HCC의 진행성 질병 및 예후의 지표로서 순환하는 종양 세포의 역할
재발의 씨앗 찾기: 간세포암종의 진행성 질병 및 예후 지표로서 순환하는 종양 세포를 검출하는 액체 생검의 역할
간세포암종(HCC)은 절제술을 받은 환자의 최대 60%에서 재발합니다. 순환 종양 세포(CTC)는 재발의 촉진자로 옹호되어 왔습니다. 그러나 수술 환경에서 예후 지표로서의 역할은 불분명합니다. 본 연구의 목적은 말초 혈액 샘플의 CTC와 수술 후 재발 위험 사이의 연관성을 평가하는 것이었습니다.
HCC의 첫 번째 진단을 받고 이 상태에 대한 이전 치료가 없으며 다른 종양학적 병력이 없고 BCLC 0-A-B 단계의 환자는 2개 센터에 등록됩니다. 환자는 수술 후 0-30-90-180-365일에 일련의 액체 생검(즉, 각 시점마다 15ml의 말초 혈액 샘플)을 받게 됩니다. 말초 혈액 단핵구 세포를 분리한 후 FACSymphony™로 CTC를 검출한 후 EpCAM, N-cadherin(N-cad) 및 CD90 마커를 식별합니다. 상피-중간엽 전이(EMT)는 EpCAM+/N-cad- 세포와 EpCAM+/N-cad+ 세포 수 사이의 비율(EMT 지수)로 추정되는 지수로 분석됩니다. 재발 여부에 따라 환자를 나누게 됩니다.
연구 개요
상세 설명
액체 생검을 통해 예상 예후에 따라 환자를 더 효과적으로 계층화할 수 있습니다. 다른 종양(예: 유방암), 분자 특성화를 통해 종양 형성 및 진행을 유도하는 병리학적 경로를 더 잘 이해할 수 있을 뿐만 아니라 환자 질병의 특이성에 맞는 특정 치료법을 추진할 수도 있습니다. 액체 생검은 특정 세포 집단을 식별하기 위해 세포 분류기로 조사되는 간단한 정맥 혈액 샘플로 구성되어 있기 때문에 수행하기가 매우 쉽고 저렴합니다.
간세포암종의 경우 재발률이 높아지는 데 도움이 되는 경우가 많습니다. 완치 목적으로 치료를 받은 환자의 경우 70%가 재발합니다. 이러한 경우, 환자는 종종 간경변과 같은 근본적인 염증성 간 질환을 앓고 있었으며, 이는 종양 유전적 요인으로 재발을 유발할 수 있습니다. 간경변증은 일반적으로 간세포암종 발병의 위험 요소로 잘 알려져 있습니다. 이 때문에 임상 실습에서는 우리가 진단한 새로운 결절이 첫 번째 치료 종양의 실제 재발로 간주되어야 하는지, 아니면 변하지 않은 기본 종양 형성 증가와 관련된 새로운 발생으로 간주되어야 하는지 구별하기가 거의 어렵습니다. 간 이식 후에야 완치됩니다. 몇몇 후향적 연구에서는 실제 전이성 발현과 관련하여 새로운 발생의 무병 생존 및 전체 생존 측면에서 이점이 이미 입증되었습니다. 그러나 이 두 가지 상태를 구별할 수 있는 특정 임상적 또는 형태학적 지표에 도달한 사람은 아무도 없습니다. 재발성 결절의 성질에 대한 특성화는 종양의 이질성에 대한 유전적 및 분자적 평가를 통해서만 얻어졌습니다. 그럼에도 불구하고 오늘날 이러한 특성화는 연구 의도와 조직학적 표본을 통해서만 가능하며, 이는 고려되는 재발을 치료하기 위한 재수술의 최종 결정 이후에만 제공될 수 있습니다. 수술 후 간세포암종 재발을 치료하는 방법에 대한 적응증은 아직 부족합니다. 우리의 가설은 기본적으로 혈류에 순환 종양 세포(CTC)가 존재한다는 증거에 기초한 "씨앗과 기름" 이론에 기초합니다. 이러한 세포는 이미 침습성 특성이 발달한 진행성 암의 특징으로 원래 종양에서 퍼질 수 있습니다. 초기 단계의 종양은 진행된 종양처럼 혈류 내 CTC를 방출하지 않거나 동일한 속도나 품질로 방출하지 않는다는 것이 우리의 의견입니다. 우리는 진행된 종양을 이미 미세혈관 침범 및/또는 위성증이 있을 수 있는 종양으로 간주했는데, 이는 진행된 이미 전신 단계의 조직학적 징후일 수 있습니다. 액체 생검에서 확인된 순환종양세포 환자는 이식의 경우에도 조기 재발률 및 전체 재발률이 증가하여 예후가 더 나빠질 수 있습니다. 또한, "재원점 이론"과 관련된 "씨앗과 기름" 이론은 생물종양학적 관점에서 이식 환경에서 재발하는 경우, 전체 장기 및 상대적인 종양유전적 위험 요인이 있는 경우를 정당화할 수 있습니다. , 대체 처리됩니다. 마지막으로, 병태생리학적 관점에서 우리는 재발성 간내 결절(IM)이 순환하는 종양 세포의 파종으로 인해 발생한다는 것을 입증하여 해당 종양의 발암성에 대한 더 나은 이해를 가능하게 하고자 합니다.
- 1차 목표: 혈액 샘플에서 측정된 CTC의 변화와 수술(절제 및 이식) 전후 간세포암종 환자의 전체 생존 및 무병 생존 사이의 연관성을 평가하는 것입니다.
- 2차 목적: 혈액 샘플에서 순환종양세포의 양성 확인이 절제된 환자와 이식된 환자 모두에서 간내 전이성 재발 패턴과 연관되어 있는지 평가하는 것입니다.
- 3차 목표: 수술 후 재발을 결정하는 데 있어서 다양한 임상적, 생화학적, 방사선학적 및 조직병리학적 변수의 역할과 CTC의 존재 및 비율과의 최종 관계를 평가하고 모니터링하는 것입니다. 환자 등록은 이 연구의 수술 부문에서 평가할 것입니다. 대개 수술 전 외래 진료실 방문 중에 발생합니다. 그 순간 환자는 이 연구의 후보자가 되며, 참여를 수락하면 연구자는 서면 동의를 얻게 됩니다. 등록된 환자는 신원을 보존하기 위해 영숫자 번호로 코드화됩니다. CTC가 분석될 실험실에 고용될 연구원은 샘플 소유자를 추적할 수 없으며 임상 데이터에 접근할 수 없습니다(맹검 분석).
각 환자의 수술 전 말초 혈액에서 액체 생검을 수집합니다(일상적인 혈액 분석과 동일한 시간에). 샘플은 FACSARIA III(BD 생명과학)에 의해 CTC 비율 및 유형을 분석하는 데 사용됩니다. 수술 중 종양의 신선한 조각과 건강에 가까운 간은 전문 병리학자가 수집하며, 최고의 임상 실습 및 국제 지침에 따라 일반적인 조직학적 평가를 위해 섹션을 사용합니다. 나머지 부분은 실험실로 배송되는 동안 얼음 위에 보관됩니다. 연구자들은 멸균 조건에서 살아있는 간세포 분리 및 보관을 수행합니다. 그런 다음 간세포를 FACSARIA III로 분석하고 추가 시험관 실험에 사용합니다.
액체 생검은 수술 후 30일째에 첫 번째 외래 방문 시 다시 수행되며, 이후에는 현지 추적 관찰 프로토콜에 따라 6개월마다 수행됩니다. 추적 관찰 중 시행되는 액체생검은 임상 목적으로 제공되는 일반적인 검사 중 수술 전과 동일하게 관리됩니다. 후속 조치는 30개월에 종료됩니다.
모든 수술은 간 수술 경험이 풍부한 외과 의사가 집도합니다. 절제 기술은 현지 프로토콜, 우수한 임상 사례 및 국가 지침에 따라 외과의가 선호하는 것입니다. 모든 외과 의사는 수술 전략을 선택하기 위해 동일한 기준, 즉 간 기능의 기본 변수, 종양 위치 및 직경, 결절 수를 채택했습니다. 재병기 초음파촬영(US)은 각 환자에 대해 수술 중에 수행됩니다. 종양 제거 후, 이 연구에 참여한 병리학자는 종양을 샘플링하여 관련 건강한 간 조직과 함께 종양의 신선 냉동 부분을 확보하고 추가 분석을 위해 보관합니다. 본 검체는 국제 지침 및 현지 윤리 협약에 따라 수행되어야 하며, 조직학적 진단을 수행하기 위해서는 항상 올바른 물질이 보장되어야 합니다. 본 연구에 등록된 환자로부터 제거된 조직이 최적의 조직학적 진단에 영향을 주지 않고 연구용 샘플을 수행하는 것을 허용하지 않는 경우, 해당 환자는 연구에서 제외되며 샘플링이 실행되지 않습니다.
모든 환자의 경우 공복 혈액 샘플 20mL를 멸균 진공관에 수집합니다. 연구에 등록한 이후 환자에게 다른 침습적 절차가 제공되어서는 안 되므로 수집은 일상적인 수술 전 혈액 샘플 또는 계획된 추적 관리와 동일한 시간에 수행됩니다. 혈액 샘플은 4°C에 보관되며 6시간 이내에 처리됩니다. 그런 다음, 5mL를 4°C에서 10분간 3000rpm으로 원심분리하고, 혈장 상을 수집하여 1.5mL 멸균 튜브에 분주하고 사용 또는 배송까지 -80°C에서 보관합니다. 그런 다음 나머지 15mL에서 Ficoll 구배를 통해 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분리합니다. 분리 후 살아있는 PBMC는 표준 배지 20% FBS(Fetal Bovin Serum) 10% DMSO(Dymethil Sulfoxy)에서 동결되고 사용할 때까지 액체 질소에 보관됩니다.
모든 환자의 간 조직 샘플을 수집하고 종양(T) 부분을 종양 주위(PT) 부분에서 분리합니다. T 및 PT 조직으로부터 멸균 조건 하에서 인간 간세포(HC), 쿠퍼 세포(KC), 간 굴모양 내피 세포(LSEC) 및 인간 성상 세포(HSC)가 결과적으로 분리됩니다. 간략하게, 간 조직을 페트리 접시에 넣고 멸균 메스로 절단합니다. 그런 다음 절단된 간을 콜라게나아제 P(1mg/mL)가 포함된 50mL 튜브에서 37°C에서 45분 동안 배양합니다. 배양 후 20% FBS Hank's Balance Salt Solution(HBSS)을 추가하면 콜라게나제 P가 비활성화되고 세포 현탁액은 4°C에서 5분 동안 50g 원심분리됩니다. 간 비실질 세포(NPC)를 포함하는 상청액을 새로운 50mL 튜브에 수집하고 펠릿을 인산염 완충 용액(PBS)으로 세척합니다. HC와 NPC는 표준 미디어 20% FBS 10% DMSO에서 동결되고 사용할 때까지 액체 질소에 보관됩니다.
T와 PT의 단편은 -80°C의 RNAlater 용액에 저장됩니다. CTC 식별을 위해 PBMC를 해동하고 표준 배지에 재현탁한 후 EpCAM+, CD47+, CD133+를 통해 FACSARIA III(BD 생명과학)으로 분류합니다. 단일 양성 세포(EpCAM+, CD47+ 및 CD133+)와 삼중 양성 세포(EpCAM/CD47/CD133+++)의 비율을 평가하고 총 CTC 수를 계산합니다. CTC는 복제 및 침입 능력을 테스트합니다. 세포 증식 및 침입 분석을 사용하여 CTC 배가 시간(세포 수를 두 배로 늘리는 데 필요한 시간), 성장률(gr=[ln(N(t)/N(0)]/t; N(t)= 시간 t에서의 세포 수, N(0)= 시간 0에서의 세포 수, t= 시간) 및 침입률.
CTC 특성화 후 정확한 CTC 간 유래를 평가하기 위해 이전에 설명한 양성 마커를 사용하여 HC 및 NPC를 분석합니다.
생물학적 물질은 전문가의 개인 운송 수단으로 배송되어 "Università degli Studi del Piemonte Orientale"의 실험실에 보관됩니다.
재발 패턴은 다음과 같이 평가됩니다. 국소 재발은 실질 보존 절제술의 경우 동일한 간 분절에 재발하거나 해부학적 절제술의 경우 가장 가까운 분절의 수술 울타리에 재발하는 것으로 정의됩니다. 따라서 재발 결절의 수(단일 대 다발), 재발 위치(간내 대 간외 또는 둘 다), 주요 재발 결절의 크기 및 간 부분을 평가하게 됩니다. 재발에 대한 이러한 모든 평가는 지역 후속 조치 프로토콜이 제공하는 대로 후속 조치 동안 CT 스캔 또는 MRI 스캔을 통해 수행됩니다.
모든 환자는 혈청 α-FP, 총 빌리루빈, GGT, ALP, 알부민, INR, 혈구 수, 전해질 수, 초음파, 조영제 컴퓨터 단층촬영(CT) 또는 자기공명영상(MRI) 측정을 포함한 국소 프로토콜을 사용하여 추적 관찰됩니다. 그리고 사무실 방문. 환자는 일반적으로 수술 후 첫해에는 3개월마다 검사를 받고 그 이후에는 6개월마다 검사를 받습니다. 재발이 발생하면 방사선 전문의, 간 전문의, 외과의사, 중재적 방사선 전문의, 방사선 치료사 및 종양 전문의가 포함된 다학문적 환경에서 사례가 논의됩니다. 전체 생존(OS)은 수술부터 환자 사망까지의 시간 간격(개월)으로 정의됩니다. 후속 검사에서 환자가 이탈한 경우 데이터가 검열됩니다. 무질병 생존(DFS)은 수술부터 재발 또는 사망까지의 시간 간격(개월)으로 정의됩니다. 재발이 없는 경우, 데이터는 가능한 마지막 후속 조치 날짜에 검열됩니다. 종양 특이적 생존(TSS)은 수술과 종양 관련 사망 사이의 시간 간격(개월)으로 정의됩니다.
연구 유형
등록 (추정된)
연락처 및 위치
연구 연락처
- 이름: Simone Famularo
- 전화번호: +39 3296533353
- 이메일: simone.famularo@gmail.com
연구 연락처 백업
- 이름: Cristina Ciulli
- 전화번호: +39 3896460025
- 이메일: cri.ciulli@hotmail.it
연구 장소
-
-
-
Milano, 이탈리아
- 모병
- Asst Grande Ospedale Metropolitano Niguarda
-
연락하다:
- Andrea Lauterio, MD
-
수석 연구원:
- Luciano De Carlis
-
부수사관:
- Andrea Lauterio
-
Novara, 이탈리아
- 모병
- Universita del piemonte Orientale
-
연락하다:
- Rosalba Minisini
-
수석 연구원:
- Mario Pirisi
-
부수사관:
- Rosalba Minisini
-
부수사관:
- Matteo Nazzareno Barbaglia
-
부수사관:
- Livia Salmi
-
부수사관:
- Venkata Ramana Mallela
-
Rozzano, 이탈리아
- 아직 모집하지 않음
- Humanitas Research Hospital
-
연락하다:
- Simone Famularo, MD, PhD
- 이메일: simone.famularo@gmail.com
-
수석 연구원:
- Guido Torzilli
-
수석 연구원:
- Matteo Donadon
-
수석 연구원:
- Simone Famularo
-
-
MB
-
Monza, MB, 이탈리아, 20900
- 모병
- Ospedale San Gerardo
-
연락하다:
- Fabrizio Romano
-
수석 연구원:
- Fabrizio Romano
-
부수사관:
- Cristina Ciulli
-
부수사관:
- Francesca Carissimi
-
부수사관:
- Linda Roccamatisi
-
부수사관:
- Giuseppe Cordaro
-
부수사관:
- Biagio Eugenio Leone
-
-
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- 간암 진단은 방사선학으로 확인되었으며 치료 목적으로 수술(절제 또는 OLT)을 시행했습니다.
- 간세포암종의 1차 진단 및 1차 치료.
- BCLC 0 - A - B
- 조직학적 표본에서 간암종의 조직학적 확인.
- 수술 과정에서 얻은 종양의 신선 냉동 절편의 가용성
제외 기준:
- 임상 병력에 있는 다른 종양.
- 자가면역 간 질환(예: 경화성 담관염, 원발성 담즙성 간경변 등).
- 치료 목적이 아닌 경우(완화, 최선의 지지 요법 등) 수술로 치료를 받은 환자.
- 결합된 간 원발성 신생물의 조직병리학적 표본(예: '상대혈관암종').
- 이전에 다른 치료법으로 간세포암종 치료를 받은 환자
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
개입 / 치료 |
|---|---|
|
간세포암종으로 절제된 환자
수술적 절제, 말초혈액 채취
|
HCC에 대한 간 절제술
|
|
양성질환으로 수술을 받은 환자
수술적 절제, 말초혈액 채취
|
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
|
순환 종양 세포와 무병 생존 사이의 연관성
기간: 5 년
|
혈액 샘플에서 결정된 CTC의 변화와 수술 후 HCC 환자의 무병 생존 사이의 연관성을 평가합니다.
|
5 년
|
2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
|
순환 종양 세포와 전체 생존 사이의 연관성
기간: 5 년
|
혈액 샘플에서 결정된 CTC의 변화와 수술 후 HCC 환자의 전체 생존 사이의 연관성을 평가합니다.
|
5 년
|
공동 작업자 및 조사자
협력자
수사관
- 수석 연구원: Fabrizio Romano, University of Milano Bicocca
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
기본 완료 (추정된)
연구 완료 (추정된)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (실제)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (추정된)
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
마지막으로 확인됨
추가 정보
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