오가노이드 기술을 기반으로 방광암에 대한 관류 화학요법제의 효능을 평가하기 위한 연구 프로토콜

1. 배경 방광암은 방광의 요로상피에서 기원하는 악성종양으로 우리나라 비뇨생식기종양의 발생률 1위를 차지한다. 그 중 방광요로상피암이 가장 흔하며 방광암의 90% 이상을 차지한다. 방광암은 종양이 방광으로 침범한 깊이와 예후 특성에 따라 임상적으로 비근침윤성 방광암(NMIBC)과 근육침습성 방광암(MIBC)으로 분류되며, NMIBC가 주요 유형으로, 전체 방광암 환자의 약 75%.

   NMIBC는 일반적으로 경요도 방광종양 절제술(TURBt)로 치료됩니다. NMIBC는 질병의 초기 단계임에도 불구하고 재발률이 높으며, 연구에 따르면 5년 재발률은 약 70%로 보고됩니다. 따라서 수술 후 방광관류화학요법은 방광암의 재발을 예방하기 위한 핵심 치료방법이 되었습니다. 60년 이상 사람들은 보다 효과적인 방광관류 약물과 방법을 탐구해 왔습니다. 1961년에 Thiotepa가 방광관류요법으로 사용되었고, 1976년 모랄레스는 방광암이 면역결핍과 관련이 있다고 믿었고, 이에 따라 BCG 방광관류요법은 큰 성공을 거두며 방광종양에 대한 새로운 면역요법의 길을 열었습니다. , 이는 널리 평가되어 왔으며 여전히 가장 효과적인 방광 관류 약물로 간주됩니다. 그러나 BCG 주입은 요도 및 전립선 육아종, 방광 자극, 발열, 혈뇨 및 기타 국소 발현 및 전신 인플루엔자 유사 증상을 포함한 심각한 부작용을 일으킬 수 있으며 일부 환자에서는 불내증 및 치료 중단을 초래하여 광범위한 임상 적용이 제한되었습니다. BCG를 적용합니다. 연구에 따르면 방광에 화학요법제를 방광 내 주입하면 표재성 방광암의 단기 재발률을 약 15~20%, 장기 재발률을 약 6% 줄일 수 있는 것으로 나타났습니다. 현재 방광 점적 주입에는 (1) 피렌졸루비신; (2) 젬시타빈; (3) 미토마이신; (4) 에피루비신; (5) 독소루비신; (6) 젬시타빈 및 피렌졸루비신을 사용한 교대 방광 주입 화학요법; 및 (7) 기타 복합 주입 화학요법. 그러나 화학요법 약물의 종류가 다양하기 때문에 약물 선택은 주로 임상 경험이나 특정 연구 결과에 의존하고, 통일된 기준이 없으며, 맹목적이고 경험적이며 무작위적입니다. 중국의 비뇨기과 질환 진단 및 치료 지침에도 관류 약물의 선택을 규정하지 않았고, 일부 화학요법 약물에 대해 개별 환자가 자연적인 저항성을 보였는데, 임상에서 환자가 약물 적용에 민감하지 않다고 판단하면 약물이 심각한 결과를 초래한 것입니다. 독성 부작용이 발생하고 심지어 다중 약물 내성(multi-drug resistance, MDR) 현상이 발생하여 임상 재발률이 여전히 36%-44%에 달하며 동시에 이 그룹의 환자의 종양은 빠르게 진행되어 치료 방법을 다시 선택할 기회를 잃습니다. 따라서 개별화된 화학요법을 달성하기 위해 일차 약물 내성 약물의 선택을 피하고 민감도가 높은 약물을 직접 선택하는 방법이 방광 관류 화학요법 연구에서 핫스팟이 되었습니다.

   정밀 종양치료의 실현은 약물 민감도의 검출에 크게 좌우됩니다. 정밀한 개별화된 화학요법 약물 스크리닝 실험을 통해 치료 시작 전 각 환자에 대해 가장 효과적이고 독성이 가장 적은 치료법을 판단할 수 있으므로, 단일 환자를 위한 화학요법 치료법을 제안하는 것은 정밀 치료를 실현하기 위한 새로운 연구 방향입니다. 방광암 치료 및 방광암 항암화학요법의 효율성을 높이기 위한 것입니다. 이전에는 더 일반적으로 사용되는 전임상 모델은 전통적인 종양 세포주와 인간 유래 종양 조직 이종 이식편(PDX)이었습니다. 종양세포주 배양방법은 단순하지만 환자의 종양세포 성장상태를 모사하기에는 미흡하고, 그 약물스크리닝 시스템으로 스크리닝된 약물은 임상적용 가치가 낮다. PDX는 생체 내 종양 특성을 모사하고 종양을 보존할 수 있지만 미세환경은 낮은 안정성의 종양원성, 긴 모델링 및 평가 기간(반년에서 1년), 시간 소모적이고 노동력이 많이 들고 처리량이 많은 약물 스크리닝을 생성하고 사용하기 어렵다는 등 명백한 한계를 가지고 있습니다. 따라서 방광암의 이질성과 복잡성을 모방할 수 있는 약물 민감도 분석 모델의 개발은 고유한 유전적, 환경적 요인을 표적으로 삼아 위험을 최소화하고 의학적 개입의 효과를 최적화하기 위한 보다 개인화된 치료 및 예방 전략을 개발하는 데 필요해졌습니다. 그리고 개인의 라이프 스타일 특성.

   환자 유래 오가노이드(PDO)는 시험관 내에서 자가 조립된 줄기 세포에 의해 형성된 3D 오가노이드 구조로, 여러 장기 특이적 세포 유형으로 분화될 수 있으며 세포-세포 및 세포 주변 매트릭스 상호 작용과 공간적 위치 패턴을 나타낼 수 있습니다. 시험관 내에서는 실제 기관의 주요 기능과 구조 중 일부를 갖고 있으며 안정적인 표현형을 가지고 있습니다. 안정적인 표현형 및 유전적 특성을 지닌 구조. 2차원 종양 세포주 및 PDX와 비교하여 종양 오가노이드는 환자 자신의 조직을 사용하여 직접 배양할 수 있으며 동시에 이러한 오가노이드는 원발 종양의 주요 특성 중 일부를 잘 복제하고 병리형태 및 생물학적 메커니즘을 유지할 수 있습니다. 종양 조직의 이질성과 보다 현실적인 종양 미세환경을 보존하고 짧은 성장 주기를 갖습니다. 이는 임상 치료 결정에 도움이 될 가능성과 함께 방사선 요법 약물, 분자 표적 약물, 항종양 항체 및 기타 약물의 약물 민감성 테스트를 위해 임상 암 환자에게 사용하여 약물에 대한 환자의 반응성을 예측하는 데 도움이 됩니다.

   2018년 사이언스(Science)는 약물 민감성 테스트를 위해 전이성 위장 종양 유사 기관을 사용하는 것에 대한 연구를 보고했습니다. 이 연구에서는 21명의 임상 환자와 일련의 표적화 및 화학요법 약물에 대한 해당 PDO 간의 민감도 차이를 비교 분석했으며 그 결과는 다음과 같습니다. 둘 사이의 강한 일관성. 실제 환자 결과와 비교하여 PDO는 잘 예측되었다(민감도 100%, 특이도 93%, 양성 예측도 88%, 음성 예측도 100%).20 2020년 Yao Y 등은 국소 진행성 직장암 112건의 생검을 사용하여 96개의 직장암 오가노이드를 구축하고 그 중 80개를 선택하여 방사선 요법에 대한 반응을 테스트했으며, 그 결과 직장암 오가노이드가 방사선 요법에 민감하고 환자의 임상 반응. 결과는 방사선 치료에 대한 직장암 오가노이드의 민감도가 환자의 임상 반응과 매우 일치한다는 것을 보여주었습니다(민감도 78%, 특이도 92%, 정확도 84%). 이어서, 위암, 유방암 등의 종양에서는 PDO와 종양 환자의 약물 반응 사이의 일치성도 밝혀졌다. Yan HHN 등은 34명의 위암 환자의 종양 조직, 전암성 조직 및 림프절 전이를 사용하여 위암 오가노이드 라이브러리를 구축했습니다. 그 중 두 명은 종양 전이가 발생했고 수술 후 시스플라틴과 5-FU 병용 요법을 받았는데 둘 다 좋은 반응을 보였습니다. 다른 1예는 수술 전 화학요법을 받았고 수술 후 카페시타빈에 반응하지 않았다. 이 세 가지 사례에서 해당 PDO 화합물의 민감도를 조사한 결과, PDO의 약물 민감도가 각 환자의 임상 반응과 완벽하게 일치하는 것으로 나타났습니다. Guillen KP 등은 내분비 요법 저항성 종양 샘플을 사용하여 PDX 및 PDO를 구성했습니다. 재발성 및 전이성 유방암 환자를 대상으로 하였으며, 이들 샘플을 조직형태학, 게놈학 및 약물 감수성으로 검사했습니다. 결과는 유방암 PDX와 PDO 모두 근원 종양의 조직생물학적 및 게놈 특성을 매우 감소시켰으며 둘 다 항종양 약물에 일관되게 반응한다는 것을 보여주었습니다. 본 연구에서 IIA기 삼중음성 유방암 환자는 수술 전 화학요법과 수술 치료를 받은 지 약 1년 만에 간 전이가 발생했습니다. 연구자들은 PDO 및 PDX 구조물에 대해 체외 약물 민감성 테스트를 실시한 결과 미세소관 억제제 에리불린이 최고의 치료 효과를 갖는 것으로 나타났습니다. 이 결과를 토대로 환자들에게 에리불린 치료를 지시했고, 그 결과 투여 후 거의 5개월 동안 간 전이가 완전히 완화됐다. 이러한 연구는 임상 종양 환자의 약물 치료를 안내하는 PDO의 가능성을 어느 정도 확인합니다. 또한 정상유사기관과 PDO의 약물 반응 차이를 비교함으로써 선택성이 높은 약물이 임상 환자의 독성 부작용을 줄이는 데 도움이 되는 것으로 나타났다. 따라서 가장 적절한 약물 요법을 찾기 위한 PDO의 약물 감수성 테스트는 종양 환자의 임상 효능을 향상시키고, 독성 부작용, 약물 내성 위험 및 종양 재발 가능성을 감소시키며, 종양 환자의 이익을 극대화하는 데 도움이 될 것이 분명합니다. 환자.

   따라서 환자 유래 방광암 오가노이드 모델을 기반으로 비근육 침습성 방광암 관류 화학 요법 약물 감수성 테스트 실험을 수행하고 방광암 오가노이드에 대한 표준화된 약물 감수성 테스트 시스템을 구축하며 방광암 오가노이드는 최적의 약물 조합 요법을 선별하고, 새로운 개별화된 치료 프로토콜의 임상 개발을 지원하며, 진정한 "대체 약물 테스트"를 달성하기 위해 다기관 임상 검증을 수행합니다.

2. 연구 질문 및 목적 연구 질문: 본 연구는 오가노이드 민감성 약물 주입군, 오가노이드 비민감성 약물 주입군, 및 BCG 주입군을 코호트 연구를 통해 비교하고, 일원 K-M 생존 분석을 통해 세 군 간의 재발률 차이를 비교하였다. 방광암에 대한 개별 관류 화학 요법을 안내할 때 종양 유사 장기 약물 민감도 분석의 가치를 평가하기 위한 평가입니다.

   연구 목적: 방광암 환자의 수술 후 관류 화학요법을 안내하는 종양 유사 장기 약물 민감도 방법의 임상적 효능을 관찰하여 방광암에 대한 개별 관류 화학 요법을 안내하는 종양 유사 장기 약물 민감도 실험의 적용 가치를 평가하는 것입니다.

   자세한 내용은 결과 측정을 참조하세요.

3. 연구 방법론 3.1 연구 설계 이 프로토콜은 항종양성 약물의 임상 시험에 대한 기술 지침을 기반으로 하며 다기관, 코호트 연구를 채택합니다.

3.1.1 그룹화 자세한 내용은 그룹 및 중재를 참조하세요. 3.1.2 방광암 오가노이드 준비

1. 방광암 샘플 수집 샘플 수집 과정은 병원 윤리 및 서명된 사전 동의에 따라 진행됩니다. 실험에 참여하는 환자는 병리학적으로 방광암으로 진단되어야 하며, 병리학적 확인, 오가노이드 배양, 약물 감수성 검사 등을 위해 수술로 채취한 종양 샘플의 크기는 가능한 한 0.8 cm*3 이상이어야 합니다. 종양 조직은 조직 허혈 시간 및 냉동 보존에 주의하여 수집해야 하며, 수집 시간은 초기 저산소증으로 인한 종양 조직의 스트레스 괴사를 피하기 위해 조직을 인간 혈액 순환에서 제거할 때 5분 이내여야 합니다.
2. 방광암 장기 준비 조직 처리 과정에서 물리적 파쇄 및 콜라게나제 소화를 사용하여 조직 샘플을 처리했으며 처리 및 소화된 오가노이드를 배양하기 전에 직경이 다른 세포 체를 통해 여과하여 얻은 오가노이드를 만들어야 했습니다. 규모가 균일하고 표준의 통일이 용이합니다. 그런 다음 3차원 매트릭스 젤에 심고 특수 배지에서 배양했습니다.
3. 방광암 오가노이드의 확장 및 배양 오가노이드의 성장 상태를 현미경으로 관찰하고, 면역조직화학 및 면역형광법을 사용하여 오가노이드의 특성을 파악하고, 종양 세포의 존재를 확인하고, 형태를 평가했습니다. 방광암 카르시노이드 기관을 계대배양하고 냉동시켰습니다.

3.1.3 방광암 종양 오가노이드 약물 감수성 검사 현미경으로 오가노이드의 수를 관찰하여 약물 감수성 테스트를 실시할 수 있는 수에 도달한 후 오가노이드 배지를 흡인하여 폐기했습니다. 페트리 접시에 소화액 3 mL를 넣고 비말을 불어서 37℃에서 소화시킨 후 오가노이드를 불어서 현미경으로 관찰하여 오가노이드가 2~3개의 세포를 포함하는 균질한 세포 덩어리로 소화되면 2배 첨가한다. 소화를 종료하기 위한 소화액의 양. 1500 rpm으로 세포를 3분간 원심분리한 후 상층액을 흡인하여 버립니다.

배지로 세포를 다시 일시 중단하고 기포를 생성하지 않으려고 배지를 젤 1:1.5 비율로 희석한 다음 단일 채널 피펫을 사용하여 혼합 젤을 10uL/웰로 3,000개의 오르가노이드가 포함된 미리 냉각된 384웰 플레이트에 접종합니다. 웰당(이 작업은 얼음 위에서 수행되었습니다). 배지와 검을 1:1(40uL:40uL)의 비율로 혼합한 후, 384웰 플레이트에 10uL/웰씩 블랭크 그룹으로 분주하였다. 384웰 플레이트를 살짝 두드려서 겔 방울이 웰 바닥에 편평하게 놓이도록 한 후, 플레이트를 인큐베이터에 30분 동안 놓아 겔 방울이 굳도록 하고 미리 데워진 BCOs 배지를 40uL로 첨가했습니다. /잘. 약물 테스트 웰과 대조 웰 주변의 빈 웰에 40uL의 PBS 용액을 첨가하고 액체 증발과 겔 방울의 건조를 방지하기 위해 이산화탄소 인큐베이터에 두었습니다.

3일 동안 배양하고 관찰한 후, 절반 부피의 유체 교환을 위해 각 웰의 샘플 상태에 대한 현미경 관찰을 수행했습니다.

다음 표의 요구 사항에 따라 약물 감수성 테스트 프로토콜을 설계하고 대조군, 공백 그룹 및 약물 테스트 그룹을 설정하고 지침에 따라 약물을 용해시킨 후 각각 오가노이드 배지를 사용하여 6가지 농도로 4배 희석했습니다. 발광 세포 생존율 분석을 사용하여 반억제 농도(IC50), 종양 세포 억제(IR), IC50과 혈액 약물 농도의 편차 정도, AUC(투여량 하의 면적)의 다양한 농도에서 약물을 테스트했습니다. -반응곡선), 약물감수성분석 결과의 평가기준은 IC50과 IR을 주요 지표로 하고, IC50과 혈액약물농도의 편차 정도와 AUC 결과를 보조판정으로 한다(자세한 내용은 3.10.3)을 참고하세요. 유기체 종류의 생존과 증식에 대한 영향을 평가하고, 약물 사용에 대한 임상적 지침을 제공합니다.

표 1 약물 민감성 테스트 그룹화 방법 약물 민감성 테스트 그룹화 방법 빈 그룹: 오가노이드 없음, 약물 추가 없음, 플레이트당 6개의 복제 웰. 대조군: 오가노이드를 접종하고 약물 노출을 추가하지 않았습니다. 약물 테스트 그룹: 오가노이드를 접종하고 약물 노출을 추가합니다. 3.1.4 화학요법 약물 병용 요법 표 2 관류 화학요법 약물 젬시타빈 □ 피로루비신 □ 에피루비신 □ 실베스트롤 □ 아드리아마이신(독소루비신) □ 3.2 연구 장소 및 연구 모집단(출처 및 포함 제외 기준) 자세한 내용은 연구 설계 참조 3.3 연구 변수(인자) 및 측정 긍정적 대조군은 오가노이드 배양과 오가노이드 약물 민감도 테스트를 받지 않았습니다.

나머지 환자들은 약물 감수성 테스트 프로토콜에 따라 오가노이드 약물 감수성 테스트를 거쳤으며, 발광 세포 생존율 분석을 사용하여 약물의 반억제 농도(IC50), 종양 세포의 억제율(IR), 정도를 테스트했습니다. 농도별 IC50과 혈중약물농도의 편차, AUC(용량-반응곡선하 면적), 약물감수성시험 결과의 평가기준은 IC50,IR을 주요지표로 하였다. 혈중 약물 농도와의 IC50 편차에 따라 AUC는 보조 판단으로 나타납니다(3.10.3 참조). 자세한 내용은) 계급 기관의 생존과 확산에 미치는 영향을 평가합니다.

오가노이드 배양 및 약물 감수성 검사를 받은 환자들은 임상의의 경험에 따라 화학요법제의 방광 주입을 받았습니다. 5가지 관류 약물에는 젬시타빈, 피록시캄, 에피루비신, 미토마이신, 아드리아마이신(독소루비신)이 포함되었습니다. 오가노이드 약물 감수성 테스트에서 관류 약물의 민감도에 따라 오가노이드 민감성 약물 관류 그룹과 오가노이드 비민감성 약물 관류 그룹으로 분류되었습니다. 관류 요법: 유도 관류 화학 요법(수술 후 4~8주, 주 1회, 총 4회) 및 유지 관류 화학 요법(월 1회, 총 11회)이 포함됩니다.

BCG 주입 요법: 우수한 면역 반응을 유지하기 위해 6회 유도 주입 후 2주마다 1회 3회 추가 주입, 한 달에 한 번 10회 유지 주입, 1년에 걸쳐 총 19회 주입.

임상 측정: 오가노이드에 민감한 약물 관류 그룹과 오가노이드에 민감한 약물 관류 그룹의 두 그룹의 환자를 추적 관찰하고 1차 및 2차 연구 종점에 대해 분석하고 일원 Kaplan-Meier 생존 분석을 수행했습니다. 두 그룹 간의 재발률 차이를 비교합니다. COX 위험 비율 모델을 사용하여 두 그룹 간 환자의 성별, 연령, 종양 단계 및 등급의 재발 위험 비율을 분석했습니다.

3.4 연구 결과 유효성 평가에는 RECIST1.1 기준을 사용하였고, 보조 유효성 평가 기준으로는 Choi 기준과 mRECIST 기준을 사용하였다.

1차 연구 종료점: 1년 종양 무재발 생존율, 3년 종양 무재발 생존율.

2차 평가변수: 1년 종양 무진행 생존율, 3년 종양 무진행 생존율.

3.5 추적조사 장기 유사 민감성 약물 관류군과 장기 유사 비민감성 약물 관류군 두 그룹의 환자를 추적 관찰하고 1차 및 2차 연구 종료점을 분석했습니다.

방광경검사는 NMIBC 환자를 검토할 때 선택하는 방법이며 방광경검사에 대한 비침습적 대안은 없습니다. 따라서 NMIBC 추적관찰은 정기적인 방광경 검사를 기반으로 해야 합니다. 검사 중 방광점막에 의심스러운 병변이 발견되면 병리학적 소견을 명확히 하기 위해 생검을 시행해야 합니다. 필요한 경우 소변 박리 세포검사, CT/CTU 또는 MRI/MRU가 수행되지만 어느 것도 방광경 검사를 완전히 대체할 수는 없습니다.

방광경 검토 계획: 저위험 NMIBC는 1년차에는 수술 후 3개월과 12개월에 1회 실시하고, 이후 3년차까지는 1년에 1회 실시합니다. 중등도 위험 NMIBC는 수술 후 3개월, 6개월, 12개월에 한 번, 2년차에는 6개월마다, 이후 3년차까지는 매년 실시합니다. 고위험 NMIBC는 처음 2년 동안은 3개월마다, 그 이후로는 3년까지 6개월마다 실시합니다.

3.6 표본 크기 293개 사례의 표본 크기는 연구 종료점에 대한 요구 사항을 충족하기에 충분했습니다.

오가노이드 비민감성 약물 관류군에서는 73건, 오가노이드 민감성 약물 관류군 및 양성 대조군에서는 각각 110건이 있었습니다.

계산 기준:

1. 1년 무종양 생존율 연구 종점에 대한 표본 크기 계산: 1년 무종양 생존율은 오가노이드 민감성 약물 주입 그룹에서 73%, 오가노이드 비감수성 약물 주입 그룹에서 50%로 예상됩니다. 약물 주입군은 일측성 α=0.05, β=0.2이고, 두 군의 표본 크기 비율은 1(실험군:대조군)이고, 두 군의 표본 크기는 실험군의 경우 55건, 대조군은 55예, 양성대조군은 110예였다. 대조군은 55예, 총 110예, 20% shedding을 고려하면 총 138예의 표본크기가 필요하다.
2. 3년 무종양 생존율 연구의 종점에 따라 표본 크기를 계산합니다. 오가노이드에 민감한 약물 주입 그룹의 3년 무종양 생존율은 63%가 될 것으로 예상됩니다. 오가노이드 비민감성 약물 주입군의 연간 무종양 생존율은 40%, 일방성 α=0.05, β=0.2, 두 그룹의 표본 크기 비율은 1(실험군:대조군)이 됩니다. ), 두 그룹의 표본 크기는 20% shedding을 고려하여 실험군 58건, 대조군 58건, 대조군 11건으로 계산되며, 전체 표본 크기는 138개의 경우가 필요합니다. 대조군은 58예, 총 116예, 20% shedding을 고려하여 총 146예의 표본크기가 필요하였다.
3. 문헌 결과에 따르면 양성 대조군의 1년 무종양 생존율은 75%이며, 사전 테스트에 따르면 오가노이드 민감성 약물 주입군의 1년 무종양 생존율은 그룹은 73%로 예상되며, 비열등성 컷오프 값은 0.2(대조군-실험군)이고, 두 그룹의 표본크기 비율은 일방적인 알파가 0.05, 베타가 0.2로 1이다. , 두 군의 표본크기는 오가노이드 민감성 약물투여군 74건, 양성대조군 74건, 실험군 총 116건으로 계산된다. 74예, 양성대조군 74예 등 총 148예이다. 20% 쉐딩을 고려하면 필요한 총 표본 크기는 186개 사례입니다.
4. 문헌 결과에 따르면 양성 대조군의 3년 무종양 생존율은 65%이며, 사전 테스트에 따르면 오가노이드 민감성 약물 주입군의 3년 무종양 생존율은 집단은 63%로 예상되며, 비열등성 컷오프 값은 0.2(대조군-검정군)이고, 일측성 알파가 0.05이고 베타가 이면 두 집단의 표본크기 비율은 1이다. 0.2에 따르면, 두 그룹의 표본 크기는 오가노이드 민감성 약물 주입 그룹이 88건, 양성 대조군이 88건으로 계산됩니다. 양성대조군은 88례, 88례로 총 176례이며, 20% shedding을 고려하여 총 220례의 표본크기가 필요하였다.

3.7 연구 기술 흐름도 이 섹션(사진)은 프로젝트의 기술 경로를 설명합니다. 3.8 데이터 수집 및 관리 데이터는 관찰과 기록을 통해 수집되었으며, 원본 데이터가 원본 기록과 일치하는지 항목별로 확인하여 원본 데이터를 확인했습니다. 실험이 끝나면 통계 분석을 위해 통계학자에게 인계되었습니다.

3.9 통계 분석 방법 측정된 데이터는 일반적으로 평균, 표준 편차, 중앙값, 최소값 및 최대값을 포함하는 기술 통계입니다. 범주형 변수의 경우 빈도와 백분율에 따라 기술통계를 수행합니다.

통계 분석을 위해 통계 소프트웨어 SPSS를 적용했습니다. 측정 데이터는 평균±표준편차(x±s), t-test, one-way ANOVA(LSD 방법을 이용한 post hoc test two-by-two 비교), 비율 비교를 위해 chi-square test를 사용하였고, 상관 분석에는 Spearman의 방법이 사용되었습니다. p < 0.05는 차이가 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

3.10 품질 관리 3.10.1 클래스 장기 HE 염색 및 면역조직화학 결과 병리학적 테스트 결과를 따르며, 이는 구성된 오가노이드 및 종양 표본이 병리학적 안정성을 더 잘 유지할 수 있음을 나타냅니다.

3.10.2 오가노이드 WES 또는 RNA-Seq 분석 구성된 오가노이드 및 종양 표본은 유전적 안정성을 더 잘 유지할 수 있습니다. 3.10.3 약물 감수성 시험 결과 평가 기준 약물 감수성 시험 결과의 평가 기준은 IC50,IR을 주요 지표로 하고, IC50과 혈중 약물 농도의 편차 정도, AUC 결과를 보조 판단으로 하며, IC50, IR 민감성 지수를 보조 판단으로 한다. 동시에 충족되면 민감한 것으로 간주됩니다. IC50, IR 지수를 동시에 충족할 수 없는 경우 IC50과 IC50을 결합하고 감도 결과에 더 작은 정도의 차이 비율을 집중시켜야 합니다.

3.10.3.1 IC50 평가 기준. IC50>20× 민감하지 않음

1×<IC50≤20× 낮은 감도 0.5×<IC50≤1× 보통 감도 IC50≤0.5× 매우 민감함 민감 그룹에는 매우 민감함과 중간 민감도가 포함되고, 둔감 그룹에는 약 민감함과 저항력이 있음이 포함됩니다.

3.10.3.2 IR 종양 억제율의 평가 기준. IR <30%는 둔감하며 음성으로 분류됩니다. IR≥30%는 민감도이며 양성으로 분류되며, 30%≤IR<50%는 낮은 민감도, 50%<IR<70%는 중간 민감도, IR≥70%는 높은 민감도입니다.

민감도 비율 = IR ≥ 30%인 사례 수 / 그룹 내 총 사례 수.

3.10.3.3 혈중농도 대비 IC50의 편차 정도 계산 : 혈중농도 편차 정도는 약물감수성시험에서 얻은 IC50값과 혈중농도와의 차이 정도를 말하며 IC50/혈중농도로 계산한다.

비율이 작을수록 약물의 효과가 더 좋습니다. 3.10.3.4 AUC(약물-시간 곡선 아래 면적) 결과 평가 기준: AUC의 구체적인 계산에는 일반적으로 농도-시간 곡선의 통합이 포함됩니다.

AUC는 용량-반응 관계와 밀접한 관련이 있습니다. 약물 효능의 용량-반응 곡선에서 AUC는 용량과 반응 사이에서 유기체에 대한 약물의 전반적인 효과를 나타내는 복합 지표입니다. AUC가 클수록 일반적으로 더 나은 치료 효과와 관련이 있습니다.

3.11 오가노이드의 연구 후 처리 본 연구에서 성공적으로 제작된 오가노이드는 생물의학 폐기물 처리 기준에 따라 연구 후 균일하게 파괴 및 폐기됩니다.