Ontwikkeling van de darmmicrobiota bij premature baby's en fecale transplantatie van de moeder (PREFLOR)

Op de afdeling Verloskunde van het Universitair Ziekenhuis van Helsinki zullen we 36 zwangere vrouwen rekruteren (waardoor screeningspositiviteit mogelijk is) tussen 29 en 34 weken zwangerschap, met bijvoorbeeld pre-eclampsie of baarmoederhalsinsufficiëntie, maar die verder gezond zijn. Het ontlastingsmonster van de moeder wordt zorgvuldig gescreend op besmettelijke ziekten. We streven ernaar om 18 moeders te rekruteren met negatieve screeningsmonsters.

De baby's worden in de zwangerschapsweek 30-35 vaginaal of via CS geboren. Groep A (studiegroep): 10 premature baby's geboren door CS. Deze baby's krijgen een FMT van de moeder, die wordt toegediend als ze 40 ml melk per dag verdragen. Groep B (vergelijkingsgroep): 8 premature baby's van de screening-negatieve moeders en 4 baby's van de moeders die een positieve bevinding hebben in de screeningsmonsters (in het geval dat de positieve bevinding een milde ziekteverwekker is, b.v. Dientamoeba fragilis of Blastocystis hominis) geboren door CS. In geval van antibioticabehandeling van het kind wordt de transplantatie niet eerder dan 48 uur na de laatste dosis gegeven, maar niet later dan op de leeftijd van 7 dagen. Groep C: Vergelijkingsgroep van premature baby's die vaginaal geboren zijn na een zwangerschapsduur van 30-35 weken. Voor de vergelijkingsgroep worden alleen fecale monsters genomen, net als bij de andere groepen.

Voor groep A worden bloedmonsters genomen op de dag van de transplantatie en 1 en 3 dagen erna. De monsters zijn dezelfde als in het hoofdonderzoek van SECFLOR: onderzoeksmonsters en beoordeling van routinematige ontstekingsmarkers (zoals CBC en CRP).

Uit de vergelijkingsgroep (B) worden CRP- en bloedbeeldmonsters genomen zoals voorgeschreven door de behandelend arts. Om immunologische markers te beoordelen wordt op de leeftijd van 5-7 dagen een monster van 1 ml afgenomen, gelijktijdig met bloedmonsters die door de behandelend arts zijn besteld. Er worden geen extra monsters genomen van de vaginale bevallingsgroep.

Van alle groepen: Meconiummonster wordt verzameld, en vervolgens een ontlastingsmonster op de dag van de transplantatie, en twee dagen erna en vanaf de leeftijd van 1 week wekelijks tot de leeftijd van 4 weken of tot ontslag uit de intensieve afdeling. Na ontslag nemen de ouders een ontlastingsmonster af van het kind op de leeftijd van 3, 6, 9 en 12 maanden.

Bloedmonsters van 1-3 ml van alle baby's geboren met CS (groep A en B) worden genomen op de leeftijd van drie en zes maanden om de immuunontwikkeling te beoordelen.

Methoden Fecale monsters: De moeders wordt gevraagd om na 29-34 weken een vers ontlastingsmonster af te staan. Dit wordt verwerkt voor DNA-isolatie en opgeslagen in zoutoplossing en glycerol. Er wordt een ontlastingspakket voor thuisbemonstering meegeleverd voor het bemonsteren van de uitwerpselen van moeders en baby's uit luiers. De darmmicrobiota van moeders en zuigelingen wordt bepaald met behulp van op 16S rRNA gebaseerde analyse met behulp van sequencing van de volgende generatie. Fecaal DNA wordt geëxtraheerd door herhaaldelijk kloppen van de kralen en verwerkt voor sequencing met behulp van vooraf gedefinieerde primers. DNA-extracties en MiSeq-runs omvatten interne referentiemonsters en een nepgemeenschap. Metagenomische analyse zal hoofdzakelijk worden uitgevoerd. Resistentiegenen zullen worden gekarakteriseerd door het in kaart brengen van metagenomische metingen van nucleotide tot nucleotide tegen de CARD- en Resfinder-databases om te zoeken naar verworven antibioticaresistentiegenen (ARG's).

Bloedmonsters: De ontwikkeling van alle belangrijke immuuncelpopulaties wordt geanalyseerd door middel van massacytometrie en 267 plasma-eiwitten door middel van immunoassays. Ongeveer 100 ul volbloed wordt verzameld voor massacytometrieanalyse en gemengd met Cytodelics Whole Blood Cell Stabilizer in een verhouding van 1:1, gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd en overgebracht naar een vriezer van 80°C voor langdurige opslag in afwachting van analyse. Er worden plasmamonsters verkregen en PBMC's worden geïsoleerd met behulp van op dichtheidsgradiënt gebaseerde scheiding.