Развитие кишечной микробиоты недоношенных детей и трансплантация фекалий матери (PREFLOR)

В отделении акушерства Университетской больницы Хельсинки мы наберем 36 беременных женщин (с учетом положительного результата скрининга) в период от 29 до 34 недель беременности, например, с преэклампсией или недостаточностью шейки матки, но в остальном здоровых. Образец фекалий матери тщательно проверяется на наличие заразных заболеваний. Мы планируем набрать 18 матерей с отрицательными результатами скрининга.

Дети рождаются на 30-35 неделе беременности либо вагинально, либо с помощью КС. Группа А (исследовательская группа): 10 недоношенных детей, рожденных путем КС. Эти младенцы получат материнскую ТФМ, которую будут проводить, когда они будут переносить молоко в дозе 40 мл/день. Группа Б (группа сравнения): 8 недоношенных детей от матерей с отрицательным результатом скрининга и 4 ребенка от матерей, имеющих положительный результат скрининговых проб (в случае, если положительный результат является легким возбудителем, например Dientamoeba fragilis или Blastocystis hominis), рожденные CS. В случае лечения младенца антибиотиками трансплантат вводят не ранее, чем через 48 часов после последней дозы, но не позднее 7-дневного возраста. Группа С: Группа сравнения недоношенных детей, рожденных естественным путем на сроке беременности 30-35 недель. Для группы сравнения, как и в других группах, берут только образцы фекалий.

Для группы А образцы крови берут в день трансплантации, а также через 1 и 3 дня после нее. Образцы те же, что и в основном исследовании SECFLOR: образцы для исследования и оценка рутинных маркеров воспаления (таких как общий анализ крови и СРБ).

У группы сравнения (Б) по назначению лечащего врача берут пробы СРБ и анализа крови. Для оценки иммунологических маркеров в возрасте 5-7 дней одновременно с пробами крови по назначению лечащего врача берут пробу объемом 1 мл. Никаких дополнительных образцов в группе вагинальных родов не берут.

Из всех групп: собирают образец мекония, а затем образец стула в день трансплантации и через два дня, начиная с 1-недельного возраста, еженедельно до 4-недельного возраста или до выписки из отделения интенсивной терапии. После выписки родители соберут образцы стула ребенка в возрасте 3, 6, 9 и 12 месяцев.

Образцы крови объемом 1–3 мл у всех детей, рожденных КС (группы А и В), берут в возрасте трех и шести месяцев для оценки развития иммунитета.

Методы Образцы кала: Матери просят предоставить свежий образец кала на сроке 29–34 недель. Его обрабатывают для выделения ДНК и хранят в физиологическом растворе и глицерине. Для взятия проб фекалий матери и ребенка из подгузников предоставляется домашний набор для отбора проб кала. Кишечную микробиоту матерей и младенцев определяют с помощью анализа на основе 16S рРНК с использованием секвенирования нового поколения. Фекальную ДНК извлекают путем повторного взбивания шариков и обрабатывают для секвенирования с использованием заранее определенных праймеров. Экстракция ДНК и запуски MiSeq включают внутренние эталонные образцы и имитацию сообщества. По существу будет проведен метагеномный анализ. Гены устойчивости будут охарактеризованы путем сопоставления метагеномных считываний нуклеотидов с нуклеотидами в базах данных CARD и Resfinder для поиска приобретенных генов устойчивости к антибиотикам (ARG).

Образцы крови: развитие всех основных популяций иммунных клеток анализируется с помощью массовой цитометрии, а 267 белков плазмы — с помощью иммуноанализа. Около 100 мкл цельной крови собирают для масс-цитометрического анализа и смешивают со стабилизатором клеток цельной крови Cytodelics в соотношении 1:1, инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут и переносят в морозильную камеру с температурой 80°C для длительного хранения в ожидании анализа. Получают образцы плазмы, РВМС выделяют с использованием разделения на основе градиента плотности.