Pulmonális immunsejt-mikrobióm kölcsönhatások az egészséges tüdőben (ILLUMINA-2)

A 2019-es koronavírus-járvány, amelyet a súlyos akut légúti szindróma (coronavirus 2) okozott, számos tanulmányt hozott a helyi tüdőimmunrendszerről, amely egészen a közelmúltig nagyrészt terra incognita volt. Ezekkel az új módszerekkel a tüdőbetegség látszólag alapvető aspektusait tárták fel, beleértve a pulmonalis hipergyulladást. Jelenleg azonban nagyon keveset tudunk az emberi tüdő normál immunsejt-populációjának összetételéről, beleértve a tüdő mikrobiómával való kölcsönhatását, vagyis az egészséges tüdőben élő, kölcsönhatásban lévő baktériumok és gombák kommenzális mikrobiótájával.

Általános terv: 50 betegnél (25 férfi, 25 nő), akiket általános érzéstelenítésben elektív műtétre intubáltak, endotracheális aspirátumot és BAL-folyadékot (BALF) nyernek külön tüdőszegmensekből. Ezenkívül szájból és orrból tampont, valamint vérmintát vesznek. Ezt az intubálás után azonnal meg kell tenni.

A páciens elektronikus egészségügyi nyilvántartásából a következőket kapjuk: diagnózis kódok és gyógyszeres kezelés (típus és dózis), dohányzási előzmények (jelenlegi/előző/soha nem dohányzott; csomagévek), műtét típusa; továbbá az egészségügyi nyilvántartást minden kizárási kritérium tekintetében átvizsgálják

Vérmintákat vesznek a páciens perifériás vénás katéteréből (klinikai célból behelyezve) közvetlenül a BALF gyűjtése előtt.

Bronhoszkópia BALF kollekcióval: Ezt az eljárást szabványosított módon hajtják végre a jelenlegi klinikai irányelvek szerint. Közvetlenül az eljárás előtt szájból, orrból készült tampont és endotracheális aspirátumot (ETA) veszünk. A FIO2-t ezután 1,0-ra növeljük, és a bronchoszkópos eljárást egy 5,0 mm külső átmérőjű eldobható videoszkóppal végezzük. Három egymást követő 50 ml-es előmelegített (37 °C) izotóniás sóoldat a jobb középső lebeny mediális szegmensébe csepegtetve azonnal leszívatjuk alacsony negatív szívónyomás mellett (< 100 cm H2O), majd jégen steril üvegtartályba egyesítjük. hogy egy BALF-mintát kapjunk.

Ezt követően mini-BAL-t végeznek a jobb tüdő felső és alsó lebenyében, 20 ml izotóniás sóoldat egyszeri behelyezésével mindegyik lebenybe, azonnal steril tartályba szívva.

Mérések: Az immunsejtpopuláció összetételét, valamint a különböző sejtvonalak működését és differenciálódását egysejtes RNS szekvenálás (scRNA-seq) segítségével vizsgáljuk BALF, ETA és vér kiválasztott immunsejtjein. ki kell egészíteni tömeges RNS-szekvenálással, minta vonalkódolással és multiplexeléssel, így minden minta részletes expressziós mintázatát adja.

A BALF, ETA és az orális tamponok mikrobiomának összetételét a baktériumok riboszomális RNS-génjének 16S alegységének hipervariábilis régióinak 1-3.

Statisztikai elemzések: az R statisztikai szoftver 4.1.1-es verziójával történik (R Project for Statistical Computing) az RStudio statisztikai szoftver 1.4.1717 verzióján belül (RStudio), és p<0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető. A normalitás és a variancia homogenitásának vizsgálata qq-grafikonok és hisztogramok létrehozásával történik. A SPIEC-EASI és a HeatMaps statisztikai következtetési eszközöket fogják használni, és a korrelációs elemzések alapján a főkomponens-elemzéseket, beleértve a nem hierarchikus klaszteranalízist is, a tulajdonságok azonosítására.