Entwicklung der Darmmikrobiota bei Frühgeborenen und mütterliche Stuhltransplantation (PREFLOR)

In der Abteilung für Geburtshilfe des Universitätsklinikums Helsinki werden wir 36 schwangere Frauen (unter Berücksichtigung eines positiven Screenings) zwischen der 29. und 34. Schwangerschaftswoche rekrutieren, die beispielsweise an Präeklampsie oder Gebärmutterhalsinsuffizienz leiden, ansonsten aber gesund sind. Die Stuhlprobe der Mutter wird sorgfältig auf ansteckende Krankheiten untersucht. Unser Ziel ist es, 18 Mütter mit negativen Screening-Proben zu rekrutieren.

Die Säuglinge werden in der 30. bis 35. Schwangerschaftswoche entweder vaginal oder durch CS geboren. Gruppe A (Studiengruppe): 10 von CS geborene Frühgeborene. Diese Säuglinge erhalten eine mütterliche FMT, die verabreicht wird, wenn sie 40 ml Milch pro Tag vertragen. Gruppe B (Vergleichsgruppe): 8 Frühgeborene von den im Screening negativen Müttern und 4 Säuglinge von den Müttern, die einen positiven Befund in den Screening-Proben haben (falls der positive Befund ein milder Erreger ist, z. B. Dientamoeba fragilis oder Blastocystis hominis), geboren von CS. Im Falle einer Antibiotikabehandlung des Säuglings erfolgt die Transplantation frühestens 48 Stunden nach der letzten Dosis, spätestens jedoch im Alter von 7 Tagen. Gruppe C: Vergleichsgruppe vaginal geborener Frühgeborener in der 30.–35. Schwangerschaftswoche. Für die Vergleichsgruppe werden wie in den anderen Gruppen nur Stuhlproben entnommen.

Bei Gruppe A werden am Tag der Transplantation sowie 1 und 3 Tage danach Blutproben entnommen. Die Proben sind die gleichen wie in der SECFLOR-Hauptstudie: Forschungsproben und Bewertung routinemäßiger Entzündungsmarker (wie CBC und CRP).

Von der Vergleichsgruppe (B) werden nach Anweisung des behandelnden Arztes CRP- und Blutbildproben entnommen. Zur Beurteilung immunologischer Marker wird im Alter von 5 bis 7 Tagen eine Probe von 1 ml zusammen mit den vom behandelnden Arzt angeordneten Blutproben entnommen. Es werden keine zusätzlichen Proben aus der Gruppe der vaginalen Entbindungen entnommen.

Aus allen Gruppen: Am Tag der Transplantation und zwei Tage danach und ab einem Alter von 1 Woche wird wöchentlich eine Mekoniumprobe und dann eine Stuhlprobe entnommen, bis das Alter 4 Wochen alt ist oder bis zur Entlassung aus der Intensivstation. Nach der Entlassung entnehmen die Eltern eine Stuhlprobe des Kindes im Alter von 3, 6, 9 und 12 Monaten.

Zur Beurteilung der Immunentwicklung werden 1–3 ml Blutproben aller durch CS geborenen Säuglinge (Gruppe A und B) im Alter von drei und sechs Monaten entnommen.

Methoden Stuhlproben: Die Mütter werden gebeten, in der 29.–34. Woche eine frische Stuhlprobe abzugeben. Dieses wird zur DNA-Isolierung verarbeitet und in Kochsalzlösung und Glycerin gelagert. Für die Probenahme von Mutter- und Säuglingskot aus Windeln wird ein Stuhlset für die Probenahme zu Hause bereitgestellt. Die Darmmikrobiota von Müttern und Säuglingen wird mittels 16S-rRNA-basierter Analyse mittels Next-Generation-Sequencing bestimmt. Fäkale DNA wird durch wiederholtes Schlagen der Kügelchen extrahiert und für die Sequenzierung unter Verwendung vordefinierter Primer verarbeitet. DNA-Extraktionen und MiSeq-Läufe umfassen interne Referenzproben und eine Schein-Community. Im Wesentlichen wird eine metagenomische Analyse durchgeführt. Resistenzgene werden charakterisiert, indem metagenomische Lesevorgänge Nukleotid für Nukleotid anhand der CARD- und Resfinder-Datenbanken kartiert werden, um nach erworbenen Antibiotika-Resistenzgenen (ARGs) zu suchen.

Blutproben: Die Entwicklung aller wichtigen Immunzellpopulationen wird durch Massenzytometrie und 267 Plasmaproteine ​​durch Immunoassays analysiert. Etwa 100 µl Vollblut werden für die Massenzytometrieanalyse gesammelt und mit Cytodelics Whole Blood Cell Stabilizer im Verhältnis 1:1 gemischt, 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und zur Langzeitlagerung bis zur Analyse in einen Gefrierschrank bei 80 °C überführt. Es werden Plasmaproben gewonnen, PBMCs mittels Dichtegradienten-Trennung isoliert.