미세환경과 남성 생식력의 관계

목표:

1. 16S rRNA 시퀀싱을 사용하여 비식별된 정액 샘플의 미생물을 분석하여 정액에 백혈구가 있는 불임 남성의 비뇨생식기 및 고환 미세 환경의 미생물을 특성화하고, 정상 매개 변수를 사용한 정액의 결과와 백혈구를 사용한 정액의 결과를 비교합니다. .
2. 호르몬 대체 요법으로 치료를 받고 있는 생식선 기능 저하, 불임 남성의 호르몬 대체 요법에 대한 장내 미생물 군집의 영향을 표준 성선기능저하증 치료 전과 과정 중에 수집된 여러 개의 비식별 혈액 샘플 및 직장 면봉을 분석하여 평가합니다. 조사관은 직장 면봉에 대한 16S rRNA 시퀀싱과 혈액 샘플의 호르몬 수준 분석을 사용할 것입니다.

식별 및 등록: 포함 기준을 충족하는 참가자는 표준 환자 치료를 위한 일상적인 차트 검토 중에 의사 공동 조사관에 의해 UIC 비뇨기과 불임 클리닉에서 식별됩니다. 그런 다음 참가자는 연구와 관련하여 접근하고 다음과 같은 내용을 논의합니다: 정보에 입각한 동의 및 그 안의 정보, 인간 미세 환경에 대한 기본 정보 및 평신도 용어의 중요성, 연구 참여가 참가자의 치료에 영향을 미치지 않을 것임을 강조합니다. 참가자가 진행을 선택하면 참여에 대한 동의를 얻습니다. 참가자는 연구에 대한 구두 및 서면 정보를 받게 됩니다. 서면 정보에는 연구에 대한 광범위한 정보와 함께 연구에 대한 이해하기 쉬운 정보가 포함되며 동의서 사본이 포함됩니다.

이러한 참가자의 의료 기록은 아래에 나열된 기본 데이터에 대해 검토되며 생식선 기능 저하의 경우 일상적인 채혈 후 주기적으로 검토됩니다(아래 정맥 천자 참조).

참가자 정보 관리: 참가자의 이름, MRN 및 생년월일은 UIC REDCap 데이터베이스에 저장됩니다. 각 참가자에게는 난수 생성기가 생성한 연구 식별 번호도 할당됩니다. 이 ID 번호는 각 참가자의 생물 표본에 레이블을 지정하는 데 사용됩니다.

정액 수집 및 보관: 남성의 표준 불임 검사의 일환으로 불임 진단이 내려진 후 정액 샘플을 요청합니다. 정액은 UIC Andrology Laboratory(820 S Wood St, Room 132, Chicago, IL 60612)에서 전향적으로 수집됩니다.

참가자는 샘플 수집을 위해 다음에 대해 지시를 받습니다(Hou et al.에서 수정).

1. 금욕 3~7일 후 샘플 제공을 위해 제시합니다.
2. 자위를 하기 전에 비누와 물로 손을 2-3번 씻으십시오.
3. 귀두와 관상고랑을 중심으로 음경을 비누와 물에 이어 75% 알코올로 2~3회 씻으십시오.
4. 시료 용기의 내부 측벽에 시료가 닿지 않도록 하십시오.
5. 0.1mL 이하의 갓 채취한 정액을 표준 정액 분석에 사용합니다.
6. 정액에 둥근 세포가 얼마든지 있는 것으로 확인되면 Papanicolaou 염색으로 백혈구 수를 결정합니다.
7. 나머지 정액은 각 튜브당 최대 1mL가 들어 있는 미세 원심 분리기 튜브로 옮겨지고 수집 후 2시간 이내에 -80C 냉동고에 보관됩니다. -80C 냉동고는 승인된 직원만 접근할 수 있는 UIC 남성학 연구소의 잠긴 방에 있습니다.[7]

정맥 천자: 참가자는 불임의 표준 초기 평가 중에 혈액을 채취합니다. 이는 UIC 정맥 절개 서비스(1801 W Taylor St Room 4B, Chicago, IL 60612) 또는 참가자 선호도에 따라 다른 정맥 절개 사이트 및 실험실에서 수행됩니다. 내분비 프로필은 총 테스토스테론, 에스트라디올, 성 호르몬 결합 글로불린(SHBG), 황체 형성 호르몬(LH), 여포 자극 호르몬(FSH) 및 알부민 수치를 테스트하여 결정됩니다. 이 테스트에는 총 4.9mL의 정맥혈이 필요하므로 정맥에서 총 3개의 금색 바이알을 채취합니다. 생식기능저하증(총 테스토스테론 <300 ng/dL 또는 생체이용 가능한 테스토스테론 <150 ng/dL)으로 확인된 남성은 직장 면봉도 제공해야 합니다(아래 참조). 그들의 상태에 대한 표준 치료의 일환으로, 이 참가자들은 내인성 테스토스테론을 증가시키기 위한 약물(예: 클로미펜 구연산염, 아나스트로졸, 인간 융모막 성선 자극 호르몬 등)을 시작합니다. 또한 표준 치료의 일환으로 이러한 참가자는 내분비 프로파일의 실험실 모니터링을 통해 약물 부작용 및 효능에 대한 정기적인 평가를 위해 다시 방문하도록 요청됩니다. 이것은 주치의의 재량에 따라 3-4개월 간격으로 수행됩니다. 포함 기준을 충족하는 참가자의 실험실 데이터는 연구 ID 번호로 식별되는 비식별화된 REDCap 데이터베이스에 기록됩니다.

직장도말채취 : 1차 추적진료 시 참여자와 검사 결과를 검토한 후, 다른 원인 없이 성선기능저하증에 의한 불임으로 진단된 경우 장내 미생물 분석을 위한 직장도말 채취를 요청받게 됩니다. . 참가자에게 직장 면봉 키트가 제공됩니다. 배변 후 참가자는 면봉을 사용하여 항문에서 샘플을 수집하고 제공된 멸균 비닐 백에 샘플을 반환하도록 요청받습니다. 이것은 안전하고 잠긴 캐비닛에 보관됩니다. 직장 면봉은 후속 혈액 작업과 동일한 시간 간격으로 요청되며 동일한 방식으로 수집 및 저장됩니다.

미생물군 프로파일 특성화: 미생물군 분석은 스페인 발렌시아에 있는 Igenomix 실험실에서 수행할 것입니다(Ronda Narciso Monturiol, 11 B, Parque Tecnológico Paterna, 46980 - Paterna -, Valencia, Spain). 조사관이 참가자 샘플, 정액 및/또는 직장 면봉을 전향적으로 수집한 후에는 논리적으로 가능한 한 처리를 위해 주기적으로 샘플을 Igenomix로 보냅니다. 조사관은 해당되는 경우 참가자당 각 유형의 표본에 대해 1개의 샘플을 보낼 것입니다(즉, 참가자가 보관 냉동고에 있는 3개의 추가 바이알에 대해 충분한 정액을 제공한 경우 1개의 바이알이 Igenomix로 전송됩니다. 참가자도 생식선 기능 저하인 경우 직장 면봉은 위에서 설명한 대로 표시되고 수집된 경우 보내집니다). 이러한 각 샘플은 연구 ID 번호로만 식별되며 PHI가 없습니다. 각 바이알과 관련된 연구 ID 번호만 샘플과 함께 전송되며 PHI는 Igenomix와 공유되지 않습니다. Igenomix 실험실은 각 표본에서 16S rRNA 유전자 시퀀싱을 사용하여 미생물 프로파일링을 수행합니다. 모든 재료는 DNA 추출 및 후속 시퀀싱에 사용되므로 분석 후에는 저장된 샘플이 없습니다. 수집된 모든 데이터는 별도의 UIC REDCap 데이터베이스에 업로드되며 각 샘플의 데이터 세트는 연구 ID 번호로만 다시 식별됩니다.

데이터 분석: Pagani 박사와 UIC 공동 조사자가 데이터 분석을 수행하여 참가자 차트 검토에서 비식별화된 데이터 세트와 Igenomix 실험실에서 제공한 데이터 세트를 사용하여 데이터를 분석합니다.

미생물군 데이터 세트의 피상적인 분석은 우리의 연구 목적과 가설을 다루는 데 적용할 수 있는 정확한 통계 분석을 결정할 것입니다. 조사관은 R 패키지(R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria)와 같은 통계 전산 프로그램을 사용하여 박테리아 미생물 군집 구성 및 풍부도를 평가할 것입니다. 조사관은 Hou et al.에 의해 설명된 것과 같은 공개된 방법을 기반으로 계층적 클러스터링을 생성하여 박테리아 커뮤니티를 추가로 특성화할 것입니다. (PMID: 23993888). 결과 데이터를 기반으로 조사관은 두 가지 가설을 테스트하기 위해 적절한 통계 절차를 선택합니다.

연구 완료: 참가자는 12개월 동안 추적되며 4회의 후속 약속 및 샘플 수집이 허용됩니다. 연구가 끝나면 조사관은 남아 있는 모든 생물 표본을 파괴할 것입니다. 식별 가능한 모든 데이터는 REDCap 데이터베이스에서 삭제됩니다.