早産児の腸内細菌叢の発達と母体の糞便移植 (PREFLOR)

ヘルシンキ大学病院の産科では、妊娠 29 週から 34 週の間に、子癇前症や子宮頸管機能不全などがあるが、それ以外は健康な 36 人の妊婦 (スクリーニング陽性を考慮) を採用します。 母親の糞便サンプルは、伝染病の可能性がないか慎重に検査されます。 私たちは、スクリーニング陰性サンプルを持つ 18 人の母親の採用を目指しています。

乳児は妊娠 30 ～ 35 週目に経膣または CS によって生まれます。 グループ A (研究グループ): CS によって生まれた 10 人の早産児。 これらの乳児には、母親の FMT が投与されます。これは、1 日あたり 40 mL のミルクを許容できる場合に投与されます。 グループ B (比較グループ): スクリーニング陰性の母親からの 8 人の早産児と、スクリーニングサンプルで陽性所見があった母親からの 4 人の乳児 (陽性所見が軽度の病原体、例: 軽度の病原体の場合)。 Dientamoeba fragilis または Blastocystis hominis）は CS によって生まれました。 乳児の抗生物質治療の場合、移植は最後の投与後 48 時間以内、遅くとも生後 7 日以内に行われます。 グループ C: 妊娠 30 ～ 35 週目に経膣的に生まれた早産児の比較グループ。 比較グループでは、他のグループと同様に糞便サンプルのみを取得します。

グループ A の場合、血液サンプルは移植当日と 1 日後および 3 日後に採取されます。 サンプルは SECFLOR の主要試験と同じです。研究サンプルと日常的な炎症マーカー (CBC や CRP など) の評価です。

比較グループ (B) からは、担当医師の指示に従って CRP および血球サンプルが採取されます。 免疫学的マーカーを評価するには、生後 5 ～ 7 日の時点で、担当医師の指示により血液サンプルと同時に 1 mL のサンプルが採取されます。 経膣分娩グループからは追加のサンプルは採取されません。

すべてのグループから: 胎便サンプルを採取し、移植当日とその 2 日後に生後 1 週間から週 1 回、生後 4 週間または集中治療室から退院するまで便サンプルを採取します。 退院後、両親は生後3、6、9、12か月の子供の便サンプルを採取します。

免疫発達を評価するために、CS で生まれたすべての乳児 (グループ A および B) から 3 か月と 6 か月の時点で 1 ～ 3 mL の血液サンプルが採取されます。

方法 糞便サンプル: 母親は、29 ～ 34 週目に新鮮な糞便サンプルを提供するように求められます。 これは DNA 単離のために処理され、生理食塩水とグリセロールに保存されます。 家庭用便サンプリングキットは、おむつから母親と乳児の便をサンプリングするために提供されます。 母親と乳児の腸内細菌叢は、次世代シークエンシングを使用した 16S rRNA ベースの分析を使用して決定されます。 糞便 DNA はビーズビートを繰り返すことによって抽出され、事前に定義されたプライマーを使用して配列決定のために処理されます。 DNA 抽出と MiSeq の実行には、内部参照サンプルとモック コミュニティが含まれます。 メタゲノム解析は基本的に実施します。 耐性遺伝子は、獲得された抗生物質耐性遺伝子 (ARG) を検索するために、CARD および Resfinder データベースに対してメタゲノム読み取りヌクレオチドからヌクレオチドへマッピングすることによって特徴付けられます。

血液サンプル: すべての主要な免疫細胞集団の発生はマスサイトメトリーによって分析され、267 種類の血漿タンパク質はイムノアッセイによって分析されます。 約100μlの全血をマスサイトメトリー分析用に収集し、Cytodelics Whole Blood Cell Stabilizerと1:1の比率で混合し、室温で10分間インキュベートし、分析を待つための長期保存のために80℃の冷凍庫に移します。 血漿サンプルが取得され、密度勾配ベースの分離を使用して PBMC が分離されます。