단일 배아 이식 정책을 사용하는 체외 프로그램에서 연기된 배아 이식

이 연구는 조사자가 IVF/ICSI 사용자의 138쌍(각 그룹에서 69쌍)을 포함하는 전향적, 무작위, 양군, 병렬, 비맹검 연구로 설계되었습니다. 취소되거나 구멍이 뚫렸지만 배아 이식이 없는 주기(난모세포를 얻지 못하거나 수정되지 않거나 배아 발달 정지로 인해)는 연구에 포함되지 않습니다. 각 그룹에 커플을 배정하는 것은 연속적인 무작위 샘플링 절차를 통해 수행됩니다. 무작위 목록은 이 프로젝트를 위해 특별히 생성되며 연구팀에 포함되지 않은 누군가가 안전하게 보관합니다.

• 그룹 I(실험): 신선한 이식을 수행하지 않고, 최고 품질의 배아를 동결 보존합니다. 냉동보존된 배아의 후기 주기에서 선택적 이식.
• 그룹 II(대조군): 최고 품질의 배아를 신선하게 이식합니다.

연구 주제:

IVF / ICSI의 첫 번째 또는 두 번째 주기를 수행하기 위해 Virgen de las Nieves University Hospital의 Human Reproduction Unit에 오는 환자. 커플은 좋은 생식 예후로 분류하는 포함 기준에 따라 선택됩니다(일반적인 eSET 관행과 일치함).

부부는 한 주기 동안만 연구에 참여할 수 있습니다. 각 부부는 인터뷰를 통해 연구의 특성을 설명하고 정보 시트를 받게 됩니다. 각 부부로부터 서면 동의서를 얻어야 합니다. 무작위 배정 목록을 지키는 연구팀 외부의 사람이 해당 치료 그룹을 지정합니다.

연구를 시작하기 전에 안달루시아의 생물 의학 연구를 위한 윤리 포털을 통해 윤리 위원회에서 윤리적 승인을 처리했습니다.

단일 배아의 선택적 연기 이식을 받은 여성 그룹과 새로운 배아의 선택적 이식을 받은 그룹의 정상 출생률이 같다는 귀무 가설을 평가하기 위해 80%의 검정력이 사용되었습니다. 2개의 독립적인 샘플에 대한 양측 카이-제곱 테스트를 통해 통계적으로 유의한 차이를 탐지하기 위해 설정되었으며, 유의 수준은 5%이고 새로 전환된 여성 그룹의 비율은 50.9%라고 가정합니다. , 유예 선택 전학을 받는 여성 그룹의 비율은 78%이고 전체에 대한 여성의 비율이 50%이므로 각 그룹에 48명의 여성을 포함해야 하며 연구에서 96 실험 단위. 예상 탈락률이 여성 10명 중 3명이라는 점을 감안하면 그룹당 69명의 여성을 포함해야 할 것이다. 138명의 여성은 특정 소프트웨어(Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated)에 의해 생성된 일련의 난수에 따라 무작위 절차를 사용하여 그룹 중 하나에 배정됩니다. 버전 3.1).

방법론 환자는 다중 난포 발달을 달성하기 위해 배란 자극 치료를 따라야 합니다. 소위 "긴 아날로그" GnRH 작용제 프로토콜이 사용됩니다. 이것은 GnRH 유사체(Decapeptyl 0.1; Lasa, Barcelona, ​​Spain)의 주기의 22일째부터 0.1 mg/일의 GnRH 유사체(Decapeptyl 0.1; Lasa, Barcelona, ​​Spain)를 투여하는 것으로 구성되며, 성선자극호르몬의 투여가 시작되는 날까지 투여량을 50%로 줄입니다. hCG의 날. 작용제 투여 10 내지 14일 후, 난소 질 초음파(난포 및 낭종 없음) 및 혈청 에스트라디올 결정(<50pg/mL)에 의해 뇌하수체 억제를 확인한다. 이 의학적 뇌하수체 절제술이 확인되면 재조합 FSH(FSHr) 300IU를 2일간 하루(Gonal F, Serono, Madrid, Spain) 투여하고, 3일부터 7일까지 FSHr 150IU를 투여한다. 이날 각 환자의 rFSH 용량을 다시 한 번 조정하기 위해 난포 발달에 대한 초음파 모니터링과 혈청 에스트라디올 측정을 수행합니다. 난포 반응이 적절해지면(직경 18mm보다 큰 난포가 3개 이상) hCG 6,500IU(Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Germany)를 사용하여 배란이 시작됩니다.

IVF / ICSI 및 배아 배양이 수행됩니다. 정자 미세수정(ICSI)을 수행하려면 난모세포에서 적운과 방사관을 제거해야 합니다. 적산하기 위해, 크라운-난모세포 클러스터 복합체를 80 IU/mL의 히알루로니다아제(HYASE, IVF Science Scandinavia, Gothenburg, Sweden)가 포함된 용액에 10-20초 동안 담그고, 파스퇴르 피펫을 사용하여 복합체를 여러 번 흡인합니다. Microinsemination 기술은 Eppendorf 및 Narishigue micromanipulators 및 microinjector와 거꾸로 현미경으로 수행됩니다. 체외 수정(IVF)은 5-웰 플레이트에서 수행되며, 각 웰에 0.5mL의 IVF 배지(Vitrolife, Sweden) 및 0.5mL의 Ovoil(Vitrolife, Sweden)을 증착합니다. 웰당 5개의 적운이 남고 100,000개의 정자/mL가 추가됩니다. 두 경우 모두, 난모세포는 5-10분마다 사진을 찍는 형태동력학 플랫폼(PrimoVision) 내에서 Thermo-Fisher 인큐베이터에서 배양됩니다. 다음 날은 2015년에 검토된 ASEBIR(Spanish Association for the Study of Reproduction Biology)의 형태학적 기준과 형태동태학으로 측정된 분할 시간에 따라 가장 착상 가능성이 높은 것을 선택하여 분류를 위해 평가됩니다.

배아 이식은 이전 기준에 따라 최상의 배아를 선택하여 3일째 그룹 2에서 수행됩니다. 그룹 1에서는 배아를 유리화하여 동결 보존하고 지연 이식에 가장 적합한 배아를 선택합니다. 상업용 유리화 매체(Medicult Vitrification, 덴마크) 및 저장 장치는 Cryoleaf(McGill Cryoleaf, Medicult, 덴마크)입니다. 냉동보존된 모든 배아는 -196ºC의 저장 실린더(Air Liquide, 프랑스)에서 액체 질소에 보관됩니다. cryotransfer 전날 배아는 해동 키트(Medicult Warming, Denmark)를 사용하여 실투됩니다. 마지막으로, 배아는 G2 배지(Vitrolife)에서 세척되고, 배아 품질 및 동결 생존(용해된 세포의 백분율)을 평가한 후, 다음날까지 배양물에 남겨둡니다. 여성의 자궁내막은 estradiol valerate와 progesterone으로 치료하여 준비합니다. cryotransfer 당일, 배아 분열에 중점을 두고 배아 품질을 다시 평가합니다. Cryotransfer는 전송과 동일한 기술을 사용하여 수행됩니다.

연구 제한 사항 이 프로젝트는 Virgen de las Nieves 대학 병원의 인간 생식 부서에서 사용할 수 있는 리소스를 고려하여 수행되었으므로 이와 관련하여 제한이 없는 것 같습니다.

이 연구는 자궁 내 이식 이전에 배아 유전자 변형이 있는지 확인하기 위해 착상 전 유전 진단을 수행하여 완료할 수 있지만 이 기술은 아직 우리 단위에서 수행되지 않습니다. 마찬가지로 배반포 이식은 임신율을 높일 수 있지만 배아 이식 취소율을 높임으로써 우리 단위에서는 일상적으로 수행되지 않습니다.