Ummetuksen tulehduksellisten ja mikrobisten translokaatiomerkkien yhdistys

Tutkimussuunnittelu ja väestö

Potilaat ja menetelmät 2.1. Potilaiden valinta Hemodialyysipotilaita rekrytoidaan kaksisataa. Funktionaalinen ummetus diagnosoidaan Rooma IV -kriteerien mukaan. Vatsaontelon ja lantionpohjan orgaaniset leesiot suljetaan pois kaikilta potilailta endoskooppisella (sigmoidoskopia, kolonoskopia, gastroduodenoskopia), radiologisella ja ultraäänitutkimuksella.

Tämä tutkimus toteutetaan vuonna 2008 uudistetun Helsingin julistuksen mukaisesti. Kaikki potilaat antavat kirjallisen tietoisen suostumuksensa osallistua tutkimukseen. Kaikki Tungs Taichung Metroharbour -sairaalan munuaisosaston potilaat otettiin mukaan tulevaisuuteen ja peräkkäin. Sisällön kriteerit ovat

1. Hemodialyysi yli 3 kuukautta
2. Ikä yli 20 vuotta vanha

Poissulkemiskriteerit ovat aiempi krooninen tulehdussairaus, nykyinen infektio, kollageeniverisuonisairaus tai immunomoduloiva tai immuunivastetta heikentävä hoito.

Tulehduksellisten sytokiinien, etotaksiini-1:n ja amyloidi A:n mittaukset

MCP-1:n, IL-6:n, CRP:n, IL-17A:n ja kalprotektiinin plasmatasot testataan vastaavasti kaupallisesti saatavalla ihmisen ELISA-sarjalla valmistajan ohjeiden mukaisesti. Ihmisen seerumin eotaksiini1-tasot määritetään käyttämällä kaupallista ELISA-sarjaa (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) valmistajan protokollan mukaisesti. Kaupallisesti saatavaa ELISA-menetelmää käytetään seerumin amyloidi-A-pitoisuuden mittaamiseen,

Endotoksiini ja endotoksiini Ig M sekä IgG-ydinvasta-aine

Endotoksiini mitataan seerumista Limulus Amebocyte Lysate QCL-1000:lla Lonzasta (luettelo # 50-647U) (EU/ml). Seerumi- tai plasmanäytteet laimennetaan suhteessa 1∶5 LAL-reagenssivedellä. Endotoksiinin IgG-ydinvasta-aineet mitataan plasmasta käyttämällä Cell Sciences Inc:n ELISA-kittiä (luettelonumero HK504). Yksiköt ilmaistaan ​​GMU:na/ml, jotka ovat IgG-standardin mediaaniyksiköitä, jotka perustuvat valmistajan 1000 terveen aikuisen vaihteluvälin mediaaneihin.

CD14- ja CD16-mononukleaarisen fenotyypin määritys

Perifeerinen veri kerätään laskimopunktiolla käyttämällä etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) antikoagulanttina. Sytometriseen analyysiin monoklonaaliset vasta-aineet CD14:ää vastaan ​​(fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC) konjugoitu; klooni RMO52; Beckman Coulter, Miami, FL, USA), CD16 (fykoerytriini (PE) konjugoitu; klooni 3G8; Beckman Coulter, Miami, USA), Käytetään CD45:tä (fykoerytriinisyaniini-5 (PC5); klooni J33; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) ja CD56:ta (klooni IM2073; Beckman Coulter, Miami, FL, USA). Lyhyesti sanottuna 100 litraa kokoverta värjätään kyllästetyillä määrillä edellä mainittuja monoklonaalisia vasta-aineita ja vastaavia isotyyppikontrolleja. 15 minuutin inkuboinnin jälkeen huoneenlämmössä pimeässä valmistajan suositusten mukaisesti OptiLyse C:tä (Beckman Coulter, Miami, FL) lisätään punasolujen hajottamiseksi ja näytteet kiinnitetään. Kiinteät solut analysoidaan virtaussytometrialla 6 tunnin sisällä.

Leukosyyttien ja monosyyttien alajoukkojakauma määritetään käyttämällä FC500-sytometriä (Beckman Coulter) ja CXP-analyysiohjelmistoa (versio 2.2) käytetään (Schroers et al., 2005). Monosyytit tunnistetaan CD45-positiivisiksi ja CD56-negatiivisiksi soluiksi, joilla on spesifinen eteenpäin- ja sivusuuntainen sirontaprofiili. Monosyytit avainnoidaan sitten SSC/CD-pistekaavioon, jolloin monosyytit tunnistetaan CD86-soluiksi, joilla on monosyyttisirontaominaisuuksia. CD14-monosyyttien alajoukot CD16:n kanssa ja ilman, määritellään lipopolysakkaridireseptorin CD14 ja CD16 (Fcgamma-reseptori III) pintaekspressiomallin mukaan. Miljoona solua analysoidaan kustakin näytteestä, ja CD16-positiivisten mononukleaarisolujen (CD14+/CD16+ ja CD14++/CD16+) prosenttiosuutta ja solujen määrää monosyyttien kokonaismäärästä verrataan käyttämällä fluoresoivia mikrohelmiä (Flow-Count, Beckman Coulter). Tässä tutkimuksessa käytetään CD86-vasta-ainetta (klooni HA5.2B7; Beckman Coulter, Miami, FL, USA).

sCD14-, LBP-, zonuliini- ja I-FABP-määritykset

LBP- ja sCD14-markkereita käytetään mikrobien translokaation seuraamiseen, kun taas Zonuliinia ja I-FABP:tä mitataan suoliston läpäisevyyden tutkimiseksi: LBP-plasmatasot mitataan käyttämällä Enzyme Immunoassay for Quantification of Free Human LBP ELISA -pakkausta valmistajan suositusten mukaisesti. Laimennuskerroin on 1:800. sCD14:n plasmataso mitataan käyttämällä Human sCD14 -sarjaa valmistajan ohjeiden mukaisesti. Laimennuskerroin on 1:200. Zonuliinin seerumitasot mitataan käyttämällä Human Zonulin ELISA -kittiä. Plasman I-FABP-tasot mitataan ELISA-sarjalla valmistajan suositusten mukaisesti.