Elhalasztott embriótranszfer in vitro programban, egyetlen embriótranszfer szabályzattal

A tanulmányt prospektív, randomizált, kétkarú, párhuzamos, nem vak vizsgálatnak tervezték, amely során a vizsgálók 138 IVF/ICSI-használó pár (minden csoportban 69-en) vesznek részt. A megszakított vagy szúrt, de embriótranszfer nélkül végzett ciklusok (akár a petesejtek meg nem szerzése, akár a megtermékenyítés hiánya vagy az embrionális fejlődés leállása miatt) nem szerepelnek a vizsgálatban. A párok mindegyik csoportba való besorolása egymást követő véletlenszerű mintavételi eljárással történik. A véletlenszerű besorolási listát kifejezetten ehhez a projekthez hozzuk létre, és olyan személy fogja biztonságban tartani, aki nem szerepel a kutatócsoportban:

• I. csoport (kísérleti): friss transzfert nem végeznek, a legjobb minőségű embriót mélyhűtve tárolják. Elektív transzfer a mélyhűtött embrió egy későbbi ciklusában.
• II. csoport (kontroll): a legjobb minőségű embrió friss átültetése.

Tantárgyak:

Azok a betegek, akik a Virgen de las Nieves Egyetemi Kórház humán reprodukciós osztályára érkeznek, hogy elvégezzék az IVF/ICSI első vagy második ciklusát. A párokat a jó szaporodási prognózisú besorolási kritériumok szerint választják ki (ami összhangban van az eSET szokásos gyakorlatával).

A párok csak egy ciklusban vehetnek részt a vizsgálatban. Mindegyik párral interjút készítenek, hogy elmagyarázzák a vizsgálat jellemzőit, és kapnak egy információs lapot. Minden pártól írásos beleegyezést kell kérni. A randomizációs listát őrző kutatócsoporton kívüli személy kijelöli a megfelelő kezelési csoportot.

A vizsgálat megkezdése előtt az etikai jóváhagyást az etikai bizottság feldolgozta az Andalúziai Orvosbiológiai Kutatások Etikai Portálján keresztül.

A nullhipotézis értékeléséhez, amely magában foglalja az élveszületési arányok egyenlőségét azon nők csoportjában, akiknél egyetlen embrió elektív halasztott átültetése és a friss embrió elektív átültetésén esik át, 80%-os hatványt határoztak meg. statisztikailag szignifikáns különbségek kimutatására két független mintán végzett kétoldalú Khi-négyzet teszttel, figyelembe véve, hogy a szignifikancia szintje 5%, és feltételezve, hogy az új transzferen átesett nők aránya 50,9%. szerint a halasztott elektív transzferben részesülő nők aránya 78%, a nők aránya az összeshez viszonyítva 50%, minden csoportba 48 nőt kell bevonni, azzal a céllal, hogy megszerezzék. 96 kísérleti egység a tanulmányban. Figyelembe véve, hogy a várható lemorzsolódási arány tízből három nő, csoportonként 69 nőt kell bevonni. A 138 nőt véletlenszerű eljárással besorolják az egyik csoportba, egy speciális szoftver által generált véletlen számsort követve (Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated. 3.1-es verzió).

Módszer A betegeknek ovuláció stimuláló kezelést kell követniük a többszörös tüszőfejlődés elérése érdekében. Egy úgynevezett "hosszú analóg" GnRH agonista protokollt fognak használni. Ez abból áll, hogy a ciklus 22. napjától 0,1 mg/nap GnRH analógot (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Spanyolország) adnak be a gonadotropin adagolásának megkezdésének napjáig, amelyen a dózist 50%-kal csökkentik a nap hCG. Az agonista beadása után 10-14 nappal az agyalapi mirigy visszatartását petefészek hüvelyi ultrahanggal (tüszők és ciszták hiánya) és szérum ösztradiol meghatározásával (<50 pg/ml) ellenőrizzük. Ha ez az orvosi hypophysectomia beigazolódik, 300 NE rekombináns FSH-t (FSHr) kell beadni naponta (Gonal F, Serono, Madrid, Spanyolország) két napon keresztül, és 150 NE FSHr-t a 3. és 7. nap között. Ezen a napon a tüszőfejlődés ultrahangos monitorozását és a szérum ösztradiol meghatározását végzik annak érdekében, hogy az rFSH adagját ismét az egyes betegekhez igazítsák. Amint a tüszőre adott válasz megfelelő (több mint 3 petefészek tüsző 18 mm-nél nagyobb átmérőjű), 6500 NE hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Németország) segítségével kiváltják az ovulációt.

Ezután IVF / ICSI és embriótenyésztés történik. A spermium mikroinszemináció (ICSI) elvégzéséhez el kell távolítani a petesejtekből a kumulusz és a kisugárzott koronát. A dekumulációhoz a korona-petesejtek klaszter komplexét 80 NE/ml hialuronidázzal (HYASE, IVF Science Scandinavia, Göteborg, Svédország) tartalmazó oldatba merítjük 10-20 másodpercre, a komplexet többször felszívva pasztőrpipettával. A mikrotermékenyítési technikát fordított mikroszkóp alatt végezzük Eppendorf és Narishigue mikromanipulátorokkal és mikroinjektorokkal. Az in vitro megtermékenyítést (IVF) öt lyukú lemezen hajtjuk végre, 0,5 ml IVF táptalajt (Vitrolife, Svédország) és 0,5 ml Ovoil-t (Vitrolife, Svédország) helyezve minden egyes lyukba. Öt cumulust hagyunk üregenként, és 100 000 spermiumot adunk hozzá ml-enként. Mindkét esetben a petesejteket Thermo-Fisher inkubátorban tenyésztik, egy morfokinetikus platformon (PrimoVision) belül, amely 5-10 percenként fényképez róluk. A következő napokon kerül sor a besorolás értékelésére, a morfokinetika által mért osztódási idők és a Spanyol Reprodukciós Biológiai Tanulmányi Társaság (ASEBIR) 2015-ben felülvizsgált morfológiai kritériumai alapján a legjobb beültetési potenciállal rendelkezőt választva.

Az embrióátültetés a 2. csoportban történik a harmadik napon, kiválasztva a legjobb embriót az előző kritériumok szerint. Az 1. csoportban az embriókat üvegezéssel mélyhűtve tárolják, kiválasztva a legjobbat a késleltetett átvitelhez. A kereskedelmi vitrifikációs közeg (Medicult Vitrification, Dánia) és a tárolóeszköz Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Dánia) lesz. Minden mélyhűtött embriót folyékony nitrogénben -196 °C-on tárolnak tárolóhengerekben (Air Liquide, Franciaország). A kriotranszfer előtti napon az embriót devitrifikálják a kiolvasztókészlet segítségével (Medicult Warming, Dánia). A végén az embriót G2 tápközegben (Vitrolife) mossuk, és a tenyészetben hagyjuk másnapig, miután értékeltük az embrió minőségét és a krio-túlélést (a lizált sejtek százaléka). A nő endometriumát ösztradiol-valeráttal és progeszteronnal történő kezeléssel készítik elő. A kriotranszfer napján ismételten értékelik az embrió minőségét, különös tekintettel az embrióosztódásra. A kriotranszfer ugyanazzal a technikával történik, mint a transzfer.

A vizsgálat korlátai A projektet a Virgen de las Nieves Egyetemi Kórház Humán Reprodukciós Osztályán rendelkezésre álló erőforrások figyelembevételével hajtották végre, ezért úgy tűnik, hogy e tekintetben nincsenek korlátozások.

A vizsgálat befejezhető a beültetés előtti genetikai diagnózis elvégzésével annak megállapítására, hogy vannak-e embrionális genetikai elváltozások a méhen belüli transzfert megelőzően, de ezt a technikát osztályunkon még nem alkalmazzák. Ugyanígy a blasztociszta transzfer növelheti a terhesség arányát, de az embriótranszfer megszakítási arányának növelésével, ezért osztályunkon nem rutinszerűen történik.