Odložený přenos embryí v programu in vitro s politikou přenosu jednoho embrya

Studie byla navržena jako prospektivní, randomizovaná, dvouramenná, paralelní, nezaslepená studie, během níž výzkumníci zahrnou 138 párů (69 v každé skupině) uživatelek IVF/ICSI. Cykly zrušené nebo proražené, ale bez přenosu embrya (buď z důvodu nezískání oocytů, neoplodnění nebo zastavení embryonálního vývoje) nebudou do studie zahrnuty. Přiřazení párů do každé ze skupin bude provedeno pomocí postupného náhodného výběru. Randomizační seznam bude vytvořen speciálně pro tento projekt a bude bezpečně uchováván někým, kdo není součástí výzkumného týmu:

• Skupina I (experimentální): čerstvý přenos se neprovádí, nejkvalitnější embryo je kryokonzervováno. Elektivní přenos v pozdějším cyklu kryokonzervovaného embrya.
• Skupina II (kontrola): čerstvý přenos nejkvalitnějšího embrya.

Studijní předměty:

Pacienti, kteří přicházejí do oddělení lidské reprodukce Fakultní nemocnice Virgen de las Nieves, aby provedli první nebo druhý cyklus IVF / ICSI. Páry budou vybrány podle kritérií pro zařazení, která je klasifikují jako dobrá reprodukční prognóza (což je v souladu s obvyklou praxí eSET).

Páry se budou moci zúčastnit studie pouze po dobu jednoho cyklu. Každý pár bude vyslechnut, aby vysvětlil charakteristiky studie, a dostane informační list. Od každého páru musí být získán písemný informovaný souhlas. Osoba mimo výzkumný tým, která hlídá randomizační seznam, přiřadí odpovídající léčebnou skupinu.

Před zahájením studie bylo etické schválení zpracováno etickou komisí prostřednictvím Etického portálu pro biomedicínský výzkum Andalusie.

Pro účely posouzení nulové hypotézy, která zahrnuje rovnost živě porodnosti ve skupině žen, které podstoupí elektivní odložený transfer jednoho embrya, a skupině, které podstoupí elektivní transfer čerstvého embrya, byla síla 80 %. stanoveno za účelem zjištění statisticky významných rozdílů pomocí bilaterálního chí-kvadrát testu pro dva nezávislé vzorky, přičemž se bere v úvahu hladina významnosti 5 % a za předpokladu, že podíl ve skupině žen, které podstoupily nový přenos, je 50,9 %. , podíl ve skupině žen, které obdrží odložený volitelný přestup, je 78 %, a že podíl žen na celkovém počtu je 50 %, bude nutné do každé skupiny zahrnout 48 žen s cílem získat 96 experimentálních jednotek ve studii. Vzhledem k tomu, že předpokládaná míra předčasného ukončování školní docházky jsou tři z deseti žen, bude nutné zahrnout 69 žen na skupinu. 138 žen bude rozděleno do jedné ze skupin pomocí náhodného postupu podle sekvence náhodných čísel generovaných specifickým softwarem (Epidat, program epidemiologické analýzy dat v tabulce). Verze 3.1).

Metodika Pacientky musí podstoupit léčbu stimulující ovulaci, aby bylo dosaženo mnohočetného vývoje folikulů. Bude použit takzvaný "dlouhý analog" agonistický protokol GnRH. Ta spočívá v podávání od 22. dne cyklu 0,1 mg/den analogu GnRH (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Španělsko) až do dne zahájení podávání gonadotropinu, kdy se dávka sníží o 50 % až do den hCG. Po 10-14 dnech podávání agonisty se zkontroluje omezení hypofýzy pomocí ovariálního vaginálního ultrazvuku (absence folikulů a cyst) a stanovení sérového estradiolu (<50 pg/ml). Pokud je tato lékařská hypofysektomie potvrzena, podává se 300 IU rekombinantního FSH (FSHr) denně (Gonal F, Serono, Madrid, Španělsko) po dobu dvou dnů a 150 IU FSHr od 3. do 7. dne. V tento den se provádí ultrazvukové monitorování vývoje folikulů a stanovení sérového estradiolu, aby se opět upravila dávka rFSH pro každého pacienta. Jakmile je folikulární odpověď adekvátní (více než 3 ovariální folikuly větší než 18 mm v průměru), je ovulace spuštěna pomocí 6 500 IU hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Německo).

Poté bude provedeno IVF / ICSI a kultivace embryí. K provedení mikroinseminace spermií (ICSI) je nutné odstranit kumulus a ozařovanou korunku z oocytu. Pro dekumulaci se komplex klastrů korunek a oocytů ponoří do roztoku s 80 IU/ml hyaluronidázy (HYASE, IVF Science Scandinavia, Göteborg, Švédsko) na 10-20 sekund, přičemž se komplex několikrát odsaje pomocí pasteurovy pipety. Technika mikroinseminace se provádí pod inverzním mikroskopem s mikromanipulátory a mikroinjektory Eppendorf a Narishigue. Fertilizace in vitro (IVF) se provádí v pětijamkové destičce, přičemž se do každé jamky vloží 0,5 ml IVF média (Vitrolife, Švédsko) a 0,5 ml Ovoil (Vitrolife, Švédsko). V každé jamce se ponechá pět kumulů a přidá se 100 000 spermií/ml. V obou případech jsou oocyty kultivovány v inkubátoru Thermo-Fisher v morfokinetické platformě (PrimoVision), která je každých 5-10 minut fotografuje. Následující dny jsou hodnoceny pro klasifikaci, přičemž se vybírá ten s nejlepším implantačním potenciálem podle časů dělení měřených morfokinetikou a morfologických kritérií Španělské asociace pro studium biologie reprodukce (ASEBIR) revidovaných v roce 2015.

Přenos embryí bude proveden ve skupině 2 třetí den s výběrem nejlepšího embrya podle předchozích kritérií. Ve skupině 1 budou embrya kryokonzervována vitrifikací, přičemž se vybere to nejlepší pro zpožděný přenos. Komerční vitrifikační médium (Medicult Vitrification, Dánsko) a úložné zařízení bude Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Dánsko). Všechna kryokonzervovaná embrya budou skladována v kapalném dusíku při -196ºC ve skladovacích lahvích (Air Liquide, Francie). Den před kryotransferem se embryo odskelní pomocí rozmrazovací soupravy (Medicult Warming, Dánsko). Na závěr se embryo promyje v médiu G2 (Vitrolife) a po vyhodnocení kvality embrya a kryopřežití (procento lyžovaných buněk) se ponechá v kultuře do druhého dne. Endometrium ženy se připravuje ošetřením estradiolvalerátem a progesteronem. V den kryotransferu se opět posuzuje kvalita embrya s důrazem na dělení embrya. Kryotransfer se provádí stejnou technikou jako přenos.

Omezení studie Projekt byl proveden s ohledem na zdroje dostupné na oddělení lidské reprodukce Fakultní nemocnice Virgen de las Nieves, a proto se zdá, že v tomto ohledu neexistují žádná omezení.

Studie by mohla být dokončena provedením preimplantační genetické diagnostiky, aby se zjistilo, zda existují embryonální genetické změny před intrauterinním transferem, ale tato technika se na našem oddělení zatím neprovádí. Stejně tak přenos blastocyst může zvýšit míru otěhotnění, ale zvýšením míry zrušení embryotransferu se na našem oddělení běžně neprovádí.