Odroczony transfer zarodków w programie in vitro z zasadami transferu pojedynczych zarodków

Badanie zostało zaprojektowane jako prospektywne, randomizowane, dwuramienne, równoległe, niezaślepione badanie, podczas którego badacze obejmą 138 par (po 69 w każdej grupie) użytkowników IVF / ICSI. Cykle anulowane lub nakłute, ale bez transferu zarodka (z powodu nieuzyskania komórek jajowych, niezapłodnienia lub zatrzymania rozwoju zarodka) nie będą uwzględniane w badaniu. Przydział par do każdej z grup zostanie przeprowadzony w drodze losowania sekwencyjnego. Lista randomizacyjna zostanie stworzona specjalnie dla tego projektu i będzie bezpiecznie przechowywana przez osobę spoza zespołu badawczego:

• Grupa I (eksperymentalna): nie wykonuje się świeżego transferu, najlepszej jakości zarodek jest kriokonserwowany. Elektywny transfer w późniejszym cyklu kriokonserwowanego zarodka.
• Grupa II (kontrolna): świeży transfer zarodka najlepszej jakości.

Przedmioty studiów:

Pacjenci zgłaszający się do Oddziału Rozrodu Człowieka Szpitala Uniwersyteckiego Virgen de las Nieves w celu wykonania pierwszego lub drugiego cyklu IVF/ICSI. Pary zostaną wybrane zgodnie z kryteriami włączenia, które klasyfikują je jako dobre rokowania reprodukcyjne (co jest zgodne ze zwykłą praktyką eSET).

Pary będą mogły uczestniczyć w badaniu tylko przez jeden cykl. Każda para zostanie przesłuchana w celu wyjaśnienia charakterystyki badania i otrzyma arkusz informacyjny. Od każdej pary należy uzyskać pisemną świadomą zgodę. Osoba spoza zespołu badawczego, która pilnuje listy randomizacyjnej, przypisze odpowiednią grupę badawczą.

Przed rozpoczęciem badania komisja etyczna uzyskała zgodę etyczną za pośrednictwem portalu etycznego dla badań biomedycznych w Andaluzji.

Na potrzeby oceny hipotezy zerowej uwzględniającej równość wskaźników urodzeń żywych w grupie kobiet poddawanych planowemu transferowi pojedynczego zarodka w czasie oraz grupie kobiet poddawanych planowym transferom świeżego zarodka przyjęto moc 80% ustalona w celu wykrycia różnic istotnych statystycznie za pomocą dwustronnego testu chi-kwadrat dla dwóch niezależnych prób, przy założeniu, że poziom istotności wynosi 5% i przy założeniu, że odsetek kobiet, które przeszły świeży transfer, wynosi 50,9% , odsetek kobiet w grupie kobiet, które otrzymają odroczony transfer fakultatywny, wynosi 78%, a odsetek kobiet w stosunku do ogółu wynosi 50%, konieczne będzie włączenie do każdej grupy 48 kobiet w celu uzyskania W badaniu wzięło udział 96 jednostek eksperymentalnych. Biorąc pod uwagę, że spodziewany wskaźnik rezygnacji to trzy na dziesięć kobiet, konieczne będzie uwzględnienie 69 kobiet w każdej grupie. 138 kobiet zostanie przydzielonych do jednej z grup za pomocą losowej procedury, po sekwencji losowych liczb generowanych przez specjalne oprogramowanie (Epidat, program do analizy danych epidemiologicznych w tabeli). Wersja 3.1).

Metodologia Aby osiągnąć rozwój wielu pęcherzyków, pacjentki muszą przejść terapię stymulującą owulację. Zastosowany zostanie protokół tak zwanego „długiego analogu” agonisty GnRH. Polega to na podawaniu od 22 dnia cyklu 0,1 mg/dobę analogu GnRH (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Hiszpania) do dnia rozpoczęcia podawania gonadotropiny, w którym dawkę zmniejsza się o 50% do dzień hCG. Po 10-14 dniach podawania agonisty sprawdza się niedrożność przysadki za pomocą USG przezpochwowego jajników (brak pęcherzyków i torbieli) oraz oznaczanie estradiolu w surowicy (<50 pg/ml). Jeśli ta medyczna przysadka zostanie potwierdzona, podaje się 300 IU rekombinowanego FSH (FSHr) dziennie (Gonal F, Serono, Madryt, Hiszpania) przez dwa dni i 150 IU FSHr od 3 do 7 dnia. W tym dniu wykonywana jest ultrasonograficzna kontrola rozwoju pęcherzyków oraz oznaczenie estradiolu w surowicy w celu ponownego dopasowania dawki rFSH dla każdej pacjentki. Gdy odpowiedź pęcherzyków jest odpowiednia (więcej niż 3 pęcherzyki jajnikowe o średnicy większej niż 18 mm), wyzwala się owulację za pomocą 6500 j.m. hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Niemcy).

Następnie zostanie przeprowadzone IVF/ICSI i hodowla zarodków. Do mikroinseminacji plemnika (ICSI) konieczne jest usunięcie wzgórka i promienistej korony z komórki jajowej. W celu dekumulacji kompleks klastrów korona-oocyt zanurza się w roztworze z 80 IU/ml hialuronidazy (HYASE, IVF Science Scandinavia, Göteborg, Szwecja) na 10-20 sekund, zasysając kompleks kilka razy za pomocą pipety Pasteura. Technikę mikroinseminacji przeprowadza się pod mikroskopem odwróconym za pomocą mikromanipulatorów i mikroiniektorów Eppendorf i Narishigue. Zapłodnienie in vitro (IVF) przeprowadza się w pięciodołkowej płytce, umieszczając w każdym dołku 0,5 ml pożywki IVF (Vitrolife, Szwecja) i 0,5 ml Ovoil (Vitrolife, Szwecja). Na studzienkę pozostawia się pięć wzgórków i dodaje się 100 000 plemników/ml. W obu przypadkach komórki jajowe są hodowane w inkubatorze Thermo-Fisher, na platformie morfokinetycznej (PrimoVision), która co 5-10 minut wykonuje ich zdjęcia. Kolejne dni są oceniane pod kątem klasyfikacji, wybierając ten, który ma najlepszy potencjał implantacji, zgodnie z czasami podziału mierzonymi morfokinetyką i kryteriami morfologicznymi Hiszpańskiego Stowarzyszenia Badań nad Biologią Rozrodu (ASEBIR) zweryfikowanymi w 2015 r.

Transfer zarodków zostanie przeprowadzony w grupie 2 trzeciego dnia, wybierając najlepszy zarodek zgodnie z wcześniejszymi kryteriami. W grupie 1 zarodki będą kriokonserwowane przez witryfikację, wybierając najlepszy do opóźnionego transferu. Komercyjnym podłożem do witryfikacji (Medicult Vitrification, Dania) i urządzeniem do przechowywania będzie Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Dania). Wszystkie zarodki poddane kriokonserwacji będą przechowywane w ciekłym azocie w temperaturze -196ºC w butlach do przechowywania (Air Liquide, Francja). Dzień przed kriotransferem zarodek jest dewitryfikowany przy użyciu zestawu do rozmrażania (Medicult Warming, Dania). Na koniec zarodek przemywa się w pożywce G2 (Vitrolife), pozostawiając w hodowli do następnego dnia, po ocenie jakości zarodka i jego przeżywalności (procent zlizowanych komórek). Endometrium kobiety przygotowuje się przez leczenie walerianianem estradiolu i progesteronem. W dniu kriotransferu ponownie ocenia się jakość zarodka, z naciskiem na podział zarodka. Kriotransfer jest wykonywany przy użyciu tej samej techniki co transfer.

Ograniczenia badania Projekt został zrealizowany z uwzględnieniem zasobów dostępnych w Oddziale Rozrodu Człowieka Szpitala Uniwersyteckiego Virgen de las Nieves, w związku z czym wydaje się, że nie ma żadnych ograniczeń w tym zakresie.

Badanie można zakończyć wykonaniem preimplantacyjnej diagnostyki genetycznej w celu ustalenia, czy przed transferem wewnątrzmacicznym zachodzą zmiany genetyczne zarodka, ale ta technika nie jest jeszcze wykonywana w naszym Oddziale. Podobnie transfer blastocysty może zwiększyć odsetek ciąż, ale poprzez zwiększenie wskaźnika anulowania transferu zarodków, więc nie jest rutynowo wykonywany w naszym Oddziale.