Uitgestelde embryotransfer in een in-vitroprogramma met beleid voor enkelvoudige embryotransfer

De studie is opgezet als een prospectieve, gerandomiseerde, tweearmige, parallelle, niet-geblindeerde studie, waarin de onderzoekers 138 paren (69 in elke groep) van IVF/ICSI-gebruikers zullen opnemen. Geannuleerde of doorboorde cycli maar zonder embryotransfer (ofwel als gevolg van het niet verkrijgen van oöcyten, niet-bevruchting of stopzetting van de embryonale ontwikkeling) zullen niet in het onderzoek worden opgenomen. De toewijzing van de koppels aan elk van de groepen zal gebeuren door middel van een opeenvolgende aselecte steekproefprocedure. De randomisatielijst wordt speciaal voor dit project gemaakt en wordt veilig bewaard door iemand die niet in het onderzoeksteam zit:

• Groep I (experimenteel): er wordt geen verse transfer uitgevoerd, het embryo van de beste kwaliteit wordt gecryopreserveerd. Electieve transfer in een latere cyclus van het ingevroren embryo.
• Groep II (controle): verse terugplaatsing van de beste kwaliteit embryo.

Onderwerpen van studie:

Patiënten die naar de afdeling Menselijke voortplanting van het Universitair Ziekenhuis Virgen de las Nieves komen om een ​​eerste of tweede IVF/ICSI-cyclus uit te voeren. Paren zullen worden geselecteerd op basis van inclusiecriteria die hen classificeren als een goede reproductieve prognose (wat consistent is met de gebruikelijke eSET-praktijk).

Koppels kunnen slechts één cyclus deelnemen aan het onderzoek. Elk koppel wordt geïnterviewd om de kenmerken van het onderzoek uit te leggen en krijgt een informatieblad. Van elk paar moet schriftelijke geïnformeerde toestemming worden verkregen. De persoon buiten het onderzoeksteam die de randomisatielijst bewaakt, wijst de bijbehorende behandelgroep toe.

Voordat met het onderzoek werd begonnen, werd de ethische goedkeuring verwerkt door de ethische commissie via het ethisch portaal voor biomedisch onderzoek van Andalusië.

Voor het beoordelen van de nulhypothese die de gelijkheid van levendgeborenen omvat in de groep vrouwen die een electieve uitgestelde terugplaatsing van een enkel embryo ondergaan en de groep die een electieve terugplaatsing van een nieuw embryo ondergaat, is een power van 80% gebruikt opgezet om statistisch significante verschillen te detecteren door middel van een bilaterale Chi-kwadraattoets voor twee onafhankelijke steekproeven, rekening houdend met een significantieniveau van 5% en ervan uitgaande dat het aandeel in de groep vrouwen dat een nieuwe transfer ondergaat 50,9% is , het aandeel in de groep vrouwen dat de uitgestelde electieve overdracht ontvangt 78% is, en dat het aandeel vrouwen ten opzichte van het totaal 50% is, zullen in elke groep 48 vrouwen moeten worden opgenomen, met als doel het verkrijgen 96 experimentele eenheden in het onderzoek. Rekening houdend met het verwachte uitvalpercentage van drie op de tien vrouwen, zullen er 69 vrouwen per groep moeten worden opgenomen. De 138 vrouwen zullen worden toegewezen aan een van de groepen met behulp van een willekeurige procedure, volgens een reeks willekeurige getallen gegenereerd door specifieke software (Epidat, Epidemiological Data Analysis Program Tabulated. Versie 3.1).

Methodologie De patiënten moeten een ovulatiestimulatiebehandeling volgen om een ​​meervoudige follikelontwikkeling te bereiken. Er zal een zogenaamd "lang analoog" GnRH-agonistprotocol worden gebruikt. Deze bestaat uit het toedienen vanaf dag 22 van de cyclus 0,1 mg/dag GnRH-analoog (Decapeptyl 0.1; Lasa, Barcelona, ​​Spanje) tot de dag waarop de toediening van gonadotropine wordt gestart, waarbij de dosis met 50% wordt verlaagd tot de dag van hCG. Na 10-14 dagen toediening van de agonist wordt de hypofyse-restrictie gecontroleerd door middel van ovariële vaginale echografie (afwezigheid van follikels en cysten) en serumoestradiolbepaling (<50 pg/ml). Als deze medische hypofysectomie wordt bevestigd, wordt 300 IE recombinant FSH (FSHr) per dag toegediend (Gonal F, Serono, Madrid, Spanje) gedurende twee dagen, en 150 IE FSHr van de 3e tot de 7e dag. Op deze dag worden echografie van de ontwikkeling van de follikels en serumoestradiolbepalingen uitgevoerd om de dosis rFSH opnieuw aan te passen aan elke patiënt. Zodra de folliculaire respons voldoende is (meer dan 3 ovariële follikels groter dan 18 mm in diameter), wordt de ovulatie geactiveerd met behulp van 6.500 IE hCG (Ovitrelle, Merck, Darmstadt, Duitsland).

Vervolgens worden IVF/ICSI en embryokweek uitgevoerd. Om sperma-micro-inseminatie (ICSI) uit te voeren, is het noodzakelijk om de cumulus en de bestraalde kroon van de eicel te verwijderen. Om te decumuleren, wordt het kroon-eicelclustercomplex gedurende 10-20 seconden ondergedompeld in een oplossing met 80 IU / ml hyaluronidase (HYASE, IVF Science Scandinavia, Göteborg, Zweden), waarbij het complex meerdere keren wordt opgezogen met behulp van een pasteurpipet. De micro-inseminatietechniek wordt uitgevoerd onder een omgekeerde microscoop met Eppendorf en Narishigue micromanipulatoren en micro-injectoren. In vitro fertilisatie (IVF) wordt uitgevoerd in een plaat met vijf putjes, waarbij 0,5 ml IVF-medium (Vitrolife, Zweden) en 0,5 ml Ovoil (Vitrolife, Zweden) in elk putje worden afgezet. Er blijven vijf cumulus per putje over en er wordt 100.000 sperma / ml toegevoegd. In beide gevallen worden de eicellen gekweekt in een Thermo-Fisher-incubator, binnen een morfokinetisch platform (PrimoVision) dat er elke 5-10 minuten foto's van maakt. De volgende dagen worden geëvalueerd voor classificatie, waarbij degene wordt gekozen met het beste implantatiepotentieel volgens de delingstijden gemeten door morfokinetiek en de morfologische criteria van de Spaanse Vereniging voor de Studie van Reproductiebiologie (ASEBIR), beoordeeld in 2015.

De embryotransfer wordt uitgevoerd in groep 2 op de derde dag waarbij het beste embryo wordt gekozen volgens de voorgaande criteria. In groep 1 worden de embryo's gecryopreserveerd door middel van vitrificatie, waarbij de beste wordt geselecteerd voor uitgestelde terugplaatsing. De commerciële verglazingsmedia (Medicult Vitrification, Denemarken) en het opslagapparaat zullen Cryoleaf zijn (McGill Cryoleaf, Medicult, Denemarken). Alle gecryopreserveerde embryo's zullen worden bewaard in vloeibare stikstof bij -196ºC in opslagcilinders (Air Liquide, Frankrijk). De dag voor de cryotransfer wordt het embryo gedevitrificeerd met behulp van de ontdooikit (Medicult Warming, Denemarken). Aan het einde wordt het embryo gewassen in G2-medium (Vitrolife), waarbij het in cultuur blijft tot de volgende dag, na beoordeling van de kwaliteit van het embryo en de cryo-overleving (percentage gelyseerde cellen). Het baarmoederslijmvlies van de vrouw wordt bereid door behandeling met oestradiolvaleraat en progesteron. Op de dag van de cryotransfer wordt de embryokwaliteit opnieuw beoordeeld, met nadruk op de embryodeling. Cryotransfer wordt uitgevoerd met dezelfde techniek als transfer.

Studiebeperkingen Het project is uitgevoerd rekening houdend met de beschikbare middelen in de afdeling Menselijke voortplanting van het Universitair Ziekenhuis Virgen de las Nieves, en daarom lijken er in dit opzicht geen beperkingen te zijn.

De studie zou kunnen worden voltooid door een pre-implantatie genetische diagnose uit te voeren om te bepalen of er embryonale genetische veranderingen zijn voorafgaand aan de intra-uteriene transfer, maar deze techniek wordt nog niet toegepast in onze eenheid. Evenzo kan de overdracht van blastocysten het aantal zwangerschappen verhogen, maar door het aantal annuleringen van embryotransfers te verhogen, wordt het dus niet routinematig uitgevoerd in onze eenheid.