição mesenquimal epitelial (EMT) em amostras de tecido e saliva
A fibrose submucosa oral (OSMF) é essencialmente um desequilíbrio entre o metabolismo do colágeno e o mecanismo de cicatrização de feridas induzido pelo hábito de mascar noz de areca. Clinicamente, a doença progride em estágios com pacientes apresentando sensação de queimação, intolerância a alimentos condimentados, vesículas principalmente no palato, ulceração e secura da boca, fibrose da mucosa oral, levando a lábios, língua e rigidez do palato e, finalmente, trismo. Como a doença é progressivamente debilitante e tem potencial para se transformar em câncer maligno, um estudo foi planejado para avaliar se há algum marcador de tecido ou saliva que possa ser avaliado para diagnóstico precoce e indicar transformação maligna, se houver.
Participantes que tinham OSMF e histórico de hábitos, pacientes sem OSMF, mas com histórico de hábitos formaram o grupo caso, enquanto pacientes normais sem OSMF e sem histórico de hábitos estavam no grupo controle. Os candidatos elegíveis que consentiram em participar do estudo foram submetidos ao procedimento de biópsia e também foram coletadas amostras de saliva. As amostras de biópsia foram submetidas à imuno-histoquímica (IHC) e reação em cadeia da polimerase (PCR) para avaliar os marcadores EMT como vimentina, e-caderina e colágeno IV. Cópias de miRNA foram extraídas da saliva e submetidas a RT-PCR.
A pergunta de pesquisa foi:
- O EMT é uma assinatura positiva no OSMF.
- A graduação histopatológica e a displasia na OSMF têm alguma correlação com a EMT.
- Os marcadores EMT aberrantes podem ser um indicador confiável para avaliação de risco de transformação maligna precoce.
- A expressão de mi RNA 21 na saliva pode prever a gravidade da doença e, mais importante, avaliar o risco de transformação maligna precoce em OSMF.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
A transição epitelial-mesenquimal (EMT) descreve o processo pelo qual as células perdem suas propriedades epiteliais e adotam um fenótipo mais mesenquimal e invasivo. Uma interação molecular contínua entre células epiteliais e mesenquimais é necessária durante o desenvolvimento embrionário (transição epitelial mesenquimal) e provavelmente desempenha um papel importante no processo patológico, como cicatrização de feridas e progressão tumoral. O desenvolvimento de carcinomas é devido às alterações genéticas dentro do epitélio alvo. Como há conversão do epitélio normal para potencialmente maligno e para carcinoma de células escamosas, o estroma também muda de normal para ativado ou associado a tumor chamado de reação estromal. 10 A EMT pode gerar células mesenquimais que expressam α-actina de músculo liso (αSMA), como visto em miofibroblastos. No entanto, não está claro se os miofibroblastos funcionais observados na fibrose ou no câncer são derivados de células epiteliais ou endoteliais.
Portanto, os marcadores EMT em OSMF foram avaliados neste estudo. os seguintes marcadores escolhidos como:
- O miRNA-21 regula a proliferação celular, a apoptose e a transição epitelial para mesenquimal durante a progressão neoplásica e é regulado positivamente em uma variedade de cânceres. Uma expressão aumentada de miRNA-21 é observada em miofibroblastos.12 Como conhecemos o papel dos miofibroblastos na OSMF, a expressão salivar do mi RNA-21 foi incluída como marcador.
- O colágeno tipo IV tem a característica única de se auto-associar através de ligações covalentes intramoleculares, proporcionando propriedades de barreira e resistência mecânica às membranas basais. um microambiente ou estroma alterado, como miofibroblastos persistentes, resultou em tumorigênese e progressão tumoral
As caderinas são uma classe de proteínas transmembrana tipo 1 conhecidas por sua propriedade de adesão célula-célula dependente de cálcio. As E-caderinas são membros desta família de proteínas encontradas em células epiteliais que desempenham papéis importantes na adesão celular, garantindo que as células dentro dos tecidos estejam unidas. A perda da função ou expressão da E-caderina tem sido implicada na progressão e metástase do câncer. A expressão da E-caderina no epitélio da cabeça e pescoço é essencial para a morfogênese e homeostase dos tecidos epiteliais. Os contatos célula-célula mediados por caderina são necessários para o crescimento dependente de ancoragem de células epiteliais.
Portanto, a expressão mais baixa de E-caderina é um sinal de perda da integridade epitelial
- A proteína de filamento intermediário vimentina está envolvida na regulação do comportamento celular, morfologia e propriedades mecânicas. A vimentina é um marcador EMT expresso no tecido conjuntivo. A expressão de vimentina no epitélio é uma assinatura positiva de EMT, e sua avaliação em OSMF pode revelar a importância da assinatura de EMT na fibrose oral.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Qualquer paciente que tivesse história de hábito de mascar noz de areca com manifestações clínicas de OSMF.
- Pacientes que apresentavam histórico de mastigação de noz-de-areca há mais de 1 ano e não apresentavam sintomas clínicos de OSMF.
- Voluntários humanos saudáveis com indicação para extração de dente e sem características clínicas de OSMF e sem histórico de hábitos
Critério de exclusão:
- Pacientes que tiveram distúrbios hemorrágicos
- pacientes diagnosticados com distúrbios das glândulas salivares que podem alterar o fluxo ou a composição salivar
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Paciente com hábitos e tendo OSMF
Pacientes com histórico de hábito de mascar noz de areca em qualquer forma e composição e que não foram submetidos a nenhum tratamento para sua condição atual, ou seja, OSMF
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amostras de biópsia para coloração IHC e PCR
Amostras de saliva para análise de expressão de miRNA 21
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Pacientes com hábitos e sem sintomas clínicos de OSMF
Pacientes que apresentavam história de hábito mastigatório de noz-de-areca em qualquer forma e composição e não apresentavam sintomas clínicos de OSMF
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amostras de biópsia para coloração IHC e PCR
Amostras de saliva para análise de expressão de miRNA 21
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Voluntários humanos saudáveis
pacientes que não relataram história de hábitos de mastigação de nozes e não apresentavam sintomas clínicos de OSMF
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amostras de biópsia para coloração IHC e PCR
Amostras de saliva para análise de expressão de miRNA 21
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Mudança na expressão dos níveis de E-caderina em todos os grupos em IHC
Prazo: 10 dias a partir da coleta da amostra
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Para IHC: O critério usado para definir células E-caderina positivas foi coloração marrom na membrana celular de células epiteliais; a porcentagem de células coradas positivamente foi classificada como - Porcentagem de PONTUAÇÃO DE CÉLULAS POSITIVAS Sem células 0 ≤ 10% 1 11% -50% 2 51%-80% 3 ≥81% 4 A intensidade da coloração também foi avaliada em comparação com o tecido de controle positivo e pontuada de acordo PONTUAÇÃO DE INTENSIDADE Negativo 0 Fraco 1 Moderado 2 Forte 3 |
10 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão dos níveis de vimentina em todos os grupos em IHC
Prazo: 10 dias a partir da coleta da amostra
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células positivas para vimentina apresentavam coloração marrom no citoplasma das células epiteliais; a porcentagem de células coradas positivamente foi classificada como - Porcentagem de PONTUAÇÃO DE CÉLULAS POSITIVAS Sem células 0 ≤ 10% 1 11% -50% 2 51%-80% 3 ≥81% 4 A intensidade da coloração também foi avaliada em comparação com o tecido de controle positivo e pontuada de acordo PONTUAÇÃO DE INTENSIDADE Negativo 0 Fraco 1 Moderado 2 Forte 3 |
10 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão dos níveis de colágeno IV em todos os grupos em IHC
Prazo: 10 dias a partir da coleta da amostra
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as células positivas para colágeno IV apresentavam coloração marrom nas células da membrana basal; a porcentagem de células coradas positivamente foi classificada como - Porcentagem de PONTUAÇÃO DE CÉLULAS POSITIVAS Sem células 0 ≤ 10% 1 11% -50% 2 51%-80% 3 ≥81% 4 A intensidade da coloração também foi avaliada em comparação com o tecido de controle positivo e pontuada de acordo PONTUAÇÃO DE INTENSIDADE Negativo 0 Fraco 1 Moderado 2 Forte 3 |
10 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão do miRNA 21 em todos os três grupos usando Real Time-PCR
Prazo: 10 dias a partir da coleta da amostra
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Considerando a expressão do miRNA21 na amostra normal (N) como 1, foi calculada a expressão de todas as amostras A fórmula utilizada é: número de cópias = (quantidade * 6,022x1023) / (comprimento * 1x109 * 650)
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10 dias a partir da coleta da amostra
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ALTERAÇÃO nos níveis de caderina E em PCR
Prazo: 20 dias após a coleta da amostra
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Após a extração do DNA das amostras de biópsia, os primers para E-caderina foram projetados usando o software Primer Express, sintetizados e purificados por HPLC por PCR em tempo real para quantificação.
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20 dias após a coleta da amostra
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Alteração nos níveis de vimentina na PCR
Prazo: 20 dias após a coleta da amostra
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Após a extração do DNA das amostras de biópsia, os primers para Vimentina foram projetados usando o software Primer Express, sintetizados e purificados por HPLC por PCR em tempo real para quantificação
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20 dias após a coleta da amostra
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Alteração na expressão de e-caderina em relação à categoria da doença clinicamente em pacientes OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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Nível de caderina E em amostras de tecido em relação a diferentes expressões clínicas da doença de acordo com o sistema de classificação de Kerr et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão de e-caderina em relação à categoria da doença histologicamente em pacientes OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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Nível de caderina E em amostras de tecido em relação a diferentes expressões clínicas da doença de acordo com o sistema de classificação de Kanna e Andrade et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Alteração na expressão da vimentina em relação à categoria da doença clinicamente em pacientes com OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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Nível de vimentina em amostras de tecido em relação a diferentes expressões clínicas de acordo com o sistema de classificação de Kerr et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão de vimentina em relação à categoria da doença histologicamente em pacientes com OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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Nível de vimentina em amostras de tecido em relação a diferentes expressões histológicas de acordo com o sistema de classificação de Khanna e Andrade.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Alteração na expressão do colágeno IV em relação à categoria da doença clinicamente em pacientes com OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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Nível de colágeno IV em amostras de tecido em relação a diferentes categorias de expressão clínica de acordo com o sistema de classificação de Kerr et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Alteração na expressão do colágeno IV em relação à categoria da doença histologicamente em pacientes OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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Nível de colágeno IV em amostras de tecido em relação à expressão histológica diferente de acordo com o sistema de classificação de Khanna e Andred et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão do mi RNA 21 em relação à categoria da doença clinicamente em pacientes OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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nível de miRNA 21 em amostras de saliva em relação a diferentes expressões clínicas de OSMF de acordo com o sistema de classificação de Kerr et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Mudança na expressão do mi RNA 21 em relação à categoria da doença histologicamente em pacientes OSMF com hábitos
Prazo: 15 dias a partir da coleta da amostra
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nível de miRNA 21 em amostras de saliva em relação à expressão histológica diferente de acordo com o sistema de classificação de Khanna e Andred et al.
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15 dias a partir da coleta da amostra
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Colaboradores e Investigadores
Colaboradores
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (REAL)
Conclusão Primária (REAL)
Conclusão do estudo (REAL)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (REAL)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (REAL)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- Oxford DC
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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