単一胚移植ポリシーを使用した In Vitro プログラムでの胚移植の延期

この研究は、プロスペクティブ、無作為化、2群、並行、非盲検研究として設計されており、研究者はIVF / ICSIユーザーの138組（各グループで69組）を対象としています。 サイクルがキャンセルまたは穿刺されたが、胚移植が行われていない (卵母細胞が得られない、受精していない、または胚発生の停止のいずれかによる) 研究には含まれません。 各グループへのカップルの割り当ては、連続無作為抽出手順によって実行されます。 無作為化リストは、このプロジェクトのために特別に作成され、研究チームに含まれていない人物によって安全に保管されます。

• グループ I (実験): 新鮮移植は行わず、最高品質の胚を凍結保存します。 凍結保存胚の後期周期における選択的移植。
• グループ II (コントロール): 最高品質の胚の新鮮移植。

研究テーマ:

Virgen de las Nieves 大学病院の人間生殖部門に来て、IVF / ICSI の 1 回目または 2 回目のサイクルを行う患者。 カップルは、生殖予後が良好であると分類する選択基準に従って選択されます (これは、通常の eSET の実践と一致しています)。

カップルは、1 サイクルのみ研究に参加できます。 各カップルは、調査の特徴を説明するためにインタビューを受け、情報シートが渡されます。 各カップルから書面によるインフォームド コンセントを取得する必要があります。 無作為化リストを守っている研究チーム外の人が、対応する治療グループを割り当てます。

研究を開始する前に、アンダルシアの生物医学研究のための倫理ポータルを通じて倫理委員会によって倫理的承認が処理されました。

単一の胚の選択的遅延移植を受ける女性のグループと新鮮な胚の選択的移植を受けるグループの生児出生率が等しいことを含む帰無仮説を評価する目的で、検出力は 80% である。有意水準が 5% であることを考慮し、新規移植を受ける女性のグループの割合が 50.9% であると仮定して、2 つの独立したサンプルの両側カイ 2 乗検定によって統計的に有意な差を検出するために確立されました。 、延期選択的転勤を受ける女性のグループの割合が78％であり、全体に対する女性の割合が50％であることを考えると、各グループに48人の女性を含める必要があり、研究の 96 の実験単位。 予想中退率が 10 人中 3 人の女性であることを考慮すると、1 グループあたり 69 人の女性を含める必要があります。 138 人の女性は、特定のソフトウェア (Epidat、Epidemiological Data Analysis Program Tabulated. バージョン 3.1)。

方法論 患者は、複数の卵胞発育を達成するために、排卵刺激治療に従わなければなりません。 いわゆる「ロング アナログ」GnRH アゴニスト プロトコルが使用されます。 これは、周期の 22 日目から GnRH 類似体 (Decapeptyl 0.1; Lasa, Barcelona,​​ Spain) を 0.1 mg/日投与し、性腺刺激ホルモンの投与を開始する日まで投与量を 50% に減らします。 hCGの日。 アゴニストの投与の１０～１４日後、下垂体抑制を卵巣膣超音波（卵胞および嚢胞の不在）および血清エストラジオール測定（＜５０ｐｇ／ｍＬ）によってチェックする。 この医学的下垂体切除術が確認された場合、1 日あたり 300 IU の組換え FSH (FSHr) を 2 日間投与し (Gonal F、Serono、マドリード、スペイン)、3 日目から 7 日目までは 150 IU の FSHr を投与します。 この日、各患者への rFSH の投与量を再度調整するために、卵胞発育の超音波モニタリングと血清エストラジオール測定が行われます。 卵胞反応が適切になったら (直径 18 mm を超える卵胞が 3 つ以上)、6,500 IU の hCG (Ovitrelle、Merck、ダルムシュタット、ドイツ) を使用して排卵を誘発します。

IVF / ICSIおよび胚培養が行われます。 精子顕微授精 (ICSI) を行うには、卵母細胞から卵丘と放射クラウンを除去する必要があります。 脱蓄積するには、クラウン-卵母細胞クラスター複合体を 80 IU/mL のヒアルロニダーゼ (HYASE、IVF サイエンス スカンジナビア、ヨーテボリ、スウェーデン) を含む溶液に 10 ～ 20 秒間浸し、パスツール ピペットを使用して複合体を数回吸引します。 顕微授精技術は、エッペンドルフとナリシグのマイクロマニピュレーターとマイクロインジェクターを備えた倒立顕微鏡下で行われます。 体外受精 (IVF) は 5 ウェル プレートで行われ、各ウェルに 0.5 mL の IVF 培地 (Vitrolife、スウェーデン) と 0.5 mL の Ovoil (Vitrolife、スウェーデン) を堆積します。 ウェルあたり 5 個の卵丘を残し、100,000 個の精子 / mL を追加します。 どちらの場合も、卵母細胞は 5 ～ 10 分ごとに写真を撮る形態素プラットフォーム (PrimoVision) 内の Thermo-Fisher インキュベーターで培養されます。 次の日は分類のために評価され、形態動態学によって測定された分割時間と、2015 年にレビューされたスペイン生殖生物学学会 (ASEBIR) の形態学的基準に従って、着床の可能性が最も高いものを選択します。

胚移植は、前の基準に従って最良の胚を選択して、3 日目にグループ 2 で実行されます。 グループ 1 では、胚はガラス化によって凍結保存され、遅延転送に最適なものが選択されます。 市販のガラス化メディア (Medicult Vitrification、デンマーク) とストレージ デバイスは Cryoleaf (McGill Cryoleaf、Medicult、デンマーク) です。 凍結保存されたすべての胚は、液体窒素中、-196ºC の保存シリンダー (Air Liquide、フランス) で保存されます。 凍結移植の前日、解凍キット (Medicult Warming、Denmark) を使用して、胚を失透させます。 最後に、胚をG2培地（Vitrolife）で洗浄し、胚の品質と凍結生存率（溶解細胞の割合）を評価した後、翌日まで培養します。 女性の子宮内膜は、吉草酸エストラジオールとプロゲステロンによる治療によって準備されます。 凍結移植の日に、胚の分裂に重点を置いて、胚の質が再度評価されます。 凍結転写は、転写と同じ技術を使用して実行されます。

研究の制限 このプロジェクトは、Virgen de las Nieves 大学病院の人間生殖部門で利用可能なリソースを考慮して実行されたため、この点に関して制限はないようです。

この研究は、子宮内移植の前に胚の遺伝的変化があるかどうかを判断するために着床前遺伝子診断を実施することによって完了することができますが、この技術は私たちのユニットではまだ実施されていません. 同様に、胚盤胞移植は妊娠率を高めることができますが、胚移植のキャンセル率を高めることになるため、当ユニットでは定期的に実施していません。