Association of Constipation Inflammatory and Microbial Translocation Markers

Studiedesign og befolkning

Patienter og metoder 2.1. Patientvalg 200 hæmodialysepatienter rekrutteres. Funktionel obstipation vil blive diagnosticeret i henhold til Rom IV-kriterierne. Organiske læsioner i bughulen og bækkenbunden er udelukket hos alle patienter ved endoskopisk (sigmoidoskopi, koloskopi, gastroduodenoskopi), radiologisk og ultralydsundersøgelse.

Denne undersøgelse vil blive udført i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen som revideret i 2008. Alle patienter vil give skriftligt informeret samtykke til at deltage i undersøgelsen. Alle patienter i nyreafdelingen på Tungs Taichung Metroharbour Hospital blev prospektivt og konsekutivt inkluderet. Inklusionskriterierne er

1. Hæmodialyse i mere end 3 måneder
2. Alder ældre end 20 år

Eksklusionskriterierne er en historie med kronisk inflammatorisk sygdom, tilstedeværelsen af ​​aktuel infektion, kollagen karsygdom eller immunmodulerende eller immunsuppressiv behandling.

Målinger af inflammatoriske cytokiner, etotaxin-1 og amyloid A

Plasmaniveauerne af MCP-1, IL-6, CRP, IL-17A og calprotectin testes med henholdsvis kommercielt tilgængeligt humant ELISA-kit i henhold til producentens instruktioner. Humant serum-eotaxin1-niveauer bestemmes ved hjælp af et kommercielt ELISA-kit (R&D-systemer, Minneapolis, MN, USA) i henhold til producentens protokol. Den kommercielt tilgængelige ELISA-procedure bruges til at måle serumamyloid A-koncentrationen i serum,

Endotoxin og Endotoxin Ig M samt IgG kerneantistof

Endotoxin måles i serum af Limulus Amebocyte Lysate QCL-1000 fra Lonza (katalog # 50-647U)(EU/ml). Serum- eller plasmaprøver fortyndes i forholdet 1∶5 med LAL-reagensvand. Endotoksin IgG-kerneantistoffer måles i plasma ved anvendelse af et ELISA-kit fra Cell Sciences Inc (katalog # HK504). Enheder er udtrykt som GMU/ml, som er IgG-standard medianenheder baseret på medianer i intervaller på 1000 raske voksne af producenten.

Bestemmelse af CD14 og CD16 mononukleær fænotype

Perifert blod vil blive opsamlet ved venepunktur med ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) som antikoagulant. Til cytometrisk analyse, monoklonale antistoffer mod CD14 (fluorescein isothiocyanat (FITC) konjugeret; klon RMO52; Beckman Coulter, Miami, FL, USA), CD16 (phycoerythrin (PE) konjugeret; klon 3G8; Beckman Coulter, Miami, FL, USA), CD45 (phycoerythrin cyanin-5 (PC5); klon J33; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) og CD56 (klon IM2073; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) anvendes. Kort fortalt farves 100 l af fuldblodet med mættende mængder af de ovennævnte monoklonale antistoffer og tilsvarende isotypekontroller. Efter inkubation i 15 minutter ved stuetemperatur i mørke i henhold til producentens anbefalinger tilsættes OptiLyse C (Beckman Coulter, Miami, FL) for at lysere RBC, og prøverne fikseres. Faste celler analyseres ved flowcytometri inden for 6 timer.

Bestemmelse af leukocyt- og monocytundersætfordeling udføres ved hjælp af et FC500-Cytometer (Beckman Coulter), og CXP-analysesoftware (version 2.2) anvendes (Schroers et al., 2005). Monocytter identificeres som CD45-positive og CD56-negative celler, der udviser en specifik spredningsprofil fremad og sidelæns. Monocytter gates derefter i et SSC/CD-punktplot, der identificerer monocytter som CD86-celler med monocytspredningsegenskaber. Undersæt af CD14-monocytter med og uden CD16 er defineret i overensstemmelse med overfladeekspressionsmønsteret af lipopolysaccharid-receptoren CD14 og CD16 (Fcgamma-receptor III). En million celler analyseres fra hver prøve, og procentdelen af ​​CD16-positive mononukleære celler (CD14+/CD16+ og CD14++/CD16+) og antallet af celler ud af de samlede monocytter sammenlignes med fluorescerende mikroperler (Flow-Count, Beckman Coulter). CD86-antistoffet (klon HA5.2B7; Beckman Coulter, Miami, FL, USA) anvendes i denne undersøgelse.

sCD14, LBP, zonulin og I-FABP assays

LBP- og sCD14-markører bruges til at overvåge den mikrobielle translokation, mens Zonulin og I-FABP måles for at udforske intestinal permeabilitet: LBP-plasmaniveauer måles ved hjælp af enzymimmunoassay til kvantificering af frit humant LBP ELISA-kit i henhold til producentens anbefalinger. Fortyndingsfaktor er 1:800. Plasmaniveauet af sCD14 måles ved hjælp af Human sCD14-kit i henhold til producentens specifikationer. Fortyndingsfaktor er 1:200. Zonulinserumniveauer måles ved hjælp af Human zonulin ELISA-kit. I-FABP plasmaniveauer måles med ELISA kit i henhold til producentens anbefalinger.