건강한 폐에서의 폐 면역 세포-마이크로바이옴 상호작용 (ILLUMINA-2)

중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 2로 인한 코로나바이러스 질병 2019 팬데믹은 최근까지 대부분 무명 상태였던 국소 폐 면역 체계에 대한 여러 연구를 가져왔습니다. 이러한 새로운 방법으로 폐의 과염증을 포함한 폐 질환의 근본적인 측면이 밝혀졌습니다. 그러나 현재 폐 미생물군집, 즉 건강한 폐 내에 상주하는 상호 작용하는 박테리아 및 균류의 공생 미생물군과의 상호 작용을 포함하여 인간 폐의 정상적인 면역 세포 집단의 구성에 대해 알려진 것은 거의 없습니다.

전체 설계: 일반 마취 상태에서 선택적 수술을 위해 삽관된 50명의 환자(남성 25명, 여성 25명)에서 별도의 폐 부분에서 기관내 흡인 및 BAL 유체(BALF)를 얻습니다. 또한 구강 및 비강 면봉과 혈액 샘플을 수집합니다. 이것은 삽관 직후에 수행됩니다.

환자의 전자 건강 기록에서 다음 정보를 얻을 수 있습니다. 진단 코드 및 약물(유형 및 용량), 흡연 이력(현재/이전/비흡연자, 팩 연도), 수술 유형; 또한 건강 기록은 모든 제외 기준에 대해 선별됩니다.

BALF 수집 직전에 환자의 말초 정맥 카테터(임상 목적으로 삽입됨)에서 혈액 샘플을 채취합니다.

BALF 수집을 통한 기관지경 검사: 이 절차는 현재 임상 지침에 따라 표준화된 방식으로 수행됩니다. 절차 직전에 구강 면봉, 비강 면봉 및 기관내흡인(ETA)을 얻습니다. 그런 다음 FIO2를 1.0으로 증가시키고 외경 5.0 mm의 일회용 비디오스코프를 사용하여 기관지경 검사를 시행합니다. 예열된(37°C) 등장 식염수 50ml 3회 분취량을 오른쪽 중엽의 중간 부분에 주입하고 낮은 음압(< 100cm H2O)으로 즉시 흡인하고 얼음 위의 멸균 유리 용기에 모읍니다. BALF 표본을 얻기 위해.

그 후 멸균 용기로 즉시 흡인하면서 각 폐엽에 20 ml 등장성 식염수를 단일 설치하여 우측 폐의 상부 및 하부 엽에서 mini-BAL을 수행합니다.

측정: BALF, ETA 및 혈액에서 선택된 면역 세포에 대한 단일 세포 RNA 시퀀싱(scRNA-seq)에 의해 면역 세포 집단의 구성과 다양한 세포주의 기능 및 분화를 조사할 것이며, 이는 샘플 바코딩 및 멀티플렉싱과 함께 벌크 RNA 시퀀싱으로 보완되어 모든 샘플의 상세한 발현 패턴을 제공합니다.

BALF, ETA 및 구강 면봉의 구성 마이크로바이옴은 박테리아에 대한 리보솜 RNA 유전자의 16S 서브유닛의 초가변 영역 1~3의 표적 증폭 시퀀싱에 의해 평가됩니다.

통계 분석: R 통계 소프트웨어 버전 4.1.1을 사용하여 수행됩니다. (통계 컴퓨팅용 R 프로젝트) RStudio 통계 소프트웨어 버전 1.4.1717 내 (RStudio), p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다. 정규성 및 분산 균질성 검사는 qq-plots 및 히스토그램을 생성하여 수행됩니다. 통계적 추론 도구인 SPIEC-EASI 및 HeatMaps를 사용하고 상관 분석을 기반으로 비계층적 클러스터 분석을 포함한 주성분 분석을 적용하여 특성을 식별합니다.