변비 염증 및 미생물 전위 마커 협회

연구 설계 및 모집단

환자 및 방법 2.1. 환자 선택 200명의 혈액투석 환자를 모집합니다. 기능성 변비는 Rome IV 기준에 따라 진단됩니다. 복강 및 골반저의 유기성 병변은 내시경(구불창자내시경, 대장내시경, 위십이지장내시경), 방사선 및 초음파 평가에 의해 모든 환자에서 제외됩니다.

본 연구는 2008년 개정된 헬싱키 선언에 따라 수행될 예정이다. 모든 환자는 연구 참여에 대한 서면 동의서를 제공합니다. Tungs Taichung Metroharbour Hospital의 신장 부서의 모든 환자는 전향적으로 연속적으로 포함되었습니다. 포함 기준은 다음과 같습니다.

1. 3개월 이상 혈액 투석
2. 나이 20세 이상

제외 기준은 만성 염증성 질환의 병력, 현재 감염의 존재, 콜라겐 혈관 질환 또는 면역 조절 또는 면역 억제 치료입니다.

염증성 사이토카인, 에토탁신-1 및 아밀로이드 A 측정

MCP-1, IL-6, CRP, IL-17A 및 칼프로텍틴의 혈장 수준은 제조자의 지시에 따라 상업적으로 이용 가능한 인간 ELISA 키트로 각각 테스트됩니다. 인간 혈청 에오탁신1 수준은 제조업체의 프로토콜에 따라 상용 ELISA 키트(R&D 시스템, 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)를 사용하여 측정한다. 상업적으로 이용 가능한 ELISA 절차는 혈청 내 혈청 아밀로이드 A 농도를 측정하는 데 사용되며,

내독소 및 내독소 Ig M 및 IgG 코어 항체

내독소는 Lonza의 Limulus Amebocyte Lysate QCL-1000(카탈로그 번호 50-647U)(EU/ml)에 의해 혈청에서 측정됩니다. 혈청 또는 혈장 샘플은 LAL 시약수로 1:5 비율로 희석됩니다. 내독소 IgG 코어 항체는 Cell Sciences Inc(카탈로그 # HK504)의 ELISA 키트를 사용하여 혈장에서 측정됩니다. 단위는 제조업체에서 건강한 성인 1000명의 범위 중앙값을 기준으로 한 IgG 표준 중앙값 단위인 GMU/ml로 표시됩니다.

CD14 및 CD16 단핵 표현형의 결정

항응고제로 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 사용하여 정맥 천자에 의해 말초 혈액을 채취합니다. 세포측정 분석을 위해 CD14(플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC) 접합; 클론 RMO52; Beckman Coulter, Miami, FL, USA), CD16(phycoerythrin(PE) 접합; 클론 3G8; Beckman Coulter, Miami, FL, USA), CD45(피코에리트린 시아닌-5(PC5); 클론 J33; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) 및 CD56(클론 IM2073; Beckman Coulter, Miami, FL, USA)이 사용된다. 간단히 말하면, 전혈 100㎕를 포화량의 상기 언급된 단클론 항체 및 상응하는 이소타입 대조군으로 염색한다. 제조업체의 권장 사항에 따라 어둠 속에서 실온에서 15분 동안 배양한 후 OptiLyse C(Beckman Coulter, Miami, FL)를 첨가하여 RBC를 용해하고 샘플을 고정합니다. 고정 세포는 6시간 이내에 유세포분석으로 분석됩니다.

백혈구 및 단핵구 하위 집합 분포의 결정은 FC500-Cytometer(Beckman Coulter)를 사용하여 수행되며 CXP 분석 소프트웨어(버전 2.2)가 사용됩니다(Schroers et al., 2005). 단핵구는 특정 전방 및 측면 산란 프로필을 나타내는 CD45 양성 및 CD56 음성 세포로 식별됩니다. 그런 다음 단핵구는 SSC/CD 도트 플롯에서 게이팅되어 단핵구 산란 특성을 가진 CD86 세포로 단핵구를 식별합니다. CD16이 있거나 없는 CD14 단핵구의 서브세트는 지질다당류 수용체 CD14 및 CD16(Fc감마 수용체 III)의 표면 발현 패턴에 따라 정의됩니다. 각 샘플에서 백만 개의 세포를 분석하고 CD16 양성 단핵 세포(CD14+/CD16+ 및 CD14++/CD16+)의 백분율과 전체 단핵구 중 세포 수를 형광 마이크로비드(Flow-Count, Beckman Coulter)를 사용하여 비교합니다. 본 연구에서는 CD86 항체(클론 HA5.2B7; Beckman Coulter, Miami, FL, USA)를 사용하였다.

sCD14, LBP, 조눌린 및 I-FABP 분석

LBP 및 sCD14 마커는 미생물 전위를 모니터링하는 데 사용되는 반면 Zonulin 및 I-FABP는 장 투과성을 조사하기 위해 측정됩니다. LBP 혈장 수준은 제조업체의 권장 사항에 따라 무료 인간 LBP ELISA 키트의 정량화를 위한 효소 면역분석을 사용하여 측정됩니다. 희석 배율은 1:800입니다. sCD14의 혈장 수준은 제조업체의 사양에 따라 Human sCD14 키트를 사용하여 측정됩니다. 희석 배율은 1:200입니다. 조눌린 혈청 수준은 인간 조눌린 ELISA 키트를 사용하여 측정됩니다. I-FABP 혈장 수준은 제조업체의 권장 사항에 따라 ELISA 키트로 측정됩니다.