Aufgeschobener Embryotransfer in einem In-vitro-Programm mit Einzel-Embryotransfer-Richtlinie

Die Studie wurde als prospektive, randomisierte, zweiarmige, parallele, unverblindete Studie konzipiert, in die die Prüfärzte 138 Paare (69 in jeder Gruppe) von IVF/ICSI-Anwendern einbeziehen. Abgebrochene oder punktierte Zyklen ohne Embryotransfer (entweder aufgrund fehlender Oozytengewinnung, Nichtbefruchtung oder Stillstand der Embryonalentwicklung) werden nicht in die Studie aufgenommen. Die Zuordnung der Paare zu den einzelnen Gruppen erfolgt durch ein konsekutives Stichprobenverfahren. Die Randomisierungsliste wird speziell für dieses Projekt erstellt und von jemandem, der nicht zum Forschungsteam gehört, sicher aufbewahrt:

• Gruppe I (experimentell): Es wird kein frischer Transfer durchgeführt, der Embryo mit der besten Qualität wird kryokonserviert. Gewählter Transfer des kryokonservierten Embryos in einem späteren Zyklus.
• Gruppe II (Kontrolle): frischer Transfer des Embryos von bester Qualität.

Studienfächer:

Patienten, die in die Abteilung für menschliche Reproduktion des Universitätskrankenhauses Virgen de las Nieves kommen, um einen ersten oder zweiten IVF / ICSI-Zyklus durchzuführen. Paare werden nach Einschlusskriterien ausgewählt, die sie als gute Reproduktionsprognose einstufen (was mit der üblichen eSET-Praxis übereinstimmt).

Paare können nur für einen Zyklus an der Studie teilnehmen. Jedes Paar wird befragt, um die Merkmale der Studie zu erläutern, und erhält ein Informationsblatt. Von jedem Paar muss eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt werden. Die Zuordnung der entsprechenden Behandlungsgruppe erfolgt durch die Person außerhalb des Forschungsteams, die die Randomisierungsliste hütet.

Vor Beginn der Studie wurde die ethische Genehmigung von der Ethikkommission über das Ethikportal für biomedizinische Forschung von Andalusien bearbeitet.

Für das Ziel der Bewertung der Nullhypothese, die die Gleichheit der Lebendgeburtenraten in der Gruppe der Frauen einschließt, die sich einem elektiven verzögerten Transfer eines einzelnen Embryos unterziehen, und der Gruppe, die sich einem elektiven Transfer eines frischen Embryos unterziehen, wurde eine Power von 80 % angenommen zum Nachweis statistisch signifikanter Unterschiede mittels bilateralem Chi-Quadrat-Test für zwei unabhängige Stichproben unter Berücksichtigung eines Signifikanzniveaus von 5 % und unter der Annahme, dass der Anteil in der Gruppe der Frauen, die sich einer erneuten Verlegung unterziehen, 50,9 % beträgt , der Anteil in der Gruppe der Frauen, die die aufgeschobene Wahlversetzung erhalten, 78 % beträgt und der Anteil der Frauen an der Gesamtzahl 50 % beträgt, müssen 48 Frauen in jede Gruppe aufgenommen werden, um das Ziel zu erreichen 96 Versuchseinheiten in der Studie. Berücksichtigt man, dass die erwartete Abbrecherquote bei drei von zehn Frauen liegt, müssen 69 Frauen pro Gruppe aufgenommen werden. Die Zuteilung der 138 Frauen zu einer der Gruppen erfolgt nach einem Zufallsverfahren anhand einer Folge von Zufallszahlen, die von einer speziellen Software (Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated. Version 3.1).

Methodik Die Patientinnen müssen sich einer Ovulationsstimulationsbehandlung unterziehen, um eine multiple Follikelentwicklung zu erreichen. Es wird ein sogenanntes "langes analoges" GnRH-Agonist-Protokoll verwendet. Diese besteht aus der Verabreichung von 0,1 mg/Tag des GnRH-Analogons (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Spanien) ab Tag 22 des Zyklus bis zu dem Tag, an dem mit der Verabreichung von Gonadotropin begonnen wird, an dem die Dosis bis zum 50 % reduziert wird hCG-Tag. Nach 10-14 Tagen Verabreichung des Agonisten wird die hypophysäre Zurückhaltung mittels ovariellem Vaginal-Ultraschall (Fehlen von Follikeln und Zysten) und Serum-Estradiol-Bestimmung (<50 pg/mL) überprüft. Wenn diese medizinische Hypophysektomie bestätigt wird, werden 300 IE rekombinantes FSH (FSHr) pro Tag (Gonal F, Serono, Madrid, Spanien) für zwei Tage und 150 IE FSHr vom 3. bis zum 7. Tag verabreicht. An diesem Tag erfolgt eine Ultraschallkontrolle der Follikelentwicklung und Serum-Östradiolbestimmung, um die rFSH-Dosis nochmals individuell auf den Patienten abzustimmen. Sobald die Follikelreaktion ausreichend ist (mehr als 3 Ovarialfollikel mit einem Durchmesser von mehr als 18 mm), wird der Eisprung mit 6.500 IE hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Deutschland) ausgelöst.

Anschließend werden IVF / ICSI und eine Embryokultur durchgeführt. Um eine Spermienmikroinsemination (ICSI) durchzuführen, ist es notwendig, den Kumulus und die bestrahlte Krone von der Eizelle zu entfernen. Zur Dekumulation wird der Kronen-Oozyten-Cluster-Komplex in eine Lösung mit 80 IE/ml Hyaluronidase (HYASE, IVF Science Scandinavia, Göteborg, Schweden) für 10–20 Sekunden getaucht, wobei der Komplex mehrmals mit einer Pasteurpipette abgesaugt wird. Die Mikroinseminationstechnik wird unter einem inversen Mikroskop mit Mikromanipulatoren und Mikroinjektoren von Eppendorf und Narishigue durchgeführt. Die In-vitro-Fertilisation (IVF) wird in einer Platte mit fünf Vertiefungen durchgeführt, wobei 0,5 ml IVF-Medium (Vitrolife, Schweden) und 0,5 ml Ovoil (Vitrolife, Schweden) in jede Vertiefung eingebracht werden. Fünf Kumulus werden pro Vertiefung belassen und 100.000 Spermien/ml werden hinzugefügt. In beiden Fällen werden die Eizellen in einem Thermo-Fisher-Inkubator innerhalb einer morphokinetischen Plattform (PrimoVision) kultiviert, die alle 5-10 Minuten Fotos von ihnen macht. Die folgenden Tage werden für die Klassifizierung ausgewertet, wobei der Tag mit dem besten Implantationspotential gemäß den durch Morphokinetik gemessenen Teilungszeiten und den 2015 überprüften morphologischen Kriterien der spanischen Vereinigung für das Studium der Reproduktionsbiologie (ASEBIR) ausgewählt wird.

Der Embryotransfer wird in Gruppe 2 am dritten Tag durchgeführt, wobei der beste Embryo nach den vorherigen Kriterien ausgewählt wird. In Gruppe 1 werden die Embryonen durch Vitrifikation kryokonserviert, wobei der beste für den verzögerten Transfer ausgewählt wird. Das kommerzielle Vitrifizierungsmedium (Medicult Vitrification, Dänemark) und das Speichergerät werden Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Dänemark) sein. Alle kryokonservierten Embryonen werden in flüssigem Stickstoff bei -196 °C in Lagerzylindern (Air Liquide, Frankreich) gelagert. Am Tag vor dem Kryotransfer wird der Embryo mit dem Auftaukit (Medicult Warming, Dänemark) entglast. Am Ende wird der Embryo in G2-Medium (Vitrolife) gewaschen und bis zum nächsten Tag in Kultur belassen, nachdem die Qualität des Embryos und das Kryoüberleben (Prozentsatz der lysierten Zellen) bewertet wurden. Das Endometrium der Frau wird durch Behandlung mit Estradiolvalerat und Progesteron vorbereitet. Am Tag des Kryotransfers wird die Embryoqualität erneut beurteilt, wobei der Schwerpunkt auf der Embryoteilung liegt. Der Kryotransfer wird mit der gleichen Technik wie der Transfer durchgeführt.

Einschränkungen der Studie Das Projekt wurde unter Berücksichtigung der in der Abteilung für menschliche Reproduktion des Universitätskrankenhauses Virgen de las Nieves verfügbaren Ressourcen durchgeführt, und daher scheint es diesbezüglich keine Einschränkungen zu geben.

Die Studie könnte durch die Durchführung einer genetischen Präimplantationsdiagnostik abgeschlossen werden, um festzustellen, ob vor dem intrauterinen Transfer embryonale genetische Veränderungen vorliegen, aber diese Technik wird in unserer Abteilung noch nicht durchgeführt. Ebenso kann der Blastozystentransfer die Schwangerschaftsraten erhöhen, erhöht jedoch die Abbruchrate des Embryotransfers, sodass er in unserer Abteilung nicht routinemäßig durchgeführt wird.