Отсроченный перенос эмбрионов в программе in vitro с политикой единственного переноса эмбрионов

Исследование было разработано как проспективное, рандомизированное, двухгрупповое, параллельное, неслепое исследование, в ходе которого исследователи будут включать 138 пар (по 69 в каждой группе) пользователей ЭКО/ИКСИ. Циклы, отмененные или проколотые, но без переноса эмбрионов (из-за отсутствия ооцитов, неоплодотворения или остановки эмбрионального развития), не будут включены в исследование. Отнесение пар к каждой из групп будет осуществляться с помощью процедуры последовательной случайной выборки. Список рандомизации будет создан специально для этого проекта и будет храниться кем-то, кто не входит в исследовательскую группу:

• I группа (опытная): свежий перенос не производится, эмбрион лучшего качества подвергается криоконсервации. Избирательный перенос в более позднем цикле криоконсервированного эмбриона.
• II группа (контрольная): свежий перенос эмбриона лучшего качества.

Предметы изучения:

Пациенты, которые обращаются в отделение репродукции человека Университетской больницы Вирхен-де-лас-Ньевес для проведения первого или второго цикла ЭКО/ИКСИ. Пары будут отобраны в соответствии с критериями включения, которые классифицируют их как хорошие репродуктивные прогнозы (что согласуется с обычной практикой eSET).

Пары смогут участвовать в исследовании только один цикл. Каждая пара будет опрошена, чтобы объяснить особенности исследования, и ей будет предоставлен информационный лист. Письменное информированное согласие должно быть получено от каждой пары. Человек, не входящий в исследовательскую группу, который охраняет список рандомизации, назначит соответствующую группу лечения.

Перед началом исследования этическое одобрение было обработано Комитетом по этике через Портал этики для биомедицинских исследований Андалусии.

Для оценки нулевой гипотезы, включающей равенство коэффициентов живорождения в группе женщин, подвергшихся элективному отсроченному переносу одного эмбриона, и в группе, подвергшихся элективному переносу свежего эмбриона, была принята мощность 80%. установлено для выявления статистически значимых различий с помощью билатерального критерия хи-квадрат для двух независимых выборок, принимая во внимание, что уровень значимости составляет 5%, и предполагая, что доля в группе женщин, перенесших свежий перенос, составляет 50,9%. , доля в группе женщин, получающих отсроченный перевод по выбору, составляет 78%, а доля женщин по отношению к общему количеству составляет 50%, необходимо будет включить 48 женщин в каждую группу с целью получения 96 экспериментальных единиц в исследовании. Принимая во внимание, что ожидаемый показатель отсева составляет три женщины из десяти, необходимо будет включить 69 женщин в каждую группу. 138 женщин будут распределены в одну из групп с использованием случайной процедуры, следуя последовательности случайных чисел, сгенерированных специальным программным обеспечением (Epidat, программа анализа эпидемиологических данных в таблицах). Версия 3.1).

Методология. Пациенты должны пройти лечение по стимуляции овуляции, чтобы добиться множественного развития фолликулов. Будет использоваться протокол так называемого «длинного аналога» агониста ГнРГ. Он заключается во введении с 22-го дня цикла 0,1 мг/сут аналога ГнРГ (Декапептил 0,1; Лаза, Барселона, Испания) до дня начала введения гонадотропина, при этом доза снижается на 50% до тех пор, пока день ХГЧ. Через 10-14 дней введения агониста гипофизарную сдержанность проверяют с помощью вагинального УЗИ яичников (отсутствие фолликулов и кист) и определением эстрадиола в сыворотке (<50 пг/мл). При подтверждении этой медицинской гипофизэктомии вводят 300 МЕ рекомбинантного ФСГ (ФСГ) в сутки (Гонал Ф, Сероно, Мадрид, Испания) в течение двух дней и 150 МЕ ФСГ с 3-го по 7-й день. В этот день проводят УЗИ-мониторинг развития фолликулов и определение эстрадиола в сыворотке крови, чтобы еще раз скорректировать дозу рФСГ каждому пациенту. Как только фолликулярный ответ становится адекватным (более 3 фолликулов яичников диаметром более 18 мм), овуляцию запускают с помощью 6500 МЕ ХГЧ (Ovitrelle, Merck, Дармштадт, Германия).

Затем будет проведено ЭКО / ИКСИ и культивирование эмбрионов. Для проведения микроинсеминации спермы (ИКСИ) необходимо удалить из ооцита кумулюс и лучистую коронку. Для декумуляции кластерный комплекс корона-ооцит погружают в раствор с 80 МЕ/мл гиалуронидазы (HYASE, IVF Science Scandinavia, Гетеборг, Швеция) на 10-20 секунд, несколько раз аспирируя комплекс пастеровской пипеткой. Технику микроинсеминации проводят под инвертированным микроскопом с использованием микроманипуляторов Eppendorf и Narishigue и микроинъекторов. Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) проводят в пятилуночном планшете, внося в каждую лунку 0,5 мл среды ЭКО (Vitrolife, Швеция) и 0,5 мл Ovoil (Vitrolife, Швеция). На лунку оставляют пять кумулюсов и добавляют 100 000 сперматозоидов/мл. В обоих случаях ооциты культивируют в инкубаторе Thermo-Fisher на морфокинетической платформе (PrimoVision), которая делает их фотографии каждые 5-10 минут. Следующие дни оцениваются для классификации, выбирая день с лучшим потенциалом имплантации в соответствии со временем деления, измеренным с помощью морфокинетики, и морфологическими критериями Испанской ассоциации изучения биологии репродукции (ASEBIR), пересмотренными в 2015 году.

Перенос эмбрионов будет проведен в группе 2 на третий день с выбором лучшего эмбриона по предыдущим критериям. В группе 1 эмбрионы будут подвергнуты криоконсервации путем витрификации, отбирая лучший из них для отсроченного переноса. Коммерческая среда для витрификации (Medicult Vitrification, Дания) и устройство хранения будут Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Дания). Все криоконсервированные эмбрионы будут храниться в жидком азоте при температуре -196ºC в цилиндрах для хранения (Air Liquide, Франция). За день до криопереноса эмбрион девитрифицируют с помощью набора для размораживания (Medicult Warming, Дания). В конце эмбрион промывают в среде G2 (Vitrolife), оставляя его в культуре до следующего дня, предварительно оценив качество эмбриона и криовыживаемость (процент лизированных клеток). Эндометрий женщины подготавливают путем обработки эстрадиола валератом и прогестероном. В день криопереноса снова оценивают качество эмбриона, уделяя особое внимание делению эмбриона. Криотрансфер проводится по той же методике, что и перенос.

Ограничения исследования Проект был выполнен с учетом ресурсов, имеющихся в отделении репродукции человека университетской больницы Вирхен-де-лас-Ньевес, и поэтому в этом отношении, похоже, нет никаких ограничений.

Исследование может быть завершено проведением преимплантационной генетической диагностики для определения наличия генетических изменений эмбриона до внутриутробного переноса, но этот метод еще не применяется в нашем отделении. Точно так же перенос бластоцисты может увеличить частоту наступления беременности, но за счет увеличения частоты отмены переноса эмбрионов, поэтому в нашем отделении он обычно не проводится.