便秘炎症和微生物易位标志物协会

研究设计和人口

患者和方法 2.1。 患者选择招募了 200 名血液透析患者。 功能性便秘将根据罗马 IV 标准进行诊断。 通过内窥镜检查（乙状结肠镜检查、结肠镜检查、胃十二指肠镜检查）、放射学和超声评估，排除所有患者的腹腔和盆底器质性病变。

本研究将根据 2008 年修订的赫尔辛基宣言进行。 所有患者都将提供书面知情同意书以参与该研究。 Tungs Taichung Metroharbourhospital 肾脏科的所有患者均前瞻性和连续纳入。 纳入标准是

1. 血液透析3个月以上
2. 年龄大于20岁

排除标准是慢性炎症病史、当前感染、胶原血管疾病或免疫调节或免疫抑制治疗的存在。

炎性细胞因子、etotaxin-1 和淀粉样蛋白 A 的测量

MCP-1、IL-6、CRP、IL-17A和钙卫蛋白的血浆水平分别通过市售的人ELISA试剂盒根据制造商的说明进行检测。 根据制造商的方案，使用商业 ELISA 试剂盒（R&D 系统，明尼苏达州明尼阿波利斯，美国）确定人血清嗜酸细胞趋化因子 1 水平。 市售的 ELISA 程序用于测量血清中的血清淀粉样蛋白 A 浓度，

内毒素和内毒素Ig M以及IgG核心抗体

通过来自 Lonza 的鲎变形细胞裂解物 QCL-1000（目录号 #50-647U）(EU/ml) 测量血清中的内毒素。 血清或血浆样品用 LAL 试剂水按 1∶5 的比例稀释。 使用 Cell Sciences Inc（目录号 HK504）的 ELISA 试剂盒测量血浆中的内毒素 IgG 核心抗体。 单位表示为 GMU/ml，这是制造商基于 1000 名健康成年人范围中值的 IgG 标准中值单位。

CD14 和 CD16 单核表型的测定

使用乙二胺四乙酸 (EDTA) 作为抗凝剂通过静脉穿刺收集外周血。 对于细胞计数分析，针对 CD14 的单克隆抗体（偶联异硫氰酸荧光素 (FITC)；克隆 RMO52；贝克曼库尔特公司，迈阿密，佛罗里达州，美国），CD16（藻红蛋白 (PE) 偶联物​​；克隆 3G8；贝克曼库尔特公司，迈阿密，佛罗里达州，美国），使用 CD45（藻红蛋白蓝蛋白 5 (PC5)；克隆 J33；贝克曼库尔特公司，迈阿密，佛罗里达州，美国）和 CD56（克隆 IM2073；贝克曼库尔特公司，迈阿密，佛罗里达州，美国）。 简而言之，用饱和量的上述单克隆抗体和相应的同种型对照对 100 μl 全血进行染色。 根据制造商的建议在室温下在黑暗中孵育 15 分钟后，添加 OptiLyse C（Beckman Coulter，迈阿密，佛罗里达州）以裂解 RBC 并固定样品。 固定细胞在 6 小时内通过流式细胞仪进行分析。

使用 FC500-Cytometer (Beckman Coulter) 进行白细胞和单核细胞亚群分布的测定，并使用 CXP 分析软件（版本 2.2）（Schroers 等人，2005）。 单核细胞被鉴定为 CD45 阳性和 CD56 阴性细胞，表现出特定的前向和侧向散射特征。 然后在 SSC/CD 点图中对单核细胞进行门控，将单核细胞识别为具有单核细胞散射特性的 CD86+ 细胞。 根据脂多糖受体 CD14 和 CD16（Fcgamma 受体 III）的表面表达模式定义有和没有 CD16 的 CD14 单核细胞亚群。 从每个样本中分析一百万个细胞，并使用荧光微珠（Flow-Count，Beckman Coulter）比较 CD16 阳性单核细胞（CD14+/CD16+ 和 CD14++/CD16+）的百分比和总单核细胞中的细胞数。 本研究使用 CD86 抗体（克隆 HA5.2B7；贝克曼库尔特公司，美国佛罗里达州迈阿密）。

sCD14、LBP、zonulin 和 I-FABP 检测

LBP 和 sCD14 标记用于监测微生物易位，同时测量 Zonulin 和 I-FABP 以探索肠道通透性：根据制造商的建议，使用酶免疫测定法测量 LBP 血浆水平，用于对游离人 LBP ELISA 试剂盒进行定量。 稀释倍数为1:800。 根据制造商的说明，使用人 sCD14 试剂盒测量 sCD14 的血浆水平。 稀释倍数为 1:200。 使用人连蛋白 ELISA 试剂盒测量连蛋白血清水平。 I-FABP 血浆水平是根据制造商的建议通过 ELISA 试剂盒测量的。