En forskningsprotokoll for evaluering av effektiviteten av perfuserte kjemoterapeutiske midler for blærekreft basert på organoidteknologi

1. Bakgrunn Blærekreft er en ondartet svulst som stammer fra urinblærens uroepithel, og står for den første plassen i forekomsten av genitourinære svulster i Kina. Blant dem er blære-uroepitelkreft den vanligste, og står for mer enn 90 % av blærekreft. I henhold til dybden av tumorinvasjonen i blæren og de prognostiske egenskapene, er blærekreft klinisk klassifisert i ikke-muskelinvasiv blærekreft (NMIBC) og muskelinvasiv blærekreft (MIBC), med NMIBC som hovedtype, som står for ca. 75 % av alle blærekreftpasienter.

   NMIBC behandles vanligvis med Transurethral Resection of Bladder Tumor (TURBt). Til tross for å være i de tidlige stadiene av sykdommen, har NMIBC en høy residivrate, med studier som rapporterer en 5-års residivrate på omtrent 70 %. Derfor har postoperativ blæreperfusjonskjemoterapi blitt et viktig terapeutisk tiltak for å forhindre tilbakefall av blærekreft. I mer enn 60 år har folk utforsket mer effektive blæreperfusjonsmedisiner og metoder. I 1961 ble Thiotepa brukt til blæreperfusjonsterapi, og fikk en viss grad av effektivitet for å forhindre gjentakelse av overfladiske svulster i blæren. I 1976 mente Morales at blærekreft var relatert til immundefekter, og følgelig har BCG blæreperfusjonsterapi vært ekstremt vellykket, og skapt en ny måte for immunterapi for blæresvulster , som har blitt mye verdsatt og fortsatt regnes som det mest effektive blæreperfusjonsmiddelet. BCG-instillasjon kan imidlertid forårsake alvorlige bivirkninger, inkludert granulomer i urinrør og prostata, blæreirritasjon, feber, hematuri og andre lokale manifestasjoner og systemiske influensalignende symptomer, noe som resulterer i intoleranse og behandlingsavbrudd hos noen pasienter, noe som har begrenset den brede kliniske bruk av BCG. Studier har vist at intravesikal instillasjon av kjemoterapeutiske midler i blæren kan redusere gjentakelsesraten på kort sikt av overfladisk blærekreft med ca. 15 %-20 % og den langsiktige residivfrekvensen med ca. 6 %. For tiden er det mange valg av kjemoterapeutiske midler ved blæreinstillasjon, inkludert (1) pirenzolubicin; (2) gemcitabin; (3) mitomycin; (4) epirubicin; (5) doksorubicin; (6) alternerende blæreinfusjonskjemoterapi med gemcitabin og pirenzolubicin; og (7) andre kombinerte infusjonskjemoterapier. På grunn av det store utvalget av kjemoterapeutiske legemidler, er medikamentvalg for det meste avhengig av klinisk erfaring eller visse forskningsresultater, det er ingen enhetlig standard, og den er blind, empirisk og randomisert. Kinesisk urologisk sykdomsdiagnose og retningslinjer for behandling ga heller ikke utvalget av perfusjonsmedisiner, og individuelle pasienter for noen kjemoterapeutiske legemidler viser naturlig resistens, når klinikken fastslår at pasienten ikke er følsom for bruken av stoffet, har stoffet produsert alvorlig toksiske bivirkninger, og til og med føre til fenomenet multi-medikamentresistens (multi-medikamentresistens, MDR), slik at den kliniske gjentakelsesraten er fortsatt så høy som 36%-44%, og på samme tid, svulsten til denne gruppen pasienter utvikler seg raskt, og mister muligheten til å velge behandlingsmetoden på nytt. Derfor, hvordan å unngå valg av primære medikamentresistente legemidler og direkte velge legemidler med høy følsomhet for å oppnå individualisert kjemoterapi har blitt et hot spot i forskningen på blæreperfusjonskjemoterapi.

   Realiseringen av presisjonssvulstterapi avhenger i stor grad av påvisning av medikamentfølsomhet. Gjennom presise individualiserte kjemoterapeutiske medikamentscreeningseksperimenter, kan det mest effektive og minst toksiske terapeutiske regimet bedømmes for hver pasient før behandlingsstart, slik at å foreslå et kjemoterapeutisk regime for en enkelt pasient er en ny forskningsretning for å realisere presisjonsbehandlingen av blærekreft og for å forbedre effektiviteten av blærekreftkjemoterapi. Tidligere var de mer vanlig brukte prekliniske modellene tradisjonelle tumorcellelinjer og human-derived tumor tissue xenografts (PDX). Tumorcellelinjekulturmetoden er enkel, men utilstrekkelig til å simulere veksttilstanden til tumorceller hos pasienter, og medikamentene som screenes av dets medikamentscreeningssystem har lav verdi for klinisk anvendelse.PDX, selv om den kan simulere in vivo tumorkarakteristikker og bevare svulsten mikromiljø, har åpenbare begrensninger som lav stabil svulstdannelse, lang modellerings- og evalueringsperiode (et halvt år til ett år), tidkrevende og arbeidskrevende, og det er vanskelig å generere og bruke for high-throughput medikamentscreening. Derfor har utviklingen av analysemodeller for medikamentfølsomhet som kan etterligne heterogeniteten og kompleksiteten til blærekreft blitt nødvendig for å utvikle mer personlige terapeutiske og forebyggende strategier for å minimere risiko og optimere effektiviteten av medisinske intervensjoner ved å målrette den unike genetiske, miljømessige og livsstilsegenskapene til individer.

   Pasientavledede organoider (PDO) er 3D-organoide strukturer dannet av stamceller selvmontert in vitro, som kan differensieres til flere organspesifikke celletyper og kan vise celle-celle og celle-omgivende matriseinteraksjoner og romlige lokaliseringsmønstre, som gjenskaper in vitro noen av nøkkelfunksjonene og strukturene til virkelige organer, og har en stabil fenotype. strukturer med stabile fenotypiske og genetiske egenskaper. Sammenlignet med todimensjonale tumorcellelinjer og PDX, kan tumororganoider dyrkes direkte ved bruk av pasientens eget vev, og samtidig kan disse organoidene godt replikere noen av hovedkarakteristikkene til primærsvulstene, beholde patomorfologien og de biologiske mekanismene. av pasientens vev, og bevare heterogeniteten til tumorvevet og et mer realistisk tumormikromiljø, samt ha en kort vekstsyklus. Det er nyttig for bruk i kliniske kreftpasienter for medikamentsensitivitetstesting av strålebehandlingsmedisiner, molekylært målrettede legemidler, anti-tumorantistoffer og andre legemidler, for å forutsi pasientens respons på legemidler, med potensial til å hjelpe til med beslutninger om klinisk behandling.

   I 2018 rapporterte Science en studie om bruk av metastatiske gastrointestinale tumorlignende organer for testing av medikamentfølsomhet, som sammenlignet analyserte forskjellene i følsomhet mellom 21 kliniske pasienter og deres tilsvarende PDO-er for en serie målrettede og kjemoterapeutiske legemidler, og resultatene viste sterk konsistens mellom de to. Sammenlignet med de faktiske pasientutfallene ble PDO-ene godt predikert (sensitivitet 100 %, spesifisitet 93 %, positiv prediktiv verdi 88 % og negativ prediktiv verdi 100 %).20 I 2020 konstruerte Yao Y et al 96 organoider til endetarmskreft ved bruk av biopsier fra 112 tilfeller av lokalt avansert endetarmskreft, og valgte ut 80 av dem for å teste deres respons på strålebehandling, og resultatene viste at organoider av rektalkreft var følsomme for strålebehandling og pasientens klinisk respons. Resultatene viste at sensitiviteten til organoider av rektalkreft for strålebehandling var svært konsistent med den kliniske responsen til pasientene (sensitivitet 78 %, spesifisitet 92 %, nøyaktighet 84 %). Deretter ble det også funnet samsvar mellom PDO og tumorpasienters respons på legemidler ved svulster som magekreft og brystkreft. Yan HHN et al konstruerte et magekreftorganoidbibliotek ved bruk av tumorvev, parakreftvev og lymfeknutemetastaser fra 34 magekreftpasienter. To av dem utviklet tumormetastaser og gjennomgikk en kombinasjon av cisplatin og 5-FU etter operasjonen, som begge responderte godt. Det andre tilfellet fikk kjemoterapi før operasjonen og responderte ikke på capecitabin etter operasjonen. Undersøkelse av sensitiviteten til de tilsvarende forbindelsene av PDO i disse tre tilfellene viste at medikamentsensitiviteten til PDO var i perfekt samsvar med den kliniske responsen til hver pasient. Guillen KP et al konstruerte PDX og PDO ved å bruke tumorprøver fra endokrinterapi-resistente, pasienter med tilbakefall og metastaserende brystkreft, og disse prøvene ble undersøkt histomorfologisk, genomisk og medikamentfølsomhet. Resultatene viste at både brystkreft PDX og PDO var svært reduktive av de histobiologiske og genomiske egenskapene til deres kildesvulster, og begge reagerte konsekvent på antitumormedisiner. En pasient med trippel-negativ brystkreft i stadium IIA i denne studien utviklet levermetastaser ca. 1 år etter gjennomgått preoperativ kjemoterapi og kirurgisk behandling. Etterforskerne utsatte konstruksjonene PDO og PDX for ex vivo medikamentsensitivitetstesting og fant at mikrotubulihemmeren eribulin hadde den beste terapeutiske effekten. Basert på dette resultatet ble pasientene instruert om å gjennomgå behandling med eribulin, noe som resulterte i fullstendig remisjon av levermetastaser i nesten 5 måneder etter dosering. Disse studiene bekrefter til en viss grad muligheten for PDO for å veilede medisinering av pasienter med kliniske svulster. Det er også vist at ved å sammenligne forskjellen i respons på legemidler mellom normallignende organer og PDO, har man funnet at legemidler med høy selektivitet bidrar til å redusere toksiske bivirkninger hos kliniske pasienter. Dermed er det klart at medikamentsensitivitetstesting av PDO for å finne det mest hensiktsmessige legemiddelregimet vil bidra til å forbedre den kliniske effekten til tumorpasienter, redusere toksiske bivirkninger, risiko for legemiddelresistens og sjansene for tilbakefall av tumor, og maksimere fordelene med pasienter.

   Derfor, basert på pasientavledede organoide blærekreftmodeller, vil vi utføre ikke-muskelinvasive blærekreftperfusjonskjemoterapieksperimenter med medisinsensitivitetstesting, etablere et standardisert medikamentsensitivitetstestingssystem for blærekreftorganoider, og formulere screeningstandarder for medikamentsensitivitetstesting av organoider for blærekreft, for å screene det optimale medikamentkombinasjonsregimet, bistå i den kliniske utviklingen av nye individualiserte behandlingsprotokoller, og utføre multisenter klinisk validering for å oppnå en ekte "erstattende medikamenttesting".

2. Forskningsspørsmål og -mål Forskningsspørsmål: Denne studien sammenligner overlevelsesraten for ett år svulstfrie residiv og den treårige svulstfrie residivoverlevelsen for pasienter i den organoidsensitive legemiddelinfusjonsgruppen, den organoid-usensitive legemiddelinfusjonsgruppen, og BCG infusjonsgruppen ved hjelp av en kohortstudie, og forskjellen i residivraten mellom de tre gruppene sammenlignes med enveis K-M overlevelsesanalyse. Vurdering for å evaluere verdien av svulstlignende organmedikamentsensitivitetsanalyser for å veilede individuell perfusjonskjemoterapi for blærekreft.

   Forskningsmål: å vurdere bruksverdien av tumorlignende organlegemiddelsensitivitetseksperimenter for å veilede individuell perfusjonskjemoterapi for blærekreft ved å observere den kliniske effekten av tumorlignende organlegemiddelsensitivitetsmetode for å veilede postoperativ perfusjonskjemoterapi for blærekreftpasienter.

   Se Utfallsmål for detaljer

3. Forskningsmetodikk 3.1 Studiedesign Denne protokollen er basert på de tekniske retningslinjene for kliniske studier av antineoplastiske legemidler, og vedtar en multisenter, kohortstudie.

3.1.1 Gruppering Se Grupper og intervensjoner for detaljer 3.1.2 Blærekreft organoid forberedelse

1. Blærekreftprøvetaking Prøveinnsamlingsprosessen er i samsvar med sykehusets etikk og signert informert samtykke. Pasienter som deltar i forsøket må være patologisk diagnostisert med blærekreft, og størrelsen på tumorprøver som tas ut kirurgisk bør så langt det er mulig være større enn 0,8 cm*3, for patologisk verifisering, organoid kultur, medikamentsensitivitetstest, og så videre. Tumorvev bør samles med oppmerksomhet på vevsiskemitid og kryokonservering, og innsamlingstiden bør være innen 5 minutter når vevene fjernes fra menneskets blodsirkulasjon, for å unngå stressnekrose av tumorvevet på grunn av tidlig hypoksi.
2. Klargjøring av blærekreftorganer I prosessen med vevsbehandling ble fysisk knusing og kollagenasefordøyelse brukt til å behandle vevsprøvene, og de bearbeidede og fordøyde organoidene måtte filtreres gjennom cellesikter med forskjellige diametre før dyrking, for å lage de oppnådde organoidene enhetlig i størrelse og tilrettelegge for ensretting av standarder. Deretter ble de plantet i tredimensjonal matrisegel og dyrket i spesialmedium.
3. Ekspansjon og kultur av organoider til blærekreft Vekststatusen til organoidene ble observert mikroskopisk, og immunhistokjemi og immunfluorescens ble brukt for å karakterisere organoidene, for å bekrefte tilstedeværelsen av tumorceller og for å evaluere deres morfologi. Blærekreftkarsinoide organer ble passert og frosset.

3.1.3 Blærekreftsvulst organoid medikamentsensitivitetstesting Etter å ha observert antall organoider under mikroskop for å nå antallet som kan utsettes for legemiddelsensitivitetstesting, ble det organoide mediet aspirert og kastet. Tilsett 3 mL fordøyelsesløsning til petriskålen, blås dråpene fra hverandre, fordøy ved 37 ℃, blås organoidene og observer under mikroskop når organoidene er fordøyd til en homogen cellemasse som inneholder 2-3 celler, tilsett 2 ganger volum av fordøyelsesløsningen for å avslutte fordøyelsen. 1500 rpm, sentrifuger cellene i 3 minutter, og aspirer deretter og kast supernatanten.

Resuspender cellene med medium, prøv å ikke produsere luftbobler, og fortynn medium til gel i forholdet 1:1,5, inokuler deretter den blandede gelen med 10 ul/brønn med en enkeltkanalspipette i forhåndskjølte 384-brønners plater med 3000 organoider per brønn (denne operasjonen ble utført på is). Etter å ha blandet mediet med gummien i et forhold på 1:1 (40 uL:40 uL), ble mediet dispensert inn i 384-brønnsplaten med 10 uL/brønn som en blank gruppe. Etter å ha banket forsiktig på 384-brønners platen slik at geldråpene lå flatt på bunnen av brønnene, ble platen plassert i en inkubator i 30 minutter for å la geldråpene stivne og forvarmet BCOs-medium ble tilsatt ved 40 ul. /godt. Til medikamenttestbrønnene så vel som til de tomme brønnene rundt kontrollbrønnene ble 40 uL PBS-løsning tilsatt og plassert i en karbondioksidinkubator for å forhindre at væsken fordamper og forårsaker at geldråpene tørker ut.

Etter 3 dager med inkubasjon og observasjon ble det utført mikroskopisk observasjon av statusen til prøven i hver brønn for halvvolums væskeutveksling.

Utform protokollen for legemiddelsensitivitetstest i henhold til kravene i følgende tabell, sett opp kontrollgruppen, blankgruppen og medikamenttestgruppen, legemidlet ble oppløst i henhold til instruksjonene og fortynnet 4 ganger i 6 konsentrasjoner med henholdsvis organoid medium; ved bruk av luminescerende cellelevedyktighetsanalyse, ble stoffet testet ved forskjellige konsentrasjoner av den semi-hemmende konsentrasjonen (IC50), hemming av tumorceller (IR), graden av avvik av IC50 fra konsentrasjonen av stoffet i blodet, AUC (areal under dosen). -responskurve), tar evalueringskriteriene for resultatene av legemiddelsensitivitetsanalysen IC50 og IR som hovedindekser, sammen med graden av avvik for IC50 fra konsentrasjonen av medikamentet i blodet og AUC-resultatene som hjelpevurderingen (for detaljer, vennligst se 3.10.3), å vurdere effektene på overlevelse og spredning av klassen av organismer, og gi klinisk veiledning for bruken av legemidlet.

Tabell 1 Metoder for gruppering av legemiddelsensitivitetstester Grupperingsmetode for legemiddelsensitivitetstesting Blank gruppe: Ingen organoid, ingen legemiddel tilsatt, 6 replikatbrønner per plate. Kontrollgruppe: Inokulert med organoider, ingen ekstra legemiddeleksponering. Legemiddeltestgruppe: Inokulert med organoid, legg til medikamenteksponering. 3.1.4 Kombinasjonsregimer for kjemoterapi medikamenter Tabell 2 Perfusjon med kjemoterapi medikamenter Gemcitabin □ Pirorubicin □ Epirubicin □ Silvestrol □ Adriamycin(doksorubicin) □ 3.2 Studiested og studiepopulasjon (kilde og eksklusjonskriterier for inklusjon) Se studiedesign for detaljer 3.3 Studier Variabler og Studier positive. kontrollgruppen ble ikke utsatt for organoidkultur så vel som organoid medikamentsensitivitetstesting.

De resterende pasientene ble utsatt for organoid medikamentsensitivitetstesting i samsvar med testprotokollen for legemiddelsensitivitet, ved bruk av luminescerende cellelevedyktighetsanalyse for å teste den semi-hemmende konsentrasjonen (IC50) av legemidlet, hemmingshastigheten (IR) av tumorcellene, graden av avvik for IC50 fra legemiddelkonsentrasjonen i blodet, og AUC (området under dose-responskurven) ved forskjellige konsentrasjoner, og evalueringskriteriene for resultatene av medikamentsensitivitetstesting var basert på IC50,IR som hovedindekser med IC50-avviket fra legemiddelkonsentrasjonen i blodet, resultater AUC som hjelpevurdering (se 3.10.3 for detaljer), for å vurdere dens effekt på overlevelse og spredning av klasseorganer.

Pasienter som gjennomgikk organoidkultur og testing av legemiddelsensitivitet gjennomgikk blæreinstillasjon av kjemoterapeutiske midler i henhold til erfaring fra klinikere. De fem perfuserte legemidlene inkluderte gemcitabin, piroksikam, epirubicin, mitomycin og adriamycin (doksorubicin). I henhold til følsomheten til deres perfusjonsmedisiner i organoid medikamentfølsomhetstest, ble de delt inn i organoid-sensitive medikamentperfusjonsgrupper og organoid ikke-sensitive medikamentperfusjonsgrupper. Perfusjonsregime: inkludert induksjonsperfusjonskjemoterapi (4-8 uker etter operasjonen, 1 gang per uke, totalt 4 ganger) og vedlikeholdsperfusjonskjemoterapi (1 gang per måned, totalt 11 ganger).

BCG-infusjonsregime: 6 induksjonsinfusjoner etterfulgt av 3 boosterinfusjoner en gang hver 2. uke for å opprettholde en god immunrespons, etterfulgt av 10 vedlikeholdsinfusjoner en gang i måneden for totalt 19 infusjoner over 1 år.

Kliniske målinger: de to gruppene av pasienter i den organoid-sensitive legemiddelperfusjonsgruppen og den organoid-ikke-sensitive legemiddelperfusjonsgruppen ble fulgt opp og analysert for primære og sekundære studie-endepunkter, og enveis Kaplan-Meier overlevelsesanalyse ble utført å sammenligne forskjellene i gjentakelsesrater mellom de to gruppene. COX-risikoandelsmodellen ble brukt til å analysere residivrisikoforholdet mellom pasientenes kjønn, alder, tumorstadium og grad mellom de to gruppene.

3.4 Studieresultater RECIST1.1-kriterier ble brukt for effektevaluering, og Choi-kriterier og mRECIST-kriterier ble brukt som hjelpekriterier for effektevaluering.

Primære studiens endepunkter: overlevelsesrate uten tumorresidiv i ett år, overlevelsesrate uten tumorresidiv i tre år.

Sekundære endepunkter: ett års tumorprogresjonsfri overlevelsesrate, tre års tumorprogresjonsfri overlevelsesrate.

3.5 Oppfølging De to gruppene av pasienter i den organlignende sensitive medikamentperfusjonsgruppen og den organlignende ikke-sensitive legemiddelperfusjonsgruppen ble fulgt opp og analysert for de primære og sekundære studienes endepunkter.

Cystoskopi er den foretrukne metoden ved gjennomgang av pasienter med NMIBC, og det finnes ikke noe ikke-invasivt alternativ til cystoskopi. Derfor bør NMIBC-oppfølging være basert på vanlig cystoskopi. Dersom det under undersøkelsen oppdages mistenkelige lesjoner i blæreslimhinnen, bør det utføres biopsi for å avklare de patologiske funnene. Urineksfoliativ cytologi, CT/CTU eller MR/MRU utføres ved behov, men ingen av dem kan helt erstatte cystoskopi.

Cystoskopigjennomgangsplanen: lavrisiko NMIBC gjøres en gang ved 3 måneder og 12 måneder etter operasjonen i det 1. året, og en gang i året deretter til det 3. året; NMIBC med middels risiko gjøres én gang 3 måneder, 6 måneder og 12 måneder etter operasjonen, hver 6. måned i det 2. året og hvert år deretter til det 3. året; høyrisiko NMIBC gjøres hver 3. måned de første 2 årene, og hver 6. måned deretter frem til det 3. året.

3.6 Utvalgsstørrelse En prøvestørrelse på 293 tilfeller var tilstrekkelig til å oppfylle kravene til studiens endepunkt.

Det var 73 tilfeller i den organoide ikke-sensitive legemiddelperfusjonsgruppen og 110 tilfeller hver i den organoidsensitive legemiddelperfusjonsgruppen og den positive kontrollgruppen.

Beregningsgrunnlag:

1. Beregning av prøvestørrelse for endepunkt for studien med ett års tumorfri overlevelsesrate: ett års tumorfri overlevelse forventes å være 73 % i gruppen med infusjon av organoid-sensitive legemidler, og 50 % i den organoide ikke-sensitive. medikamentinfusjonsgruppe, med ensidig α=0,05, β=0,2, og forholdet mellom prøvestørrelsene til de to gruppene er 1 (eksperimentell gruppe: kontrollgruppe), prøvestørrelsene til de to gruppene er 55 tilfeller i forsøksgruppen, 55 tilfeller i kontrollgruppen, og 110 tilfeller i den positive kontrollgruppen. 55 tilfeller i kontrollgruppen, totalt 110 tilfeller, og tatt i betraktning 20 % avfall, kreves det en samlet utvalgsstørrelse på 138 tilfeller.
2. Beregn prøvestørrelsen i henhold til endepunktet for den treårige svulstfrie overlevelsesratenstudien: det forventes at den treårige svulstfrie overlevelsesraten for den organoidsensitive medikamentinfusjonsgruppen vil være 63 %, og tre- år tumorfri overlevelsesrate for den organoid-usensitive medikamentinfusjonsgruppen vil være 40 %, og den ensidige α=0,05, β=0,2, og forholdet mellom prøvestørrelsene til de to gruppene vil være 1 (eksperimentell gruppe: kontrollgruppe) ), slik at utvalgsstørrelsene til de to gruppene vil bli beregnet til 58 tilfeller i forsøksgruppen, 58 tilfeller i kontrollgruppen og 11 tilfeller i kontrollgruppen, tatt i betraktning 20 % avfall, og en samlet utvalgsstørrelse på Det vil kreves 138 saker. 58 tilfeller i kontrollgruppen, totalt 116 tilfeller, og tatt i betraktning 20 % avfall, var en total prøvestørrelse på 146 tilfeller nødvendig.
3. I følge resultatene av litteraturen er den ettårs tumorfrie overlevelsesraten for den positive kontrollgruppen 75 %, og i henhold til pre-testen er den ettårs tumorfrie overlevelsesraten for den organoidsensitive legemiddelinfusjonen. gruppen forventes å være 73 %, og grenseverdien for non-inferioritet er 0,2 (kontrollgruppe-eksperimentell gruppe), og forholdet mellom utvalgsstørrelsene til de to gruppene er én med ensidig alfa på 0,05 og beta er 0,2 , er prøvestørrelsen til de to gruppene beregnet som 74 tilfeller av den organoidsensitive medikamentinfusjonsgruppen, 74 tilfeller av den positive kontrollgruppen, og totalt 116 tilfeller av den eksperimentelle gruppen. 74 tilfeller, og 74 tilfeller i den positive kontrollgruppen, for totalt 148 tilfeller. Tatt i betraktning 20 % avfall, er den totale prøvestørrelsen som kreves 186 tilfeller.
4. I følge resultatene av litteraturen er den treårige tumorfrie overlevelsesraten for den positive kontrollgruppen 65 %, og i henhold til pre-testen er den treårige tumorfrie overlevelsen for den organoidsensitive legemiddelinfusjonen. gruppen forventes å være 63 %, og grenseverdien for non-inferioritet er 0,2 (kontrollgruppe-testgruppe), og forholdet mellom utvalgsstørrelsene til de to gruppene er 1 hvis den ensidige alfaen er 0,05 og betaen er 0,2, er prøvestørrelsen til de to gruppene beregnet som 88 tilfeller av den organoid-sensitive medikamentinfusjonsgruppen og 88 tilfeller av den positive kontrollgruppen. 88 tilfeller og 88 tilfeller i den positive kontrollgruppen, totalt 176 tilfeller, og tatt i betraktning 20 % avfall, var det nødvendig med en total prøvestørrelse på 220 tilfeller.

3.7 Flytskjema over forskningsteknikker Denne delen (bilder) beskriver den tekniske ruten for prosjektet. 3.8 Datainnsamling og håndtering Data ble samlet inn ved observasjon og registrering, og de originale dataene ble kontrollert punkt for punkt for å sikre at dataene stemte overens med de i de opprinnelige registreringene. På slutten av forsøket ble det overlevert statistikeren for statistisk analyse.

3.9 Statistiske analysemetoder Målte data er generelt beskrivende statistikk med gjennomsnitt, standardavvik, median, minimum og maksimum verdier. For kategoriske variabler vil deskriptiv statistikk bli utført etter frekvens og prosentandel.

Statistisk programvare SPSS ble brukt for statistisk analyse. Måledata ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (x ± s), t-test, enveis ANOVA (post hoc-test to-og-to sammenligninger ved bruk av LSD-metoden), kjikvadrattest ble brukt for sammenligning av hastigheter, og Spearmans metode ble brukt til korrelasjonsanalyser. p < 0,05 ble vurdert at forskjellen var statistisk signifikant.

3.10 Kvalitetskontroll 3.10.1 Klasseorgan HE-farging og immunhistokjemiresultater Overensstemmende med de patologiske testresultatene, noe som indikerer at de konstruerte organoid- og tumorprøvene bedre kan beholde patologisk stabilitet.

3.10.2 Organoid WES- eller RNA-Seq-analyse Konstruerte organoid- og tumorprøver kan bedre beholde genetisk stabilitet. 3.10.3 Evalueringskriterier for testresultater for legemiddelsensitivitet Evalueringsstandarden for testresultater for legemiddelsensitivitet har IC50,IR som hovedindeks, med graden av avvik mellom IC50 og blodets legemiddelkonsentrasjon, AUC-resultater som en hjelpevurdering, når IC50, IR-sensitive indekser blir møtt på samme tid, anses det som sensitivt; når det ikke er mulig å møte IC50, IR-indekser samtidig, IC50 kombinert med IC50 og behovet for konsentrasjonen av forholdet mellom den mindre grad av forskjell i resultatene av følsomheten.

3.10.3.1 IC50 evalueringskriterier. IC50>20× Ikke følsom

1×<IC50≤20× Lav følsomhet 0,5×<IC50≤1× Moderat følsom IC50≤0,5× høysensitiv Den sensitive gruppen inkluderer sterkt sensitive og moderat sensitive, og den ufølsomme gruppen inkluderer svakt sensitive og motstandsdyktige.

3.10.3.2 Evalueringskriterier for IR-tumorhemmingshastighet. IR <30 % er ufølsom og klassifisert som negativ; IR≥30 % er sensitiv og klassifisert som positiv, der 30 %≤IR<50 % er lav sensitivitet, 50 %≤IR<70 % er moderat sensitivitet, og IR≥70 % er høy sensitivitet.

Sensitivitetsrate = antall tilfeller med IR ≥ 30 % / totalt antall tilfeller i gruppen.

3.10.3.3 Beregning av graden av avvik for IC50 fra blodkonsentrasjonen: graden av avvik fra blodkonsentrasjonen refererer til graden av forskjell mellom IC50-verdien oppnådd fra legemiddelsensitivitetstesten og blodkonsentrasjonen, og beregnes som IC50/blodkonsentrasjon.

Jo mindre forholdet er, desto mer effektivt er stoffet. 3.10.3.4 Kriterier for evaluering av AUC-resultater (areal under legemiddel-tid-kurven): Den spesifikke beregningen av AUC involverer vanligvis integrering av konsentrasjon-tid-kurven.

AUC er nært knyttet til dose-respons-forholdet. I dose-respons-kurven for legemiddeleffektivitet er AUC en sammensatt indikator på den totale effekten av et medikament på en organisme mellom dose og respons. En større AUC er vanligvis forbundet med en bedre terapeutisk effekt.

3.11 Post-studie behandling av organoid Organoidene konstruert vellykket i denne studien vil bli jevnt destruert og deponert etter studien i samsvar med normene for biomedisinsk avfallshåndtering.