Viivästetty alkionsiirto in vitro -ohjelmassa yhden alkionsiirtokäytännön avulla

Tutkimus on suunniteltu prospektiiviseksi, satunnaistetuksi, kaksihaaraiseksi, rinnakkaistutkimukseksi, jonka aikana tutkijoihin otetaan mukaan 138 IVF/ICSI-käyttäjien paria (69 kussakin ryhmässä). Syklejä, jotka on peruutettu tai puhkaista, mutta ilman alkionsiirtoa (joko munasolujen puuttumisen, hedelmöittymisen tai alkionkehityksen pysähtymisen vuoksi), ei oteta mukaan tutkimukseen. Parit jaetaan kuhunkin ryhmään peräkkäisen satunnaisotannan avulla. Satunnaistuslista luodaan erityisesti tätä projektia varten, ja sitä säilyttää turvallisesti joku, joka ei kuulu tutkimusryhmään:

• Ryhmä I (kokeellinen): tuoretta siirtoa ei suoriteta, parasta laatua oleva alkio kylmäsäilytetään. Elektiivinen siirto kylmäsäilytetyn alkion myöhemmässä syklissä.
• Ryhmä II (kontrolli): paraslaatuisen alkion tuore siirto.

Opiskeluaineet:

Potilaat, jotka tulevat Virgen de las Nievesin yliopistollisen sairaalan ihmisen lisääntymisosastolle suorittamaan ensimmäisen tai toisen IVF/ICSI-jakson. Parit valitaan mukaanottokriteerien mukaan, jotka luokittelevat ne hyvän lisääntymisennusteen mukaan (mikä on tavanomaisen eSET-käytännön mukainen).

Parit voivat osallistua tutkimukseen vain yhden jakson ajan. Jokaista paria haastatellaan tutkimuksen ominaisuuksien selittämiseksi ja heille jaetaan tietolomake. Jokaiselta pariskunnalta on saatava kirjallinen tietoinen suostumus. Tutkimusryhmän ulkopuolinen henkilö, joka vartioi satunnaistuslistaa, määrää vastaavan hoitoryhmän.

Ennen tutkimuksen aloittamista eettinen komitea käsitteli eettisen hyväksynnän Andalusian biolääketieteellisen tutkimuksen eettisen portaalin kautta.

Nollahypoteesin arvioimiseksi, joka sisältää elävien syntyvyyden tasa-arvon naisten ryhmässä, joille tehdään elektiivinen yhden alkion siirto, ja ryhmässä, joille tehdään elektiivinen tuoreen alkion siirto, on 80 %:n teho. määritetty tilastollisesti merkitsevien erojen havaitsemiseksi kahdenvälisellä Chi-neliötestillä kahdelle riippumattomalle otokselle ottaen huomioon, että merkitsevyystaso on 5 % ja olettaen, että uusien siirron läpikäyneiden naisten osuus on 50,9 %. , lykätyn valinnaisen siirron saaneiden naisten osuus on 78 % ja naisten osuus kokonaismäärästä 50 %, kuhunkin ryhmään on sisällytettävä 48 naista tavoitteena saada 96 koeyksikköä tutkimuksessa. Ottaen huomioon, että arvioitu keskeyttämisaste on kolme naista kymmenestä, on tarpeen ottaa mukaan 69 naista ryhmään. 138 naista jaetaan johonkin ryhmistä satunnaismenettelyä käyttäen tietyn ohjelmiston (Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated) luoman satunnaislukusarjan mukaisesti. versio 3.1).

Metodologia Potilaiden on noudatettava ovulaation stimulaatiohoitoa, jotta monien follikkelien kehittyminen saavutetaan. Käytetään niin kutsuttua "pitkää analogista" GnRH-agonistiprotokollaa. Tämä koostuu siitä, että syklin päivästä 22 annetaan 0,1 mg/vrk GnRH-analogia (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Espanja) siihen päivään asti, jolloin gonadotropiinin anto aloitetaan, jolloin annosta pienennetään 50 %, kunnes hCG päivä. 10-14 päivän agonistin annon jälkeen aivolisäkkeen rajoittuneisuus tarkistetaan munasarjojen emättimen ultraäänitutkimuksella (follikkelien ja kystojen puuttuminen) ja seerumin estradiolimäärityksellä (<50 pg/ml). Jos tämä lääketieteellinen hypofysektomia vahvistetaan, 300 IU rekombinantti-FSH:ta (FSHr) annetaan päivässä (Gonal F, Serono, Madrid, Espanja) kahden päivän ajan ja 150 IU FSHr:ta 3.–7. päivänä. Tänä päivänä suoritetaan follikulaarisen kehityksen ultraäänitarkkailu ja seerumin estradiolimääritys, jotta rFSH-annosta voidaan jälleen säätää kullekin potilaalle. Kun follikkelivaste on riittävä (yli 3 munasarjan follikkelia, joiden halkaisija on yli 18 mm), ovulaatio laukaistaan ​​käyttämällä 6 500 IU hCG:tä (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Saksa).

Sitten suoritetaan IVF / ICSI ja alkioviljely. Siittiöiden mikroinseminaation (ICSI) suorittamiseksi on välttämätöntä poistaa munasolusta kumpu ja säteilevä kruunu. Dekumulaatiota varten kruunu-oosyyttiklusterikompleksi upotetaan liuokseen, jossa on 80 IU/ml hyaluronidaasia (HYASE, IVF Science Scandinavia, Göteborg, Ruotsi) 10-20 sekunniksi, imemällä kompleksi useita kertoja pastöripipetillä. Mikrosiemennystekniikka suoritetaan käänteisessä mikroskoopissa Eppendorfin ja Narishiguen mikromanipulaattoreilla ja mikroinjektoreilla. In vitro -hedelmöitys (IVF) suoritetaan viisikuoppaisella levyllä, jolloin kuhunkin kuoppaan laitetaan 0,5 ml IVF-elatusainetta (Vitrolife, Ruotsi) ja 0,5 ml Ovoilia (Vitrolife, Ruotsi). Kuhunkin kuoppaan jätetään viisi cumulust ja lisätään 100 000 siittiötä/ml. Molemmissa tapauksissa munasoluja viljellään Thermo-Fisher-inkubaattorissa morfokineettisellä alustalla (PrimoVision), joka ottaa niistä valokuvia 5-10 minuutin välein. Seuraavien päivien luokittelua varten valitaan paras implantaatiopotentiaali morfokinetiikkalla mitattujen jakautumisaikojen ja vuonna 2015 tarkistetun Espanjan lisääntymisbiologian tutkimusyhdistyksen (ASEBIR) morfologisten kriteerien perusteella.

Alkionsiirto suoritetaan ryhmässä 2 kolmantena päivänä valitsemalla paras alkio aikaisempien kriteerien mukaan. Ryhmässä 1 alkiot kylmäsäilytetään lasittamalla ja valitaan paras viivästettyyn siirtoon. Kaupallinen lasitusväliaine (Medicult Vitrification, Tanska) ja tallennuslaite ovat Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Tanska). Kaikki kylmäsäilötyt alkiot säilytetään nestetypessä -196 ºC:ssa säilytyssylintereissä (Air Liquide, Ranska). Päivä ennen kryosiirtoa alkio devitrifioidaan käyttämällä sulatussarjaa (Medicult Warming, Tanska). Lopussa alkio pestään G2-elatusaineessa (Vitrolife), jolloin se jätetään viljelmään seuraavaan päivään sen jälkeen, kun alkion laatu ja kryoseloonjääminen (lyysattujen solujen prosenttiosuus) on arvioitu. Naisen kohdun limakalvo valmistetaan käsittelemällä estradiolivaleraatilla ja progesteronilla. Kryosiirtopäivänä alkion laatu arvioidaan uudelleen painottaen alkion jakautumista. Kryosiirto suoritetaan samalla tekniikalla kuin siirto.

Tutkimuksen rajoitukset Hanke on toteutettu ottaen huomioon Virgen de las Nievesin yliopistollisen sairaalan ihmisen lisääntymisyksikön käytettävissä olevat resurssit, joten tässä suhteessa ei näytä olevan rajoituksia.

Tutkimus voitaisiin saattaa päätökseen suorittamalla preimplantaatiogeenidiagnoosi, jotta voidaan määrittää, onko alkion geneettisiä muutoksia ennen kohdunsisäistä siirtoa, mutta tätä tekniikkaa ei vielä suoriteta yksikössämme. Samoin blastokystan siirto voi lisätä raskauden määrää, mutta lisäämällä alkionsiirron peruuntumisastetta, joten sitä ei yksikössämme tehdä rutiininomaisesti.