Utsatt embryooverføring i et in vitro-program med enkelt embryooverføringspolicy

Studien er designet som en prospektiv, randomisert, to-arms, parallell, ublind studie, der etterforskerne vil inkludere 138 par (69 i hver gruppe) av IVF/ICSI-brukere. Sykluser som er kansellert eller punktert, men uten embryooverføring (enten på grunn av manglende oocytter, ikke-befruktning eller stans av embryonal utvikling) vil ikke bli inkludert i studien. Tildelingen av parene til hver av gruppene vil bli utført ved hjelp av en fortløpende stikkprøveprosedyre. Randomiseringslisten vil bli laget spesielt for dette prosjektet og vil oppbevares trygt av noen som ikke er inkludert i forskerteamet:

• Gruppe I (eksperimentell): ny overføring utføres ikke, embryoet av beste kvalitet er kryokonservert. Elektiv overføring i en senere syklus av det kryokonserverte embryoet.
• Gruppe II (kontroll): fersk overføring av embryo av beste kvalitet.

Studieemner:

Pasienter som kommer til Human Reproduction Unit ved Virgen de las Nieves University Hospital for å utføre en første eller andre syklus av IVF/ICSI. Par vil bli valgt i henhold til inklusjonskriterier som klassifiserer dem som god reproduksjonsprognose (som er i samsvar med vanlig eSET-praksis).

Par vil kun kunne delta i studien i én syklus. Hvert par vil bli intervjuet for å forklare egenskapene til studien og vil få et informasjonsark. Skriftlig informert samtykke må innhentes fra hvert par. Personen utenfor forskerteamet som vokter randomiseringslisten vil tildele tilsvarende behandlingsgruppe.

Før studien startet, ble etisk godkjenning behandlet av Etikkkomiteen gjennom Ethics Portal for Biomedical Research of Andalusia.

For målet om å vurdere nullhypotesen som inkluderer likheten av levende fødselsrater i gruppen kvinner som gjennomgår en valgfri utsatt overføring av et enkelt embryo og gruppen som gjennomgår elektiv overføring av et ferskt embryo, har en styrke på 80 % blitt etablert for å oppdage statistisk signifikante forskjeller ved hjelp av en bilateral kikvadrattest for to uavhengige prøver, tatt i betraktning at signifikansnivået er 5 %, og forutsatt at andelen i gruppen kvinner som gjennomgår en ny overføring er 50,9 %. , andelen i gruppen kvinner som mottar utsatt valgfri overføring er 78 %, og at kvinneandelen i forhold til totalen er 50 %, vil det være nødvendig å inkludere 48 kvinner i hver gruppe, med mål om å oppnå 96 eksperimentelle enheter i studien. Tatt i betraktning at forventet frafall er tre av ti kvinner, vil det være nødvendig å inkludere 69 kvinner per gruppe. De 138 kvinnene vil bli tildelt en av gruppene ved hjelp av en tilfeldig prosedyre, etter en sekvens av tilfeldige tall generert av spesifikk programvare (Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated. Versjon 3.1).

Metodikk Pasientene må følge en eggløsningsstimulerende behandling, for å oppnå multippel follikulær utvikling. En såkalt "lang analog" GnRH-agonistprotokoll vil bli brukt. Dette består i å administrere fra dag 22 i syklusen 0,1 mg/dag av GnRH-analog (Decapeptyl 0,1; Lasa, Barcelona, ​​Spania) til dagen da administreringen av gonadotropin startes, hvor dosen reduseres med 50 % til dag med hCG. Etter 10-14 dager med administrering av agonisten, kontrolleres hypofysebegrensningen ved hjelp av ovarial vaginal ultralyd (fravær av follikler og cyster) og serumøstradiolbestemmelse (<50 pg/ml). Hvis denne medisinske hypofysektomien bekreftes, administreres 300 IE rekombinant FSH (FSHr) per dag (Gonal F, Serono, Madrid, Spania) i to dager, og 150 IE FSHr fra 3. til 7. dag. Denne dagen utføres ultralydovervåking av follikkelutvikling og serumøstradiolbestemmelse for igjen å justere dosen av rFSH til hver pasient. Når follikkelresponsen er tilstrekkelig (mer enn 3 eggstokkfollikler større enn 18 mm i diameter), utløses eggløsning ved bruk av 6500 IE hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Tyskland).

IVF/ICSI og embryokultur vil da bli utført. For å utføre spermmikroinseminering (ICSI) er det nødvendig å fjerne cumulus og utstrålet krone fra oocytten. For å dekumulere blir krone-oocytt-klyngekomplekset nedsenket i en løsning med 80 IE / ml hyaluronidase (HYASE, IVF Science Scandinavia, Gøteborg, Sverige) i 10-20 sekunder, og komplekset aspireres flere ganger med en pasteurpipette. Mikroinsemineringsteknikken utføres under et invertert mikroskop med Eppendorf og Narishigue mikromanipulatorer og mikroinjektorer. In vitro fertilisering (IVF) utføres i en fem-brønns plate, og deponerer 0,5 ml IVF-medium (Vitrolife, Sverige) og 0,5 ml Ovoil (Vitrolife, Sverige) i hver brønn. Fem cumulus er igjen per brønn og 100 000 sperm / ml tilsettes. I begge tilfeller dyrkes oocyttene i en Thermo-Fisher inkubator, innenfor en morfokinetisk plattform (PrimoVision) som tar bilder av dem hvert 5.-10. minutt. De følgende dagene blir evaluert for klassifisering, og velger den med best implantasjonspotensial i henhold til delingstidene målt ved morfokinetikk og de morfologiske kriteriene til den spanske foreningen for studier av reproduksjonsbiologi (ASEBIR) gjennomgått i 2015.

Embryooverføringen vil bli utført i gruppe 2 på den tredje dagen ved å velge det beste embryoet i henhold til de tidligere kriteriene. I gruppe 1 vil embryoene bli kryokonservert ved forglasning, og velge den beste for forsinket overføring. Det kommersielle forglasningsmediet (Medicult Vitrification, Danmark) og lagringsenheten vil være Cryoleaf (McGill Cryoleaf, Medicult, Danmark). Alle kryokonserverte embryoer vil bli lagret i flytende nitrogen ved -196ºC i lagringsflasker (Air Liquide, Frankrike). Dagen før kryooverføring avglasses embryoet ved hjelp av tinesettet (Medicult Warming, Danmark). På slutten vaskes embryoet i G2-medium (Vitrolife), og lar det stå i kultur til neste dag, etter å ha evaluert embryokvaliteten og kryooverlevelsen (prosentandel lyserte celler). Kvinnens endometrium forberedes ved behandling med østradiolvalerat og progesteron. På dagen for kryooverføring vurderes embryokvaliteten igjen, med vekt på embryodeling. Kryooverføring utføres med samme teknikk som overføring.

Studiebegrensninger Prosjektet er gjennomført under hensyntagen til ressursene som er tilgjengelige i Human Reproduction Unit ved Universitetssykehuset Virgen de las Nieves, og det ser derfor ikke ut til å være noen begrensninger i denne forbindelse.

Studien kan fullføres ved å utføre en preimplantasjonsgenetisk diagnose for å avgjøre om det er embryonale genetiske endringer før intrauterin overføring, men denne teknikken er ennå ikke utført i vår enhet. På samme måte kan blastocystoverføring øke graviditetsraten, men ved å øke kanselleringshastigheten for embryooverføring, slik at den ikke utføres rutinemessig i vår enhet.