미숙아 장내 미생물총 발달과 산모의 대변 이식 (PREFLOR)

헬싱키 대학 병원 산부인과에서는 임신 29주에서 34주 사이에 자간전증이나 자궁경부 부전 등을 앓고 있지만 그 외에는 건강한 임신부 36명(선별검사 양성 허용)을 모집할 예정입니다. 산모의 대변 샘플은 전염병이 있는지 주의 깊게 검사됩니다. 우리는 음성 선별 샘플을 사용하여 18명의 어머니를 모집하는 것을 목표로 하고 있습니다.

영아는 임신 30~35주에 질식 또는 CS로 태어납니다. 그룹A(연구그룹): CS에서 태어난 미숙아 10명. 이 영아들은 산모 FMT를 받게 되며, 하루 40mL의 우유를 견딜 수 있을 때 투여됩니다. B군(비교군) : 검진 음성 산모 중 미숙아 8명, 검진 검체에서 양성 소견이 있는 산모 중 4명(양성 소견이 경증 병원체인 경우, 예. Dientamoeba fragilis 또는 Blastocystis hominis)는 CS에 의해 탄생했습니다. 영아에게 항생제 치료를 하는 경우, 마지막 투여 후 48시간 이내에 이식을 실시해야 하며, 늦어도 생후 7일 이내에 이식해야 합니다. 그룹 C: 임신 30~35주에 질식으로 태어난 미숙아의 비교 그룹. 비교그룹 역시 다른 그룹과 동일하게 분변샘플만을 채취하였다.

A그룹의 경우 이식 당일과 이식 후 1, 3일에 혈액 검체를 채취합니다. 샘플은 SECFLOR 주요 시험과 동일합니다: 연구 샘플 및 일상적인 염증 지표(예: CBC 및 CRP) 평가.

비교군(B)에서는 치료 의사의 지시에 따라 CRP 및 혈구 수치 샘플을 채취합니다. 면역학적 지표를 평가하기 위해, 치료 의사가 지시한 혈액 샘플과 동시에 생후 5~7일에 1mL의 샘플을 채취합니다. 질분만 그룹에서는 추가 샘플을 채취하지 않습니다.

모든 그룹에서: 태변 검체를 채취한 후 이식 당일 대변 검체를 채취하고, 생후 2일 후부터 매주 생후 1주부터 생후 4주까지 또는 중환자실에서 퇴원할 때까지 대변 검체를 채취합니다. 퇴원 후 부모는 3, 6, 9, 12개월 된 아이의 대변 샘플을 수집합니다.

면역 발달을 평가하기 위해 CS(그룹 A 및 B)에서 태어난 모든 영아의 혈액 샘플 1-3mL를 3개월 및 6개월에 채취합니다.

방법 대변 샘플: 산모에게 29~34주에 신선한 대변 샘플을 제공하도록 요청합니다. 이는 DNA 분리를 위해 처리되고 식염수와 글리세롤에 저장됩니다. 기저귀에서 엄마와 아기의 대변을 채취하기 위한 가정용 샘플링 대변 키트가 제공됩니다. 산모와 영유아의 장내 미생물은 차세대 염기서열 분석을 사용하는 16S rRNA 기반 분석을 통해 결정됩니다. 대변 ​​DNA는 반복적인 비드 박동에 의해 추출되고 미리 정의된 프라이머를 사용하여 시퀀싱을 위해 처리됩니다. DNA 추출 및 MiSeq 실행에는 내부 참조 샘플과 모의 커뮤니티가 포함됩니다. 메타게놈 분석은 기본적으로 진행됩니다. 저항성 유전자는 획득된 항생제 저항성 유전자(ARG)를 검색하기 위해 CARD 및 Resfinder 데이터베이스에 대해 메타게놈 판독 뉴클레오티드를 뉴클레오티드로 매핑하는 것을 특징으로 합니다.

혈액 샘플: 모든 주요 면역 세포 집단의 발달은 대량 세포 계측법으로 분석하고 267개 혈장 단백질은 면역 분석법으로 분석합니다. 대량 세포 계측법 분석을 위해 약 100ul의 전혈을 수집하고 Cytodelics Whole Blood Cell Stabilizer와 1:1 비율로 혼합한 후 실온에서 10분간 배양한 후 장기 보관을 위해 80°C 냉동고로 옮겨 분석을 기다립니다. 혈장 샘플을 얻고 밀도 구배 기반 분리를 사용하여 PBMC를 분리합니다.