Organoiditeknologiaan perustuva tutkimuspöytäkirja virtsarakon syövän hoidossa käytettävien perfuusioiden kemoterapeuttisten aineiden tehokkuuden arvioimiseksi

1. Tausta Virtsarakon syöpä on pahanlaatuinen kasvain, joka on peräisin virtsarakon uroepiteelistä, ja se muodostaa ensimmäisen paikan sukuelinten kasvainten esiintyvyydestä Kiinassa. Niistä yleisin on virtsarakon uroepiteliaalinen syöpä, joka on yli 90 % virtsarakon syövistä. Kasvaimen tunkeutumisen syvyyden ja prognostisten ominaisuuksien mukaan virtsarakon syöpä luokitellaan kliinisesti ei-lihas-invasiiviseen virtsarakon syöpään (NMIBC) ja lihas-invasiiviseen virtsarakon syöpään (MIBC), joista NMIBC on päätyyppi. noin 75 % kaikista virtsarakon syöpäpotilaista.

   NMIBC:tä hoidetaan yleensä virtsarakon kasvaimen transuretraalisella resektiolla (TURBt). Vaikka NMIBC on taudin alkuvaiheessa, sen uusiutumisaste on korkea, ja tutkimukset raportoivat, että uusiutumisaste on noin 70 % viiden vuoden aikana. Siksi leikkauksen jälkeisestä virtsarakon perfuusiokemoterapiasta on tullut keskeinen terapeuttinen toimenpide virtsarakon syövän uusiutumisen estämisessä.Yli 60 vuoden ajan ihmiset ovat etsineet tehokkaampia virtsarakon perfuusiolääkkeitä ja -menetelmiä. Vuonna 1961 tiotepaa käytettiin virtsarakon perfuusiohoidossa, ja se saavutti tietyn asteisen tehon estämään virtsarakon pinnallisten kasvainten uusiutumista. Vuonna 1976 Morales uskoi, että virtsarakon syöpä liittyy immuunipuutteisiin, ja siksi BCG-virtsarakon perfuusiohoito on ollut erittäin onnistunut, ja se on luonut uuden tavan virtsarakon kasvainten immuunihoitoon , jota on arvostettu laajalti ja jota pidetään edelleen tehokkaimpana virtsarakon perfuusiolääkkeenä. BCG:n tiputtaminen voi kuitenkin aiheuttaa vakavia sivuvaikutuksia, kuten virtsaputken ja eturauhasen granuloomia, virtsarakon ärsytystä, kuumetta, hematuriaa ja muita paikallisia oireita ja systeemisiä influenssan kaltaisia ​​oireita, mikä johtaa joidenkin potilaiden intoleranssiin ja hoidon keskeytymiseen, mikä on rajoittanut laajaa kliinistä tutkimusta. BCG:n soveltaminen. Tutkimukset ovat osoittaneet, että kemoterapeuttisten aineiden rakonsisäinen tiputtaminen rakkoon voi vähentää pinnallisen virtsarakon syövän lyhyen aikavälin uusiutumisastetta noin 15–20 % ja pitkäaikaista uusiutumisastetta noin 6 %. Tällä hetkellä virtsarakon instillaatiossa on monia kemoterapeuttisten aineiden valintoja, mukaan lukien (1) pirentsolubisiini; (2) gemsitabiini; (3) mitomysiini; (4) epirubisiini; (5) doksorubisiini; (6) vuorotteleva virtsarakon infuusiokemoterapia gemsitabiinin ja pirentsolubisiinin kanssa; ja (7) muut yhdistelmä-infuusiokemoterapiat. Kemoterapeuttisten lääkkeiden laajasta kirjosta johtuen lääkkeiden valinta perustuu kuitenkin enimmäkseen kliiniseen kokemukseen tai tiettyihin tutkimustuloksiin, yhtenäistä standardia ei ole ja se on sokea, empiirinen ja satunnaistettu. Kiinan urologisten sairauksien diagnoosi- ja hoito-ohjeet eivät myöskään tarjonneet perfuusiolääkkeiden valintaa, ja yksittäiset potilaat osoittavat luonnollista vastustuskykyä joillekin kemoterapeuttisille lääkkeille, kun klinikalla todetaan, että potilas ei ole herkkä lääkkeen käytölle, lääke on tuottanut vakavaa myrkyllisiä sivuvaikutuksia, ja jopa johtaa monilääkeresistenssin (multi-drugresistenssin, MDR) ilmiöön, jolloin kliininen uusiutumisaste on edelleen jopa 36–44 %, ja samaan aikaan Tämän potilasryhmän kasvain etenee nopeasti menettäen mahdollisuuden valita uudelleen hoitomenetelmä. Siksi siitä, kuinka välttää ensisijaisten lääkeresistenttien lääkkeiden valinta ja valita suoraan erittäin herkkiä lääkkeitä yksilöllisen kemoterapian saavuttamiseksi, on tullut kuuma piste virtsarakon perfuusiokemoterapian tutkimuksessa.

   Tarkkuuskasvainhoidon toteutuminen riippuu suuresti lääkeherkkyyden havaitsemisesta. Tarkkojen yksilöllisten kemoterapeuttisten lääkkeiden seulontakokeiden avulla kullekin potilaalle voidaan arvioida tehokkain ja vähiten myrkyllinen hoito-ohjelma ennen hoidon aloittamista, joten kemoterapeuttisen hoito-ohjelman ehdottaminen yhdelle potilaalle on uusi tutkimussuunta täsmällisen hoidon toteuttamiseksi. virtsarakon syövän hoitoon ja virtsarakon syövän kemoterapian tehokkuuden parantamiseen. Aiemmin yleisemmin käytetyt prekliiniset mallit olivat perinteiset kasvainsolulinjat ja ihmisperäiset kasvainkudosksenograftit (PDX). Kasvainsolulinjaviljelymenetelmä on yksinkertainen, mutta riittämätön simuloimaan potilaiden kasvainsolujen kasvutilaa, ja sen lääkeseulontajärjestelmällä seulotuilla lääkkeillä on alhainen arvo kliiniseen käyttöön.PDX, vaikka se voi simuloida kasvaimen ominaisuuksia in vivo ja säilyttää kasvaimen mikroympäristössä, sillä on ilmeisiä rajoituksia, kuten alhainen stabiili tuumorigeenisyys, pitkä mallinnus- ja arviointijakso (puolesta vuodesta yhteen vuoteen), aikaa vievä ja työläs, ja sitä on vaikea tuottaa ja käyttää korkean suorituskyvyn lääkeseulonnassa. Siksi sellaisten lääkeherkkyysmääritysmallien kehittäminen, jotka voivat jäljitellä virtsarakon syövän heterogeenisyyttä ja monimutkaisuutta, on tullut tarpeelliseksi kehittää yksilöllisempiä terapeuttisia ja ennaltaehkäiseviä strategioita riskin minimoimiseksi ja lääketieteellisten toimenpiteiden tehokkuuden optimoimiseksi kohdistamalla ainutlaatuinen geneettinen, ympäristöllinen ja yksilöiden elämäntapojen ominaisuudet.

   Potilasperäiset organoidit (PDO) ovat 3D-organoidirakenteita, jotka muodostuvat itse koottuista kantasoluista in vitro ja jotka voidaan erottaa useiksi elinspesifisiksi solutyypeiksi ja jotka voivat osoittaa solujen ja solujen välistä matriisivuorovaikutusta ja spatiaalisia sijaintimalleja, jotka luovat uudelleen. in vitro joitakin todellisten elinten avaintoimintoja ja rakenteita, ja niillä on vakaa fenotyyppi. rakenteet, joilla on vakaat fenotyyppiset ja geneettiset ominaisuudet. Kaksiulotteisiin kasvainsolulinjoihin ja PDX:ään verrattuna kasvainorganoideja voidaan viljellä suoraan käyttämällä potilaan omia kudoksia, ja samalla nämä organoidit voivat hyvin replikoida joitain primaaristen kasvainten keskeisiä ominaisuuksia, säilyttää patomorfologian ja biologiset mekanismit. potilaan kudoksissa ja säilyttää kasvainkudosten heterogeenisyyden ja realistisemman kasvaimen mikroympäristön sekä lyhyen kasvusyklin. Siitä on hyötyä kliinisillä syöpäpotilailla sädehoitolääkkeiden, molekyylikohdennettujen lääkkeiden, kasvainten vastaisten vasta-aineiden ja muiden lääkkeiden lääkeherkkyystestauksessa, jotta voidaan ennustaa potilaan herkkyys lääkkeille, mikä voi auttaa kliinisten hoitopäätösten tekemisessä.

   Science raportoi vuonna 2018 tutkimuksesta metastaattisten maha-suolikanavan kasvainten kaltaisten elinten käytöstä lääkeherkkyystestauksessa, jossa analysoitiin vertailevasti eroja herkkyydessä 21 kliinisen potilaan ja heidän vastaavien suojattujen alkuperänimitysten välillä kohdennetuille ja kemoterapeuttisille lääkkeille, ja tulokset osoittivat vahva johdonmukaisuus näiden kahden välillä. Verrattuna todellisiin potilaiden tuloksiin SAN:t olivat hyvin ennustettuja (herkkyys 100 %, spesifisyys 93 %, positiivinen ennustearvo 88 % ja negatiivinen ennustearvo 100 %).20 Vuonna 2020 Yao Y ym. rakensivat 96 peräsuolen syövän organoidia käyttämällä biopsiaa 112 paikallisesti edenneen peräsuolen syövän tapauksesta ja valitsivat niistä 80 testatakseen vastetta sädehoitoon. Tulokset osoittivat, että peräsuolen syövän organoidit olivat herkkiä sädehoidolle ja potilaan syöpään. kliininen vaste. Tulokset osoittivat, että peräsuolen syövän organoidien herkkyys sädehoidolle oli erittäin yhdenmukainen potilaiden kliinisen vasteen kanssa (herkkyys 78 %, spesifisyys 92 %, tarkkuus 84 %). Myöhemmin myös kasvaimissa, kuten mahasyövän ja rintasyövän osalta, havaittiin myös SAN:n ja kasvainpotilaiden lääkevasteen välinen vastaavuus. Yan HHN et al rakensivat mahasyövän organoidikirjaston käyttämällä kasvainkudoksia, syövän kudoksia ja imusolmukkeiden etäpesäkkeitä 34 mahasyöpäpotilaalta. Kahdelle heistä kehittyi kasvaimen etäpesäkkeitä ja heille tehtiin sisplatiinin ja 5-FU:n yhdistelmä leikkauksen jälkeen, jotka molemmat reagoivat hyvin. Toinen tapaus sai kemoterapiaa ennen leikkausta, eikä se vastannut kapesitabiiniin leikkauksen jälkeen. Vastaavien SAN-yhdisteiden herkkyyden tutkiminen näissä kolmessa tapauksessa osoitti, että SAN:n lääkeherkkyys oli täydellisessä sopusoinnussa kunkin potilaan kliinisen vasteen kanssa. Guillen KP ym. rakensivat PDX:n ja PDO:n käyttämällä kasvainnäytteitä endokriinisille terapiaresistenteistä, uusiutuneita ja metastasoituneita rintasyöpäpotilaita, ja nämä näytteet tutkittiin histomorfologisesti, genomillisesti ja lääkeherkkyyden suhteen. Tulokset osoittivat, että sekä rintasyövän PDX että PDO vähensivät voimakkaasti lähdekasvaimiensa histobiologisia ja genomisia ominaisuuksia, ja molemmat reagoivat johdonmukaisesti kasvainlääkkeisiin. Potilaalle, jolla oli kolminkertaisesti negatiivinen rintasyöpä vaiheessa IIA tässä tutkimuksessa, kehittyi maksametastaasseja noin vuoden kuluttua leikkausta edeltävän kemoterapian ja kirurgisen hoidon jälkeen. Tutkijat alistivat konstrukteille PDO ja PDX ex vivo lääkeherkkyystestauksen ja havaitsivat, että mikrotubulusinhibiittorilla eribuliinilla oli paras terapeuttinen vaikutus. Tämän tuloksen perusteella potilaita kehotettiin käymään eribuliinihoitoa, joka johti maksametastaasien täydelliseen remissioon lähes 5 kuukauden ajan annostelun jälkeen. Nämä tutkimukset vahvistavat jossain määrin PDO:n mahdollisuuden ohjata kliinisiä kasvaimia sairastavien potilaiden lääkitystä. On myös osoitettu, että vertaamalla eroja lääkkeisiin kohdistuvissa vasteissa normaalien kaltaisten elinten ja PDO:n välillä, on havaittu, että korkean selektiivisyyden omaavat lääkkeet auttavat vähentämään toksisia sivuvaikutuksia kliinisillä potilailla. Näin ollen on selvää, että PDO:n lääkeherkkyystestaus sopivimman lääkehoidon löytämiseksi auttaa parantamaan kasvainpotilaiden kliinistä tehoa, vähentämään toksisia sivuvaikutuksia, lääkeresistenssin riskiä ja kasvaimen uusiutumisen mahdollisuuksia sekä maksimoimaan potilaita.

   Sen vuoksi potilasperäisiin virtsarakon syövän organoidimalleihin luotaen teemme ei-lihakseen invasiivisen virtsarakon syövän perfuusiokemoterapian lääkeherkkyystestauskokeita, perustamme standardoidun lääkeherkkyystestausjärjestelmän virtsarakon syövän organoideille ja laadimme seulontastandardit virtsarakon syövän organoidit, jotta voidaan seuloa optimaalinen lääkeyhdistelmähoito, auttaa uusien yksilöllisten hoitomenetelmien kliinisessä kehittämisessä ja suorittaa monikeskuskliinisen validoinnin todellisen "korvauslääketestauksen" saavuttamiseksi.

2. Tutkimuskysymykset ja tavoitteet Tutkimuskysymykset: Tässä tutkimuksessa verrataan organoidiherkän lääkeinfuusioryhmän eli organoidiherkän lääkeinfuusioryhmän potilaiden yhden vuoden eloonjäämisprosenttia uusiutumisesta ja kolmen vuoden kasvaimettomasta uusiutumisesta. ja BCG-infuusioryhmä kohorttitutkimuksen avulla, ja eroa uusiutumistiheydessä kolmen ryhmän välillä verrataan yksisuuntaisella K-M-eloonjäämisanalyysillä. Arviointi kasvaimen kaltaisten elinten lääkeherkkyysmääritysten arvon arvioimiseksi yksilöllisen perfuusiokemoterapian ohjauksessa virtsarakon syövän hoidossa.

   Tutkimuksen tavoite: arvioida kasvaintyyppisten elinten lääkeherkkyyskokeiden sovellusarvoa virtsarakon syövän yksilöllisen perfuusiokemoterapian ohjauksessa tarkkailemalla kasvainmaisen elimen lääkeherkkyysmenetelmän kliinistä tehoa ohjattaessa leikkauksen jälkeistä perfuusiokemoterapiaa virtsarakon syöpäpotilaille.

   Katso lisätietoja kohdasta Tulostoimenpiteet

3. Tutkimusmetodologia 3.1 Tutkimuksen suunnittelu Tämä protokolla perustuu antineoplastisten lääkkeiden kliinisten tutkimusten teknisiin ohjeisiin ja hyväksyy monikeskustutkimuksen, kohorttitutkimuksen.

3.1.1 Ryhmittely Katso lisätietoja kohdasta Ryhmät ja toimenpiteet 3.1.2 Virtsarakon syövän organoidivalmiste

1. Virtsarakon syövän näytteenotto Näytteenottoprosessi on sairaalan etiikan ja allekirjoitetun tietoisen suostumuksen mukainen. Kokeeseen otetuilla potilailla tulee olla patologisesti diagnosoitu virtsarakon syöpä, ja kirurgisesti otettavien kasvainnäytteiden koon tulee olla mahdollisuuksien mukaan suurempi kuin 0,8 cm*3 patologista varmentamista, organoidiviljelyä, lääkeherkkyystestiä ja niin edelleen varten. Kasvainkudokset tulee kerätä huomioimalla kudoksen iskemia-aika ja kylmäsäilytys, ja keräysajan tulee olla 5 minuutin sisällä, kun kudokset poistetaan ihmisen verenkierrosta, jotta vältytään varhaisen hypoksian aiheuttamalta kasvainkudosten stressinekroosilta.
2. Virtsarakon syövän elinten valmistelu Kudoskäsittelyssä kudosnäytteiden käsittelyyn käytettiin fysikaalista murskausta ja kollagenaasidigestiota, ja käsitellyt ja pilkotut organoidit piti suodattaa halkaisijaltaan erilaisten soluseulojen läpi ennen viljelyä saatujen organoidien valmistamiseksi. yhtenäisen kokoisia ja helpottavat standardien yhtenäistämistä. Sitten ne istutettiin kolmiulotteiseen matriisigeeliin ja viljeltiin erityisessä alustassa.
3. Virtsarakon syövän organoidien ekspansio ja viljely Organoidien kasvutilaa tarkkailtiin mikroskooppisesti ja organoidien karakterisoimiseen, kasvainsolujen esiintymisen vahvistamiseen ja niiden morfologian arvioimiseen käytettiin immunohistokemiaa ja immunofluoresenssia. Virtsarakon syövän karsinoidiset elimet siirrettiin ja jäädytettiin.

3.1.3 Virtsarakon syöpäkasvain organoidilääkkeen herkkyystestaus Kun organoidien lukumäärää oli tarkkailtu mikroskoopilla, jotta saavutettiin määrä, jolle lääkeherkkyystestaus voidaan tehdä, organoidiväliaine imettiin ja heitettiin pois. Lisää 3 ml ruoansulatusliuosta petrimaljaan, puhalla pisarat erilleen, sulata 37 ℃:ssa, puhalla organoidit ja tarkkaile mikroskoopilla, kun organoidit hajoavat homogeeniseksi solumassaksi, joka sisältää 2-3 solua, lisää 2 kertaa ruoansulatusliuoksen tilavuus ruoansulatuksen lopettamiseksi. 1500 rpm, sentrifugoi soluja 3 minuuttia ja ime sitten supernatantti ja heitä se pois.

Suspendoi solut uudelleen elatusaineeseen, yritä olla muodostamatta ilmakuplia ja laimenna väliaine geeliksi suhteessa 1:1,5 ja inokuloi sitten sekoitettu geeli 10 ul/kuoppa yksikanavaisella pipetillä esijäähdytetyille 384-kuoppaisille levyille, joissa on 3 000 organoidia. kuoppaa kohti (tämä toimenpide suoritettiin jäillä). Sen jälkeen kun elatusaine oli sekoitettu kumin kanssa suhteessa 1:1 (40 ui:40 ul), väliaine annosteltiin 384-kuoppaiselle levylle 10 ul/kuoppa nollaryhmänä. Kun 384-kuoppaista levyä oli koputettu varovasti niin, että geelipisarat asettuivat tasaisesti kuoppien pohjalle, levy asetettiin inkubaattoriin 30 minuutiksi, jotta geelipisarat kiinteytyivät, ja esilämmitettyä BCOs-elatusainetta lisättiin 40 ul:na. /hyvin. Lääketestikuoppiin sekä kontrollikuoppien ympärillä oleviin tyhjiin kuoppiin lisättiin 40 ui PBS-liuosta ja asetettiin hiilidioksidiinkubaattoriin nesteen haihtumisen ja geelipisaroiden kuivumisen estämiseksi.

Kolmen päivän inkubaation ja havainnoinnin jälkeen suoritettiin mikroskooppinen näytteen tilan tarkkailu kussakin kuopassa puolen tilavuuden nesteen vaihtoa varten.

Suunnittele lääkeherkkyystestiprotokolla seuraavan taulukon vaatimusten mukaisesti, aseta kontrolliryhmä, nollaryhmä ja lääketestiryhmä, lääke liuotettiin ohjeiden mukaisesti ja laimennettiin 4-kertaisesti 6 pitoisuuteen organoidisella väliaineella, vastaavasti; Luminesoivien solujen elinkelpoisuusmääritystä käyttäen lääkettä testattiin eri pitoisuuksilla puoliinhiboivassa pitoisuudessa (IC50), kasvainsolujen estossa (IR), IC50:n poikkeaman asteessa veren lääkeainepitoisuudesta, AUC (annoksen alla oleva pinta-ala) -vastekäyrä), lääkeherkkyysmäärityksen tulosten arviointikriteerit käyttävät IC50:tä ja IR:tä pääindekseinä sekä IC50:n poikkeamaa veren lääkepitoisuudesta ja AUC-tuloksia apuarviona (lisätietoja, katso kohta 3.10.3), arvioida vaikutuksia organismien eloonjäämiseen ja lisääntymiseen sekä antaa kliinisiä ohjeita lääkkeen käytöstä.

Taulukko 1 Lääkeherkkyystestien ryhmittelymenetelmät Lääkeherkkyystestin ryhmittelymenetelmä Tyhjä ryhmä: Ei organoidia, ei lisätty lääkettä, 6 rinnakkaista kuoppaa levyä kohden. Kontrolliryhmä: Rokotettu organoideilla, ei lisättyä lääkealtistusta. Lääketestiryhmä: Rokotettu organoidilla, lisää lääkealtistus. 3.1.4 Kemoterapialääkkeiden yhdistelmähoito-ohjelmat Taulukko 2 Perfuusiokemoterapialääkkeet Gemsitabiini □ Pirorubisiini □ Epirubisiini □ Silvestrol □ Adriamysiini (doksorubisiini) □ 3.2 Tutkimuspaikka ja tutkimuspopulaatio (lähde- ja poissulkemiskriteerit) Katso positiivinen tutkimussuunnitelma (Measureaments3)3. kontrolliryhmälle ei suoritettu organoidiviljelmää eikä organoidilääkkeen herkkyystestiä.

Jäljelle jääville potilaille tehtiin organoidilääkkeen herkkyystesti lääkeherkkyystestausprotokollan mukaisesti käyttämällä luminoivien solujen elinkelpoisuusmääritystä lääkkeen puoliinhiboivan pitoisuuden (IC50), kasvainsolujen estonopeuden (IR) ja asteen testaamiseen. IC50:n poikkeama veren lääkepitoisuudesta ja AUC (annos-vastekäyrän alla oleva pinta-ala) eri pitoisuuksilla, ja lääkeherkkyystestien tulosten arviointikriteerit perustuivat pääindekseinä IC50,IR:ään. kun IC50 poikkeaa veren lääkepitoisuudesta, AUC on apuarvio (katso 3.10.3 lisätietoja), arvioida sen vaikutusta luokan elinten eloonjäämiseen ja lisääntymiseen.

Potilaille, joille tehtiin organoidiviljelmä ja lääkeherkkyystesti, annettiin virtsarakon kemoterapeuttisia aineita kliinikkojen kokemuksen mukaan. Viisi perfusoitua lääkettä olivat gemsitabiini, piroksikaami, epirubisiini, mitomysiini ja adriamysiini (doksorubisiini). Perfuusiolääkkeiden herkkyyden mukaan organoidilääkkeiden herkkyystestissä ne jaettiin organoidiherkkiin lääkeperfuusioryhmään ja organoidiherkkiin lääkeperfuusioryhmään. Perfuusio-ohjelma: mukaan lukien induktioperfuusiokemoterapia (4-8 viikkoa leikkauksen jälkeen, 1 kerta viikossa, yhteensä 4 kertaa) ja ylläpitoperfuusiokemoterapia (1 kerta kuukaudessa, yhteensä 11 kertaa).

BCG-infuusioohjelma: 6 induktioinfuusiota ja sen jälkeen 3 tehosteinfuusiota kerran kahdessa viikossa hyvän immuunivasteen ylläpitämiseksi, minkä jälkeen 10 ylläpitoinfuusiota kerran kuukaudessa yhteensä 19 infuusiota vuoden aikana.

Kliiniset mittaukset: kahta potilasryhmää organoidiherkkää lääkeperfuusioryhmässä ja organoidi-ei-herkkä lääkeperfuusioryhmässä seurattiin ja analysoitiin ensisijaisen ja toissijaisen tutkimuksen päätepisteiden osalta, ja suoritettiin yksisuuntainen Kaplan-Meier eloonjäämisanalyysi vertailla eroja uusiutumistiheyksissä näiden kahden ryhmän välillä. COX-riskisuhdemallia käytettiin analysoimaan potilaiden sukupuolen, iän, kasvainvaiheen ja asteen uusiutumisriskisuhdetta kahden ryhmän välillä.

3.4 Tutkimustulokset Tehon arvioinnissa käytettiin RECIST1.1-kriteerejä ja aputehokkuuden arviointikriteereinä Choi- ja mRECIST-kriteereitä.

Tutkimuksen ensisijaiset päätetapahtumat: yhden vuoden eloonjäämisaste ilman tuumorin uusiutumista, kolmen vuoden eloonjäämisaste ilman tuumorin uusiutumista.

Toissijaiset päätetapahtumat: yhden vuoden eloonjäämisaste ilman kasvaimen etenemistä, kolmen vuoden eloonjäämisaste ilman kasvaimen etenemistä.

3.5 Seuranta Kahta potilasryhmää, jotka kuuluivat elinten kaltaisen herkän lääkeperfuusioryhmän ja elimen kaltaisen ei-herkän lääkeperfuusioryhmän ryhmään, seurattiin ja analysoitiin ensisijaisen ja toissijaisen tutkimuksen päätepisteiden osalta.

Kystoskopia on valintamenetelmä arvioitaessa potilaita, joilla on NMIBC, eikä kystoskopialle ole ei-invasiivista vaihtoehtoa. Siksi NMIBC-seurannan tulee perustua säännölliseen kystoskopiaan. Jos tutkimuksessa havaitaan virtsarakon limakalvon epäilyttäviä vaurioita, tulee tehdä biopsia patologisten löydösten selvittämiseksi. Virtsan eksfoliatiivinen sytologia, CT/CTU tai MRI/MRU suoritetaan tarvittaessa, mutta mikään niistä ei voi täysin korvata kystoskopiaa.

Kystoskopian tarkistussuunnitelma: matalariskinen NMIBC tehdään kerran 3 kuukauden ja 12 kuukauden kuluttua leikkauksesta ensimmäisenä vuonna ja kerran vuodessa sen jälkeen 3. vuoteen asti; keskitason riskin NMIBC tehdään kerran 3 kuukauden, 6 kuukauden ja 12 kuukauden kuluttua leikkauksesta, 6 kuukauden välein toisena vuonna ja joka vuosi sen jälkeen 3. vuoteen asti; korkean riskin NMIBC tehdään 3 kuukauden välein kahden ensimmäisen vuoden aikana ja sen jälkeen 6 kuukauden välein kolmanteen vuoteen asti.

3.6 Otoskoko 293 tapauksen otoskoko riitti täyttämään tutkimuksen päätepisteiden vaatimukset.

Organoidiherkkä lääkeperfuusioryhmässä oli 73 tapausta ja 110 tapausta kussakin organoidiherkässä lääkeperfuusioryhmässä ja positiivisessa kontrolliryhmässä.

Laskuperuste:

1. Otoskoon laskeminen yhden vuoden tuumorittoman eloonjäämisprosenttitutkimuksen päätepisteen osalta: yhden vuoden kasvaimettoman eloonjäämisasteen odotetaan olevan 73 % organoidiherkän lääkeinfuusioryhmän ryhmässä ja 50 % organoidittoman eloonjäämisasteen ryhmässä. lääkeinfuusioryhmä, yksipuolinen α=0,05, β=0,2 ja kahden ryhmän otoskokojen suhde on 1 (koeryhmä: kontrolliryhmä), kahden ryhmän näytekoot ovat 55 tapausta koeryhmässä, 55 tapausta kontrolliryhmässä ja 110 tapausta positiivisessa kontrolliryhmässä. Kontrolliryhmässä 55 tapausta, yhteensä 110 tapausta, ja kun otetaan huomioon 20 % irtoaminen, vaaditaan 138 tapauksen kokonaisotos.
2. Laske otoskoko kolmen vuoden kasvaimeton eloonjäämisprosenttitutkimuksen päätepisteen mukaan: kolmen vuoden kasvaimeton eloonjäämisaste organoidiherkän lääkeinfuusioryhmän odotetaan olevan 63 % ja kolmen vuoden kasvaimeton eloonjäämisaste. Organoideille epäherkän lääkeinfuusioryhmän vuoden kasvaimeton eloonjäämisaste on 40 % ja yksipuolinen α=0,05, β=0,2 ja näiden kahden ryhmän otoskokojen suhde on 1 (koeryhmä: kontrolliryhmä ), jolloin näiden kahden ryhmän otoskoot lasketaan siten, että koeryhmässä on 58 tapausta, kontrolliryhmässä 58 tapausta ja kontrolliryhmässä 11 tapausta, kun otetaan huomioon 20 %:n irtoaminen ja kokonaisotoskoko Tarvitaan 138 tapausta. Kontrolliryhmässä 58 tapausta, yhteensä 116 tapausta, ja ottaen huomioon 20 % irtoamisen, vaadittiin 146 tapauksen kokonaisotos.
3. Kirjallisuuden tulosten mukaan positiivisen kontrolliryhmän yhden vuoden kasvaimeton eloonjäämisprosentti on 75 % ja esitestin mukaan organoidiherkän lääkeinfuusion yhden vuoden kasvaimeton eloonjäämisaste. ryhmän odotetaan olevan 73 % ja non-inferiority-raja-arvo on 0,2 (kontrolliryhmä-kokeellinen ryhmä), ja näiden kahden ryhmän otoskokojen suhde on yksi, jolloin yksipuolinen alfa on 0,05 ja beeta 0,2 , näiden kahden ryhmän otoskoko on laskettu 74 tapaukseksi organoidiherkkää lääkeinfuusioryhmää, 74 tapausta positiivista kontrolliryhmää ja yhteensä 116 tapausta koeryhmästä. 74 tapausta ja 74 tapausta positiivisessa kontrolliryhmässä, yhteensä 148 tapausta. Kun otetaan huomioon 20 % irtoaminen, vaadittu otoskoko on yhteensä 186 tapausta.
4. Kirjallisuuden tulosten mukaan positiivisen kontrolliryhmän kolmen vuoden kasvaimeton eloonjäämisaste on 65 % ja esitestin mukaan organoidiherkän lääkeinfuusion kolmen vuoden kasvaimeton eloonjäämisaste. ryhmän odotetaan olevan 63 % ja non-inferiority-raja-arvo on 0,2 (kontrolliryhmä-testiryhmä), ja näiden kahden ryhmän otoskokojen suhde on 1, jos yksipuolinen alfa on 0,05 ja beeta on 0,2, näiden kahden ryhmän näytekoko on laskettu 88 tapaukseksi organoidiherkästä lääkeinfuusioryhmästä ja 88 tapauksesta positiivisesta kontrolliryhmästä. 88 tapausta ja 88 tapausta positiivisessa kontrolliryhmässä, yhteensä 176 tapausta, ja ottaen huomioon 20 % irtoaminen, vaadittiin 220 tapauksen kokonaisotos.

3.7 Tutkimustekniikoiden vuokaavio Tässä osiossa (kuvat) kuvataan projektin teknistä reittiä. 3.8 Tiedonkeruu ja hallinta Tiedot kerättiin havainnoimalla ja kirjaamalla, ja alkuperäiset tiedot tarkastettiin kohteelta sen varmistamiseksi, että tiedot ovat yhdenmukaisia ​​alkuperäisten tietueiden kanssa. Kokeen päätyttyä se luovutettiin tilastotieteilijälle tilastollista analyysiä varten.

3.9 Tilastolliset analyysimenetelmät Mitatut tiedot ovat yleensä kuvaavia tilastoja, joissa on keskiarvo, keskihajonta, mediaani, minimi- ja maksimiarvot. Kategorisille muuttujille tehdään kuvaavat tilastot frekvenssin ja prosenttiosuuksien mukaan.

Tilastolliseen analyysiin sovellettiin tilastoohjelmistoa SPSS. Mittaustiedot ilmaistiin keskiarvona ± standardipoikkeama (x ± s), t-testi, yksisuuntainen ANOVA (post hoc -testi kaksi kertaa kaksi vertailua käyttäen LSD-menetelmää), nopeuksien vertailuun käytettiin chi-neliötestiä, ja Spearmanin menetelmää käytettiin korrelaatioanalyyseihin. p < 0,05 eron katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä.

3.10 Laadunvalvonta 3.10.1 Luokka-elimen HE-värjäys- ja immunohistokemian tulokset Vastaavat patologisen testituloksia, jotka osoittavat, että rakennetut organoidi- ja kasvainnäytteet voivat säilyttää patologisen stabiiliuden paremmin.

3.10.2 Organoidi-WES- tai RNA-Seq-analyysi Rakennetut organoidi- ja kasvainnäytteet voivat säilyttää geneettisen vakauden paremmin. 3.10.3 Lääkeherkkyystestin tulosten arviointikriteerit Lääkeherkkyystestin tulosten arviointistandardin pääindeksinä on IC50,IR, jossa poikkeama IC50:n ja veren lääkeainepitoisuuden välillä, AUC-tulokset apuarviona, kun IC50, IR-herkkä indeksit ovat täyttyvät samanaikaisesti, sitä pidetään arkaluonteisena; kun ei ole mahdollista saavuttaa IC50, IR-indeksejä samanaikaisesti, IC50 yhdistettynä IC50:een ja herkkyyden tulosten pienemmän eron asteen suhteen pitoisuuden tarve.

3.10.3.1 IC50-arviointikriteerit. IC50>20× Ei herkkä

1×<IC50≤20× Matala herkkyys 0,5×<IC50≤1× Kohtalaisen herkkä IC50≤0,5× erittäin herkkä Herkkä ryhmään kuuluvat vahvasti herkät ja kohtalaisen herkät ja epäherkät heikosti herkät ja vastustuskykyiset.

3.10.3.2 Arviointikriteerit IR-kasvaimen estonopeudelle. IR < 30 % on epäherkkä ja luokiteltu negatiiviseksi; IR≥30 % on herkkä ja luokiteltu positiiviseksi, jossa 30 %≤IR<50 % on alhainen herkkyys, 50 %≤IR<70 % on kohtalainen herkkyys ja IR≥70 % on korkea herkkyys.

Herkkyysaste = tapausten lukumäärä, joissa IR ≥ 30 % / tapausten kokonaismäärä ryhmässä.

3.10.3.3 IC50:n poikkeama-asteen laskeminen veren pitoisuudesta: poikkeama veripitoisuudesta viittaa lääkeherkkyystestistä saadun IC50-arvon ja veren pitoisuuden eron asteeseen, ja se lasketaan IC50/veripitoisuus.

Mitä pienempi suhde, sitä tehokkaampi lääke. 3.10.3.4 Kriteerit AUC-tulosten (alue lääke-aikakäyrän alla) arviointiin: AUC:n spesifiseen laskemiseen sisältyy yleensä pitoisuus-aika-käyrän integrointi.

AUC liittyy läheisesti annos-vaste-suhteeseen. Lääkkeen tehokkuuden annos-vastekäyrässä AUC on yhdistelmäindikaattori lääkkeen kokonaisvaikutuksesta organismiin annoksen ja vasteen välillä. Suurempi AUC liittyy yleensä parempaan terapeuttiseen vaikutukseen.

3.11 Organoidin tutkimuksen jälkeinen käsittely Tässä tutkimuksessa onnistuneesti konstruoidut organoidit tuhotaan ja hävitetään tasaisesti tutkimuksen jälkeen biolääketieteellisen jätteen hävitysnormien mukaisesti.