Nabłonkowe markery przejścia mezenchymalnego w OSMF
Ocena ryzyka transformacji złośliwej w zwłóknieniu podśluzówkowym jamy ustnej przy użyciu sygnatur przejścia mezenchymalnego nabłonka (EMT) w próbkach tkanek i ślinie
Zwłóknienie podśluzówkowe jamy ustnej (OSMF) jest zasadniczo zaburzeniem równowagi między metabolizmem kolagenu a mechanizmem gojenia się ran wywołanym nawykiem żucia orzecha arekana. Klinicznie choroba postępuje etapami, u pacjentów występuje uczucie pieczenia, nietolerancja ostrych potraw, pęcherzyki, zwłaszcza na podniebieniu, owrzodzenie i suchość w jamie ustnej, zwłóknienie błony śluzowej jamy ustnej, prowadzące do sztywności warg, języka i podniebienia, aw końcu szczękościsk. Ponieważ choroba stopniowo wyniszcza i może przekształcić się w nowotwór złośliwy, zaprojektowano badanie mające na celu ocenę, czy istnieją jakiekolwiek markery tkankowe lub ślinowe, które można ocenić pod kątem wczesnej diagnozy i wskazać transformację złośliwą, jeśli taka istnieje.
Uczestnicy, którzy mieli OSMF i historię nawyku, pacjenci bez OSMF, ale z historią nałogu, tworzyli grupę przypadków, w której jako normalni pacjenci bez OSMF i bez historii nawyku byli w grupie kontrolnej. Kwalifikujący się kandydaci, którzy wyrazili zgodę na udział w badaniu, zostali poddani procedurze biopsji oraz pobrano od nich próbki śliny. Próbki biopsji poddano immunohistochemii (IHC) i reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) w celu oceny markerów EMT, takich jak wimentyna, e-kadheryna i kolagen IV. Kopie miRNA ekstrahowano ze śliny i poddano RT-PCR.
Pytanie badawcze brzmiało:
- Czy EMT jest pozytywnym podpisem w OSMF.
- Czy ocena histopatologiczna i dysplazja w OSMF mają jakikolwiek związek z EMT.
- Czy nieprawidłowe markery EMT mogą być wiarygodnym wskaźnikiem oceny ryzyka wczesnej transformacji złośliwej.
- Czy ekspresja mi RNA 21 w ślinie może przewidywać ciężkość choroby i, co ważniejsze, oceniać ryzyko wczesnej transformacji złośliwej w OSMF.
Przegląd badań
Status
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Przejście nabłonkowo-mezenchymalne (EMT) opisuje proces, w którym komórki tracą swoje właściwości nabłonkowe i przyjmują fenotyp bardziej mezenchymalny i inwazyjny. Ciągła wymiana molekularna między komórkami nabłonkowymi i mezenchymalnymi jest wymagana podczas rozwoju embrionalnego (przejście mezenchymalne nabłonka) i prawdopodobnie odgrywa ważną rolę w procesach patologicznych, takich jak gojenie się ran i progresja guza. Rozwój raków jest spowodowany zmianami genetycznymi w docelowym nabłonku. Ponieważ dochodzi do konwersji normalnego nabłonka do potencjalnie złośliwego i raka płaskonabłonkowego, zrąb również zmienia się z normalnego na aktywowany lub związany z nowotworem, zwany reakcją zrębu. 10 EMT może generować komórki mezenchymalne, które wyrażają α-aktynę mięśni gładkich (αSMA), jak widać w miofibroblastach. Nie jest jednak jasne, czy funkcjonalne miofibroblasty obserwowane w zwłóknieniu lub raku pochodzącym z komórek nabłonka lub śródbłonka
Dlatego w tym badaniu oceniono markery EMT w OSMF. następujące znaczniki wybrane jako:
- miRNA-21 reguluje proliferację komórek, apoptozę i przejście nabłonka w mezenchymę podczas progresji nowotworu i jest regulowany w górę w różnych nowotworach. Zwiększoną ekspresję miRNA-21 obserwuje się w miofibroblastach.12 Ponieważ znamy rolę miofibroblastów w OSMF, jako marker włączono ekspresję mi RNA-21 w ślinie.
- Kolagen typu IV ma unikalną cechę samoasocjacji poprzez wewnątrzcząsteczkowe wiązania kowalencyjne, zapewniając błonom podstawnym właściwości barierowe i mechaniczne. Zwiększone odkładanie kolagenu w OSMF obejmuje liczne fibroblasty, które są przekształcane w miofibroblasty znalezione w skrawkach histologicznych próbek tkanek. wykazano, że zmienione mikrośrodowisko lub zrąb, takie jak przetrwałe miofibroblasty, powoduje tworzenie się nowotworów i progresję nowotworu
Kadheryny są klasą białek transbłonowych typu 1, znanych z zależnej od wapnia właściwości adhezji komórka-komórka. E-kadheryny należą do tej rodziny białek występujących w komórkach nabłonkowych, które odgrywają ważną rolę w adhezji komórek, zapewniając wiązanie komórek w tkankach. Utrata funkcji lub ekspresji E-kadheryny jest związana z progresją raka i tworzeniem przerzutów. Ekspresja E-kadheryny w nabłonku głowy i szyi jest niezbędna do morfogenezy i homeostazy tkanek nabłonkowych. Kontakty komórka-komórka, w których pośredniczy kadheryna, są wymagane do zależnego od zakotwiczenia wzrostu komórek nabłonka.
Stąd niższa ekspresja E-kadheryny jest oznaką utraty integralności nabłonka
- Wimentyna, białko filamentu pośredniego, bierze udział w regulacji zachowania, morfologii i właściwości mechanicznych komórek. Wimentyna jest markerem EMT wyrażanym w tkance łącznej. Ekspresja wimentyny w nabłonku jest pozytywną sygnaturą EMT, a jej ocena w OSMF może ujawnić znaczenie sygnatury EMT w zwłóknieniu jamy ustnej.
Typ studiów
Zapisy (Rzeczywisty)
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
Akceptuje zdrowych ochotników
Płeć kwalifikująca się do nauki
Metoda próbkowania
Badana populacja
Opis
Kryteria przyjęcia:
- Każdy pacjent, u którego występował nawyk żucia orzechów arekatu z klinicznymi objawami OSMF.
- Pacjenci, u których nawyk żucia orzeszków ziemnych trwał ponad 1 rok i nie mieli klinicznych objawów OSMF.
- Zdrowi ochotnicy, którzy są wskazani do ekstrakcji zęba i nie mieli klinicznych cech OSMF ani historii nawyku
Kryteria wyłączenia:
- Pacjenci z zaburzeniami krzepnięcia
- pacjentów, u których zdiagnozowano zaburzenia gruczołów ślinowych, które mogą zmieniać przepływ lub skład śliny
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Pacjent z przyzwyczajeniami i mający OSMF
Pacjenci, u których w przeszłości występował nawyk żucia orzechów arekatu w dowolnej postaci i składzie, i którzy nie byli poddawani żadnemu leczeniu z powodu ich obecnego stanu, tj. OSMF
|
próbki biopsji do barwienia IHC i PCR
Próbki śliny do analizy ekspresji miRNA 21
|
|
Pacjenci z przyzwyczajeniami i bez objawów klinicznych OSMF
Pacjenci, u których w wywiadzie występował nawyk żucia orzechów arekatu w dowolnej postaci i składzie oraz nie mieli klinicznych objawów OSMF
|
próbki biopsji do barwienia IHC i PCR
Próbki śliny do analizy ekspresji miRNA 21
|
|
Zdrowi ochotnicy
pacjentów, którzy nie zgłosili żadnych nawyków związanych z przeżuwaniem orzechów arachidowych i nie mieli klinicznych objawów OSMF
|
próbki biopsji do barwienia IHC i PCR
Próbki śliny do analizy ekspresji miRNA 21
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Zmiana ekspresji poziomów E-kadheryny we wszystkich grupach w IHC
Ramy czasowe: 10 dni od pobrania próbki
|
Dla IHC: Kryteria zastosowane do zdefiniowania komórek E-kadheryno-dodatnich obejmowały brązowe wybarwienie błony komórkowej komórek nabłonka; procent dodatnio wybarwionych komórek oceniano jako - Procent DODATNICH KOMÓREK WYNIK Brak komórek 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51% -80% 3 ≥81% 4 Oceniono również intensywność barwienia w porównaniu z tkanką kontroli pozytywnej i odpowiednio oceniono SCORE INTENSYWNOŚCI Negatywny 0 Słaby 1 Umiarkowany 2 Silny 3 |
10 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji poziomów wimentyny we wszystkich grupach w IHC
Ramy czasowe: 10 dni od pobrania próbki
|
komórki wimentynododatnie wybarwiły się na brązowo w cytoplazmie komórek nabłonka; procent dodatnio wybarwionych komórek oceniano jako - Procent DODATNICH KOMÓREK WYNIK Brak komórek 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51% -80% 3 ≥81% 4 Oceniono również intensywność barwienia w porównaniu z tkanką kontroli pozytywnej i odpowiednio oceniono SCORE INTENSYWNOŚCI Negatywny 0 Słaby 1 Umiarkowany 2 Silny 3 |
10 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana w ekspresji poziomów kolagenu IV we wszystkich grupach w IHC
Ramy czasowe: 10 dni od pobrania próbki
|
komórki kolagenu IV dodatnie wybarwiły się na brązowo w komórkach błony podstawnej; procent dodatnio wybarwionych komórek oceniano jako - Procent DODATNICH KOMÓREK WYNIK Brak komórek 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51% -80% 3 ≥81% 4 Oceniono również intensywność barwienia w porównaniu z tkanką kontroli pozytywnej i odpowiednio oceniono SCORE INTENSYWNOŚCI Negatywny 0 Słaby 1 Umiarkowany 2 Silny 3 |
10 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana w ekspresji miRNA 21 we wszystkich trzech grupach przy użyciu Real Time-PCR
Ramy czasowe: 10 dni od pobrania próbki
|
Biorąc pod uwagę ekspresję miRNA21 w normalnej próbce (N) jako 1, obliczono ekspresję wszystkich próbek. Stosowany wzór to: liczba kopii = (ilość * 6,022x1023) / (długość * 1x109 * 650)
|
10 dni od pobrania próbki
|
|
ZMIANA poziomów kadheryny E w PCR
Ramy czasowe: 20 dni po pobraniu próbki
|
Po ekstrakcji DNA z próbek pobranych z biopsji startery dla E-kadheryny zaprojektowano przy użyciu oprogramowania Primer Express, zsyntetyzowano i oczyszczono metodą HPLC do PCR w czasie rzeczywistym w celu oznaczenia ilościowego.
|
20 dni po pobraniu próbki
|
|
Zmiana poziomów wimentyny w PCR
Ramy czasowe: 20 dni po pobraniu próbki
|
Po ekstrakcji DNA z próbek pobranych z biopsji startery dla wimentyny zaprojektowano przy użyciu oprogramowania Primer Express, zsyntetyzowano i oczyszczono metodą HPLC do PCR w czasie rzeczywistym w celu oceny ilościowej
|
20 dni po pobraniu próbki
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Zmiana ekspresji e-kadheryny w odniesieniu do kategorii choroby klinicznie u pacjentów z nawykami OSMF
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom kadheryny E w próbkach tkanek w odniesieniu do różnych objawów klinicznych choroby według systemu klasyfikacji Kerr i wsp.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji e-kadheryny w odniesieniu do kategorii choroby histologicznie u pacjentów OSMF z nawykami
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom kadheryny E w próbkach tkanek w odniesieniu do różnych objawów klinicznych choroby według systemu klasyfikacji Kanna i Andrade et al.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji wimentyny w odniesieniu do kategorii choroby klinicznie u pacjentów z nawykami OSMF
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom wimentyny w próbkach tkanek w odniesieniu do różnych ekspresji klinicznych według systemu klasyfikacji Kerr i wsp.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji wimentyny w odniesieniu do kategorii choroby histologicznie u pacjentów z OSMF z nawykami
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom wimentyny w próbkach tkanek w odniesieniu do różnej ekspresji histologicznej według systemu klasyfikacji Khanna i Andrade.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji kolagenu IV w odniesieniu do kategorii choroby klinicznie u pacjentów z OSMF z nawykami
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom kolagenu IV w próbkach tkanek w odniesieniu do różnych kategorii ekspresji klinicznej według systemu klasyfikacji Kerr i wsp.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji kolagenu IV w odniesieniu do kategorii choroby hstologicznie u pacjentów z OSMF z nawykami
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom kolagenu IV w próbkach tkanek w odniesieniu do różnej ekspresji histologicznej zgodnie z systemem klasyfikacji Khanna i Andred et al.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji mi RNA 21 w odniesieniu do kategorii choroby klinicznie u pacjentów z nawykami OSMF
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom miRNA 21 w próbkach śliny w odniesieniu do różnych Kliniczna ekspresja OSMF według systemu klasyfikacji Kerr i wsp.
|
15 dni od pobrania próbki
|
|
Zmiana ekspresji miRNA 21 w odniesieniu do kategorii choroby histologicznie u pacjentów OSMF z nawykami
Ramy czasowe: 15 dni od pobrania próbki
|
Poziom miRNA 21 w próbkach śliny w odniesieniu do różnej ekspresji histologicznej według systemu klasyfikacji Khanna i Andred et al.
|
15 dni od pobrania próbki
|
Współpracownicy i badacze
Publikacje i pomocne linki
Publikacje ogólne
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (RZECZYWISTY)
Zakończenie podstawowe (RZECZYWISTY)
Ukończenie studiów (RZECZYWISTY)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (RZECZYWISTY)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (RZECZYWISTY)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- Oxford DC
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .