A székrekedés gyulladásos és mikrobiális transzlokációs markereinek társulása

Tanulmánytervezés és népesség

Betegek és módszerek 2.1. Betegválasztás Kétszáz hemodializált beteget vesznek fel. A funkcionális székrekedést a Róma IV kritériumai szerint diagnosztizálják. A hasüreg és a medencefenék szervi elváltozásait endoszkópos (szigmoidoszkópia, kolonoszkópia, gastroduodenoszkópia), radiológiai és ultrahangos értékeléssel minden betegnél kizárjuk.

Ezt a tanulmányt a 2008-ban felülvizsgált Helsinki Nyilatkozatnak megfelelően készítik el. Minden beteg írásos beleegyezését adja a vizsgálatban való részvételhez. A Tungs Taichung Metroharbour Kórház vese részlegében lévő összes beteget prospektívan és egymást követően bevonták. A felvételi kritériumok a következők

1. Hemodialízis több mint 3 hónapig
2. Életkor 20 évnél idősebb

A kizárási kritériumok az anamnézisben szereplő krónikus gyulladásos betegség, aktuális fertőzés jelenléte, kollagén érbetegség vagy immunmoduláló vagy immunszuppresszív kezelés.

A gyulladásos citokinek, az etotaxin-1 és az amiloid A mérése

Az MCP-1, IL-6, CRP, IL-17A és kalprotektin plazmaszintjét a kereskedelemben kapható humán ELISA kittel vizsgálják, a gyártó utasításai szerint. A humán szérum eotaxin1 szintjét kereskedelmi ELISA készlettel (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) határozzuk meg a gyártó protokollja szerint. A kereskedelemben kapható ELISA eljárást használják a szérum amiloid A koncentrációjának mérésére a szérumban,

Endotoxin és Endotoxin Ig M, valamint IgG magantitest

Az endotoxint a szérumban a Limulus Amebocyte Lysate QCL-1000 (Lonza katalógusszám: 50-647U) (EU/ml) méri. A szérum- vagy plazmamintákat 1∶5 arányban hígítjuk LAL reagens vízzel. Az endotoxin IgG magantitesteket a plazmában mérjük a Cell Sciences Inc (Katalógusszám: HK504) ELISA kittel. Az egységek GMU/ml-ben vannak kifejezve, amelyek a gyártó által 1000 egészséges felnőtt tartományának mediánjain alapuló IgG standard medián egységek.

A CD14 és CD16 mononukleáris fenotípus meghatározása

A perifériás vért vénapunkcióval gyűjtik, antikoagulánsként etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) használva. Citometriás elemzéshez: CD14 elleni monoklonális antitestek (fluoreszcein-izotiocianát (FITC) konjugált; RMO52 klón; Beckman Coulter, Miami, FL, USA), CD16 (fikoeritrin (PE) konjugált; 3G8 klón; Beckman Coulter, FL, Miami), CD45-öt (fikoeritrin-cianin-5 (PC5); J33 klón; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) és CD56-ot (IM2073 klón; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) használunk. Röviden, 100 l teljes vért festünk telítő mennyiségű fent említett monoklonális antitesttel és a megfelelő izotípus kontrollokkal. 15 perces, sötétben, szobahőmérsékleten végzett inkubálás után a gyártó ajánlásai szerint OptiLyse C-t (Beckman Coulter, Miami, FL) adunk a vörösvértestek líziséhez, és a mintákat rögzítjük. A rögzített sejteket áramlási citometriával elemezzük 6 órán belül.

A leukociták és monociták részhalmaz eloszlásának meghatározását FC500-Cytometer (Beckman Coulter) segítségével végezzük, és CXP elemző szoftvert (2.2-es verzió) használunk (Schroers et al., 2005). A monocitákat CD45-pozitív és CD56-negatív sejtekként azonosítják, amelyek specifikus előre és oldalirányú szórási profilt mutatnak. A monocitákat ezután SSC/CD pontdiagramon kapuzzuk, a monocitákat monocitaszórási tulajdonságokkal rendelkező CD86-sejtekként azonosítva. A CD14-monociták CD16-ot tartalmazó és anélküli részhalmazait a CD14 lipopoliszacharid receptor és a CD16 (Fcgamma receptor III) felszíni expressziós mintázata alapján határozzuk meg. Minden mintából egymillió sejtet elemeznek, és a CD16 pozitív mononukleáris sejtek százalékos arányát (CD14+/CD16+ és CD14++/CD16+) és az összes monocitából származó sejtek számát fluoreszcens mikrogyöngyök (Flow-Count, Beckman Coulter) segítségével hasonlítják össze. Ebben a vizsgálatban a CD86 antitestet (HA5.2B7 klón; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) használjuk.

sCD14, LBP, zonulin és I-FABP vizsgálatok

Az LBP és sCD14 markereket a mikrobiális transzlokáció monitorozására, míg a Zonulin és az I-FABP mérését a bélpermeabilitás feltárására használják: Az LBP plazmaszintjét Enzyme Immunoassay for Quantification of free humán LBP ELISA kit segítségével mérik, a gyártó ajánlásai szerint. A hígítási tényező 1:800. Az sCD14 plazmaszintjét Human sCD14 kittel mérjük a gyártó specifikációi szerint. A hígítási tényező 1:200. A zonulin szérumszintjét Human zonulin ELISA kit segítségével mérjük. Az I-FABP plazmaszintjét ELISA kittel mérik a gyártó ajánlásai szerint.