Udskudt embryooverførsel i et in vitro-program med enkelt embryooverførselspolitik

Studiet er designet som et prospektivt, randomiseret, to-armet, parallelt, ublindet studie, hvor efterforskerne vil inkludere 138 par (69 i hver gruppe) af IVF/ICSI-brugere. Cykler, der er annulleret eller punkteret, men uden embryooverførsel (enten på grund af manglende oocytter, ikke-befrugtning eller standsning af embryonal udvikling) vil ikke blive inkluderet i undersøgelsen. Tildelingen af ​​par til hver af grupperne vil blive udført ved hjælp af en konsekutiv stikprøveudtagningsprocedure. Randomiseringslisten vil blive oprettet specifikt til dette projekt og vil blive opbevaret sikkert af en person, der ikke er inkluderet i forskerholdet:

• Gruppe I (eksperimentel): frisk overførsel udføres ikke, den bedste kvalitet embryo er kryokonserveret. Elektiv overførsel i en senere cyklus af det kryokonserverede embryo.
• Gruppe II (kontrol): frisk overførsel af embryo af bedste kvalitet.

Undersøgelsesfag:

Patienter, der kommer til Human Reproduction Unit på Virgen de las Nieves University Hospital for at udføre en første eller anden cyklus af IVF/ICSI. Par vil blive udvalgt i henhold til inklusionskriterier, der klassificerer dem som god reproduktionsprognose (hvilket er i overensstemmelse med den sædvanlige eSET-praksis).

Par vil kun kunne deltage i undersøgelsen i én cyklus. Hvert par vil blive interviewet for at forklare undersøgelsens karakteristika og vil få udleveret et informationsark. Der skal indhentes skriftligt informeret samtykke fra hvert par. Den person uden for forskerteamet, der bevogter randomiseringslisten, tildeler den tilsvarende behandlingsgruppe.

Inden undersøgelsen startede, blev den etiske godkendelse behandlet af den etiske komité gennem den etiske portal for biomedicinsk forskning i Andalusien.

Til formålet med at vurdere nulhypotesen, der inkluderer ligheden af ​​levende fødselsrater i gruppen af ​​kvinder, der gennemgår en elektiv udskudt overførsel af et enkelt embryo, og gruppen, der gennemgår elektiv overførsel af et frisk embryo, er en styrke på 80 % blevet etableret til at påvise statistisk signifikante forskelle ved hjælp af en bilateral chi-kvadrat-test for to uafhængige prøver, idet der tages højde for, at signifikansniveauet er 5 %, og under forudsætning af, at andelen i gruppen af ​​kvinder, der gennemgår en ny forflytning, er 50,9 %. , andelen i gruppen af ​​kvinder, der modtager den udskudte valgfri forflytning, er 78%, og at andelen af ​​kvinder i forhold til det samlede antal er 50%, vil det være nødvendigt at medtage 48 kvinder i hver gruppe, med det formål at opnå 96 eksperimentelle enheder i undersøgelsen. Taget i betragtning, at det forventede frafald er tre ud af ti kvinder, vil det være nødvendigt at inkludere 69 kvinder pr. gruppe. De 138 kvinder vil blive tildelt en af ​​grupperne ved hjælp af en tilfældig procedure, efter en sekvens af tilfældige tal genereret af specifik software (Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated. Version 3.1).

Metode Patienterne skal følge en ægløsningsstimulerende behandling for at opnå multipel follikulær udvikling. En såkaldt "lang analog" GnRH-agonistprotokol vil blive brugt. Dette består i at administrere fra dag 22 i cyklussen 0,1 mg/dag af GnRH-analog (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Spanien) indtil den dag, hvor administrationen af ​​gonadotropin påbegyndes, hvor dosis reduceres med 50 % indtil dag med hCG. Efter 10-14 dages administration af agonisten kontrolleres hypofysetilbageholdelsen ved hjælp af ovarievaginal ultralyd (fravær af follikler og cyster) og serumøstradiolbestemmelse (<50 pg/ml). Hvis denne medicinske hypofysektomi bekræftes, administreres 300 IE rekombinant FSH (FSHr) om dagen (Gonal F, Serono, Madrid, Spanien) i to dage og 150 IE FSHr fra den 3. til den 7. dag. På denne dag udføres ultralydsmonitorering af follikulær udvikling og serumøstradiolbestemmelse for igen at justere dosis af rFSH til hver patient. Når den follikulære respons er tilstrækkelig (mere end 3 ovariefollikler større end 18 mm i diameter), udløses ægløsning ved hjælp af 6.500 IE hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Tyskland).

IVF/ICSI og embryokultur vil derefter blive udført. For at udføre sperm mikroinsemination (ICSI) er det nødvendigt at fjerne cumulus og udstrålede krone fra oocytten. For at dekumulere nedsænkes krone-oocyt-klyngekomplekset i en opløsning med 80 IE/ml hyaluronidase (HYASE, IVF Science Scandinavia, Gøteborg, Sverige) i 10-20 sekunder, idet komplekset aspireres flere gange med en pasteurpipette. Mikroinseminationsteknikken udføres under et omvendt mikroskop med Eppendorf og Narishigue mikromanipulatorer og mikroinjektorer. In vitro fertilisering (IVF) udføres i en plade med fem brønde, hvor der deponeres 0,5 ml IVF-medium (Vitrolife, Sverige) og 0,5 ml Ovoil (Vitrolife, Sverige) i hver brønd. Fem cumulus er tilbage pr. brønd, og 100.000 sperm/ml tilsættes. I begge tilfælde dyrkes oocytterne i en Thermo-Fisher inkubator inden for en morfokinetisk platform (PrimoVision), der tager billeder af dem hvert 5.-10. minut. De følgende dage evalueres med henblik på klassificering, idet man vælger den med det bedste implantationspotentiale i henhold til delingstider målt ved morfokinetik og de morfologiske kriterier fra den spanske forening for undersøgelse af reproduktionsbiologi (ASEBIR), der blev gennemgået i 2015.

Embryonoverførslen vil blive udført i gruppe 2 på tredjedagen, idet det bedste embryo vælges i henhold til de foregående kriterier. I gruppe 1 vil embryonerne blive kryokonserveret ved forglasning, idet man vælger den bedste til forsinket overførsel. Det kommercielle forglasningsmedie (Medicult Vitrification, Danmark) og lagerenheden vil være Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Danmark). Alle kryokonserverede embryoner vil blive opbevaret i flydende nitrogen ved -196ºC i opbevaringscylindre (Air Liquide, Frankrig). Dagen før kryooverførsel afglasses embryonet ved hjælp af optøningssættet (Medicult Warming, Danmark). Til sidst vaskes embryonet i G2-medium (Vitrolife), og efterlader det i kultur til næste dag efter evaluering af embryokvaliteten og kryooverlevelse (procentdel af lyserede celler). Kvindens endometrium fremstilles ved behandling med østradiolvalerat og progesteron. På dagen for kryooverførsel vurderes embryokvaliteten igen med vægt på embryodeling. Kryooverførsel udføres ved hjælp af samme teknik som overførsel.

Undersøgelsesbegrænsninger Projektet er blevet gennemført under hensyntagen til de ressourcer, der er tilgængelige i Human Reproduction Unit på Universitetshospitalet Virgen de las Nieves, og derfor synes der ikke at være nogen begrænsninger i denne henseende.

Undersøgelsen kunne afsluttes ved at udføre en præimplantations genetisk diagnose for at bestemme, om der er embryonale genetiske ændringer før intrauterin overførsel, men denne teknik er endnu ikke udført i vores afdeling. Ligeledes kan blastocystoverførsel øge graviditetsraterne, men ved at øge annulleringshastigheden af ​​embryooverførsel, så det ikke rutinemæssigt udføres i vores afdeling.