For tidligt spædbørn Intestinal Mikrobiota Udvikling og Maternal Fæcal Transplantation (PREFLOR)

På Obstetrisk afdeling på Helsinki Universitetshospital vil vi rekruttere 36 gravide kvinder (der giver mulighed for screening af positivitet) mellem 29 og 34 uger af graviditeten med for eksempel svangerskabsforgiftning eller cervixinsufficiens, men er ellers raske. Moderens afføringsprøve screenes omhyggeligt i tilfælde af smitsomme sygdomme. Vi sigter mod at rekruttere 18 mødre med negative screeningsprøver.

Spædbørnene fødes i svangerskabsuge 30-35 enten vaginalt eller ved CS. Gruppe A (undersøgelsesgruppe): 10 for tidligt fødte børn født af CS. Disse spædbørn vil modtage en mors FMT, som vil blive administreret, når de tåler mælk 40 ml/dag. Gruppe B (sammenligningsgruppe): 8 for tidligt fødte spædbørn fra de screeningsnegative mødre og 4 spædbørn fra de mødre, der har et positivt fund i screeningsprøverne (i tilfælde af at det positive fund er et mildt patogen, f.eks. Dientamoeba fragilis eller Blastocystis hominis) født af CS. Ved antibiotikabehandling af spædbarnet gives transplantationen tidligst 48 timer efter sidste dosis, dog senest 7 dages alderen. Gruppe C: Sammenligningsgruppe af præmature spædbørn født vaginalt 30-35 ugers svangerskab. For sammenligningsgruppen udtages kun fæcesprøver som i de øvrige grupper.

For gruppe A tages blodprøver på transplantationsdagen og 1 og 3 dage efter. Prøverne er de samme som i SECFLOR hovedforsøg: forskningsprøver og vurdering af rutinemæssige inflammatoriske markører (såsom CBC og CRP).

Fra sammenligningsgruppen (B) udtages CRP- og blodtalsprøver som bestilt af den behandlende læge. For at vurdere immunologiske markører udtages en prøve på 1 ml i en alder af 5-7 dage samtidig med blodprøver bestilt af den behandlende læge. Der tages ingen yderligere prøver fra den vaginale fødselsgruppe.

Fra alle grupper: Meconiumprøve udtages, og derefter en afføringsprøve på transplantationsdagen og to dage efter og startende fra 1 uges alderen ugentligt indtil 4 ugers alderen eller indtil udskrivelse fra intensivafdelingen. Efter udskrivelsen vil forældrene tage en afføringsprøve af barnet i en alder af 3, 6, 9 og 12 måneder.

Blodprøver på 1-3 ml fra alle spædbørn født af CS (gruppe A og B) tages i en alder af tre og seks måneder for at vurdere immunudvikling.

Metoder Fækale prøver: Mødrene bliver bedt om at give en frisk afføringsprøve ved 29-34 uger. Dette behandles til DNA-isolering og opbevares i saltvand og glycerol. Der medfølger et hjemmeafføringssæt til prøveudtagning af mødre og spædbarns afføring fra bleer. Den intestinale mikrobiota af mødre og spædbørn bestemmes ved hjælp af 16S rRNA-baseret analyse ved hjælp af næste generations sekventering. Fækalt DNA ekstraheres ved gentagen perleslagning og behandles til sekventering ved anvendelse af foruddefinerede primere. DNA-ekstraktioner og MiSeq-kørsler inkluderer interne referenceprøver og et falsk fællesskab. Metagenomisk analyse vil i det væsentlige blive udført. Resistensgener vil blive karakteriseret ved at kortlægge metagenomiske læsninger af nukleotid til nukleotid mod CARD- og Resfinder-databaserne for at søge efter erhvervede antibiotikaresistensgener (ARG'er).

Blodprøver: Udviklingen af ​​alle større immuncellepopulationer analyseres ved massecytometri og 267 plasmaproteiner ved immunoassays. Ca. 100 µl fuldblod opsamles til massecytometrianalyse og blandes med Cytodelic Whole Blood Cell Stabilizer i et forhold på 1:1, inkuberes i stuetemperatur i 10 minutter og overføres til en 80°C fryser til langtidsopbevaring i afventning af analyse. Plasmaprøver opnås, PBMC'er isoleres ved hjælp af tæthedsgradientbaseret adskillelse.