Un protocole de recherche pour évaluer l'efficacité des agents chimiothérapeutiques perfusés pour le cancer de la vessie basé sur la technologie organoïde

1. Contexte Le cancer de la vessie est une tumeur maligne provenant de l'uroépithélium de la vessie, représentant la première place dans l'incidence des tumeurs génito-urinaires en Chine. Parmi eux, le cancer uroépithélial de la vessie est le plus fréquent, représentant plus de 90 % des cancers de la vessie. Selon la profondeur de l'invasion tumorale dans la vessie et les caractéristiques pronostiques, le cancer de la vessie est cliniquement classé en cancer de la vessie non invasif sur le plan musculaire (NMIBC) et en cancer de la vessie invasif sur le plan musculaire (MIBC), le NMIBC étant le type principal, représentant environ 75 % de tous les patients atteints d'un cancer de la vessie.

   NMIBC est généralement traité par résection transurétrale de la tumeur de la vessie (TURBt). Bien qu'il soit aux premiers stades de la maladie, le NMIBC présente un taux de récidive élevé, des études faisant état d'un taux de récidive sur 5 ans d'environ 70 %. Par conséquent, la chimiothérapie postopératoire par perfusion vésicale est devenue une mesure thérapeutique clé pour prévenir la récidive du cancer de la vessie. Depuis plus de 60 ans, les gens explorent des médicaments et des méthodes de perfusion vésicale plus efficaces. En 1961, le Thiotepa a été utilisé pour la thérapie par perfusion vésicale et a gagné un certain degré d'efficacité dans la prévention de la récidive des tumeurs superficielles de la vessie. En 1976, Morales pensait que le cancer de la vessie était lié à des déficits immunitaires et, par conséquent, la thérapie par perfusion vésicale BCG a été extrêmement efficace, créant une nouvelle méthode d'immunothérapie pour les tumeurs de la vessie. , qui a été largement apprécié et est toujours considéré comme le médicament de perfusion vésicale le plus efficace. Cependant, l'instillation de BCG peut provoquer des effets secondaires graves, notamment des granulomes urétraux et prostatiques, une irritation de la vessie, de la fièvre, une hématurie et d'autres manifestations locales et des symptômes systémiques de type grippal, entraînant une intolérance et une interruption du traitement chez certains patients, ce qui a limité l'ampleur des effets cliniques. application du BCG. Des études ont montré que l'instillation intravésicale d'agents chimiothérapeutiques dans la vessie peut réduire le taux de récidive à court terme du cancer superficiel de la vessie d'environ 15 à 20 % et le taux de récidive à long terme d'environ 6 % . Il existe actuellement de nombreux choix d'agents chimiothérapeutiques pour l'instillation vésicale, notamment (1) la pirenzolubicine ; (2) la gemcitabine ; (3) la mitomycine; (4) l'épirubicine; (5) doxorubicine; (6) chimiothérapie alternée par perfusion vésicale avec de la gemcitabine et de la pirenzolubicine ; et (7) d'autres chimiothérapies par perfusion combinée. Cependant, en raison de la grande variété de médicaments chimiothérapeutiques, la sélection des médicaments repose principalement sur l’expérience clinique ou sur certains résultats de recherche. Il n’existe pas de norme uniforme et elle est aveugle, empirique et randomisée. Les directives chinoises de diagnostic et de traitement des maladies urologiques ne prévoyaient pas non plus la sélection des médicaments de perfusion, et les patients individuels pour certains médicaments chimiothérapeutiques présentent une résistance naturelle. Lorsque la clinique détermine que le patient n'est pas sensible à l'application du médicament, le médicament a produit de graves effets secondaires toxiques, et même conduire au phénomène de multi-résistance aux médicaments (multi-résistance aux médicaments, MDR), de sorte que le taux de récidive clinique est toujours aussi élevé que 36% à 44%, et en même temps, le la tumeur de ce groupe de patients progresse rapidement, perdant la possibilité de resélectionner la méthode de traitement. Par conséquent, comment éviter la sélection de médicaments primaires résistants aux médicaments et choisir directement des médicaments très sensibles pour réaliser une chimiothérapie individualisée est devenu un point chaud dans la recherche sur la chimiothérapie par perfusion vésicale.

   La réalisation d’une thérapie tumorale de précision dépend grandement de la détection de la sensibilité aux médicaments. Grâce à des expériences précises et individualisées de criblage de médicaments chimiothérapeutiques, le schéma thérapeutique le plus efficace et le moins toxique peut être jugé pour chaque patient avant le début du traitement, de manière à proposer un schéma chimiothérapeutique pour un seul patient est une nouvelle direction de recherche pour réaliser un traitement de précision. du cancer de la vessie et pour améliorer l'efficacité de la chimiothérapie du cancer de la vessie. Auparavant, les modèles précliniques les plus couramment utilisés sont les lignées de cellules tumorales traditionnelles et les xénogreffes de tissus tumoraux d'origine humaine (PDX). La méthode de culture de lignées de cellules tumorales est simple mais insuffisante pour simuler l'état de croissance des cellules tumorales chez les patients, et les médicaments sélectionnés par son système de dépistage des médicaments ont une faible valeur pour une application clinique. Le PDX, bien qu'il puisse simuler les caractéristiques de la tumeur in vivo et préserver la tumeur. Le microenvironnement présente des limites évidentes telles qu'une faible tumorigénicité stable, une longue période de modélisation et d'évaluation (de six mois à un an), longue et laborieuse, et il est difficile à générer et à utiliser pour le criblage de médicaments à haut débit. Par conséquent, le développement de modèles de tests de sensibilité aux médicaments capables d'imiter l'hétérogénéité et la complexité du cancer de la vessie est devenu nécessaire afin de développer des stratégies thérapeutiques et préventives plus personnalisées afin de minimiser les risques et d'optimiser l'efficacité des interventions médicales en ciblant les facteurs génétiques, environnementaux uniques. et les caractéristiques du mode de vie des individus.

   Les organoïdes dérivés du patient (PDO) sont des structures organoïdes 3D formées par des cellules souches auto-assemblées in vitro, qui peuvent être différenciées en plusieurs types de cellules spécifiques à un organe et peuvent présenter des interactions cellule-cellule et matrice environnante ainsi que des modèles de localisation spatiale, recréant in vitro certaines des fonctions et structures clés d'organes réels, et ayant un phénotype stable. structures aux caractéristiques phénotypiques et génétiques stables. Comparés aux lignées cellulaires tumorales bidimensionnelles et au PDX, les organoïdes tumoraux peuvent être cultivés directement en utilisant les propres tissus du patient, et en même temps, ces organoïdes peuvent bien reproduire certaines des caractéristiques clés des tumeurs primaires, conserver la pathomorphologie et les mécanismes biologiques. des tissus du patient, et préserver l'hétérogénéité des tissus tumoraux et un microenvironnement tumoral plus réaliste, tout en ayant un cycle de croissance court. Il est utile pour son utilisation chez les patients atteints de cancer clinique pour les tests de sensibilité aux médicaments de radiothérapie, aux médicaments de ciblage moléculaire, aux anticorps antitumoraux et à d'autres médicaments, afin de prédire la réactivité du patient aux médicaments, avec le potentiel d'aider aux décisions de traitement clinique.

   En 2018, Science a rapporté une étude sur l'utilisation d'organes métastatiques de type tumeur gastro-intestinale pour les tests de sensibilité aux médicaments, qui a analysé de manière comparative les différences de sensibilité entre 21 patients cliniques et leurs AOP correspondants à une série de médicaments ciblés et chimiothérapeutiques, et les résultats ont montré forte cohérence entre les deux. En comparaison avec les résultats réels pour les patients, les OOP étaient bien prédites (sensibilité 100 %, spécificité 93 %, valeur prédictive positive 88 % et valeur prédictive négative 100 %).20 En 2020, Yao Y et al ont construit 96 organoïdes du cancer rectal à l'aide de biopsies de 112 cas de cancer rectal localement avancé, et en ont sélectionné 80 pour tester leur réponse à la radiothérapie, et les résultats ont montré que les organoïdes du cancer rectal étaient sensibles à la radiothérapie et au patient. réponse clinique. Les résultats ont montré que la sensibilité des organoïdes du cancer rectal à la radiothérapie était hautement cohérente avec la réponse clinique des patients (sensibilité 78 %, spécificité 92 %, précision 84 %). Par la suite, dans des tumeurs telles que le cancer gastrique et le cancer du sein, la concordance entre la PDO et la réponse aux médicaments des patients atteints de tumeurs a également été trouvée. Yan HHN et al. ont construit une bibliothèque d'organoïdes pour le cancer gastrique en utilisant des tissus tumoraux, des tissus paracancéreux et des métastases ganglionnaires provenant de 34 patients atteints d'un cancer gastrique. Deux d’entre eux ont développé des métastases tumorales et ont subi une association de cisplatine et de 5-FU après la chirurgie, qui ont tous deux bien répondu. L'autre cas a reçu une chimiothérapie avant l'intervention chirurgicale et n'a pas répondu à la capécitabine après l'intervention chirurgicale. L'examen de la sensibilité des composés correspondants de la PDO dans ces trois cas a montré que la sensibilité médicamenteuse de la PDO était en parfait accord avec la réponse clinique de chaque patient. Guillen KP et al ont construit la PDX et la PDO en utilisant des échantillons de tumeurs résistantes à l'hormonothérapie, patients atteints d'un cancer du sein en rechute et métastatique, et ces échantillons ont été examinés sur les plans histomorphologique, génomique et de sensibilité aux médicaments. Les résultats ont montré que le PDX et le PDO du cancer du sein réduisaient fortement les propriétés histobiologiques et génomiques de leurs tumeurs sources, et que tous deux répondaient de manière cohérente aux médicaments antitumoraux. Une patiente atteinte d'un cancer du sein triple négatif au stade IIA dans cette étude a développé des métastases hépatiques environ un an après avoir subi une chimiothérapie préopératoire et un traitement chirurgical. Les enquêteurs ont soumis les constructions PDO et PDX à des tests de sensibilité aux médicaments ex vivo et ont découvert que l'éribuline, un inhibiteur des microtubules, avait le meilleur effet thérapeutique. Sur la base de ce résultat, il a été demandé aux patients de suivre un traitement à l'éribuline, ce qui a entraîné une rémission complète des métastases hépatiques pendant près de 5 mois après l'administration. Ces études confirment dans une certaine mesure la possibilité de la PDO pour guider la médication des patients atteints de tumeurs cliniques. Il a également été démontré qu'en comparant la différence de réponse aux médicaments entre les organes normaux et l'AOP, il a été constaté que les médicaments à haute sélectivité aident à réduire les effets secondaires toxiques chez les patients cliniques. Ainsi, il est clair que les tests de sensibilité aux médicaments effectués par PDO pour découvrir le schéma thérapeutique le plus approprié contribueront à améliorer l'efficacité clinique des patients atteints de tumeurs, à réduire les effets secondaires toxiques, le risque de résistance aux médicaments et les risques de récidive tumorale, et à maximiser les bénéfices pour patients.

   Par conséquent, en nous appuyant sur des modèles organoïdes de cancer de la vessie dérivés de patients, nous réaliserons des expériences de tests de sensibilité aux médicaments de chimiothérapie par perfusion de cancer de la vessie non invasifs sur le plan musculaire, établirons un système standardisé de tests de sensibilité aux médicaments pour les organoïdes du cancer de la vessie et formulerons des normes de dépistage pour les tests de sensibilité aux médicaments des organoïdes du cancer de la vessie, afin de sélectionner le schéma thérapeutique optimal, d'aider au développement clinique de nouveaux protocoles de traitement individualisés et d'effectuer une validation clinique multicentrique pour réaliser un véritable « test de médicaments de substitution ».

2. Questions et objectifs de recherche Questions de recherche : Cette étude compare le taux de survie sans récidive tumorale à un an et le taux de survie sans récidive tumorale à trois ans des patients du groupe de perfusion de médicaments sensibles aux organoïdes, du groupe de perfusion de médicaments non sensibles aux organoïdes, et le groupe de perfusion de BCG au moyen d'une étude de cohorte, et la différence de taux de récidive entre les trois groupes est comparée par une analyse de survie unidirectionnelle KM. Évaluation visant à évaluer la valeur des tests de sensibilité aux médicaments d'organes de type tumoral pour guider la chimiothérapie de perfusion individuelle pour le cancer de la vessie.

   Objectif de recherche : évaluer la valeur d'application des expériences de sensibilité aux médicaments des organes de type tumoral pour guider la chimiothérapie de perfusion individuelle pour le cancer de la vessie en observant l'efficacité clinique de la méthode de sensibilité aux médicaments des organes de type tumoral pour guider la chimiothérapie de perfusion postopératoire pour les patients atteints d'un cancer de la vessie.

   Voir les mesures des résultats pour plus de détails

3. Méthodologie de recherche 3.1 Conception de l'étude Ce protocole est basé sur les directives techniques pour les essais cliniques de médicaments antinéoplasiques et adopte une étude de cohorte multicentrique.

3.1.1 Regroupement Voir Groupes et interventions pour plus de détails 3.1.2 Préparation organoïde pour le cancer de la vessie

1. Prélèvement d'échantillons de cancer de la vessie Le processus de prélèvement d'échantillons est conforme à l'éthique de l'hôpital et au consentement éclairé signé. Les patients inscrits à l'expérience doivent recevoir un diagnostic pathologique de cancer de la vessie et la taille des échantillons de tumeurs prélevés chirurgicalement doit être supérieure à 0,8 cm*3 dans la mesure du possible, à des fins de vérification pathologique, de culture organoïde, de test de sensibilité aux médicaments, etc. Les tissus tumoraux doivent être collectés en prêtant attention au temps d'ischémie tissulaire et à la cryoconservation, et le temps de collecte doit être inférieur à 5 minutes lorsque les tissus sont retirés de la circulation sanguine humaine, afin d'éviter la nécrose de stress des tissus tumoraux due à une hypoxie précoce.
2. Préparation des organes du cancer de la vessie Au cours du traitement des tissus, un broyage physique et une digestion par la collagénase ont été utilisés pour traiter les échantillons de tissus, et les organoïdes traités et digérés devaient être filtrés à travers des tamis cellulaires de différents diamètres avant la culture, afin de fabriquer les organoïdes obtenus. de taille uniforme et faciliter l’unification des normes. Ensuite, ils ont été plantés dans un gel matriciel tridimensionnel et cultivés dans un milieu spécial.
3. Expansion et culture des organoïdes du cancer de la vessie L'état de croissance des organoïdes a été observé au microscope et l'immunohistochimie et l'immunofluorescence ont été utilisées pour caractériser les organoïdes, confirmer la présence de cellules tumorales et évaluer leur morphologie. Les organes carcinoïdes du cancer de la vessie ont été prélevés et congelés.

3.1.3 Tests de sensibilité aux médicaments organoïdes pour tumeurs du cancer de la vessie Après avoir observé le nombre d'organoïdes au microscope pour atteindre le nombre pouvant être soumis à des tests de sensibilité aux médicaments, le milieu organoïde a été aspiré et jeté. Ajouter 3 ml de solution digestive dans la boîte de Pétri, séparer les gouttelettes, digérer à 37℃, souffler les organoïdes et observer au microscope, lorsque les organoïdes sont digérés en une masse cellulaire homogène contenant 2-3 cellules, ajouter 2 fois le volume de solution digestive pour terminer la digestion. 1500 tr/min, centrifuger les cellules pendant 3 minutes, puis aspirer et jeter le surnageant.

Remettre en suspension les cellules avec du milieu, essayer de ne pas produire de bulles d'air et diluer le milieu sur gel dans un rapport de 1 : 1,5, puis inoculer le gel mélangé à raison de 10 µL/puits avec une pipette monocanal dans des plaques de 384 puits pré-refroidies contenant 3 000 organoïdes. par puits (cette opération a été réalisée sur glace). Après avoir mélangé le milieu avec la gomme dans un rapport de 1:1 (40 µL:40 µL), le milieu a été distribué dans la plaque à 384 puits à raison de 10 µL/puits en tant que groupe vierge. Après avoir tapoté doucement la plaque à 384 puits pour que les gouttelettes de gel reposent à plat sur le fond des puits, la plaque a été placée dans un incubateur pendant 30 min pour permettre aux gouttelettes de gel de se solidifier et du milieu BCO préchauffé a été ajouté à 40 µL. /Bien. Aux puits de test de drogue ainsi qu'aux puits vides autour des puits témoins, 40 µL de solution PBS ont été ajoutés et placés dans un incubateur à dioxyde de carbone pour empêcher le liquide de s'évaporer et de sécher les gouttes de gel.

Après 3 jours d'incubation et d'observation, une observation microscopique de l'état de l'échantillon dans chaque puits a été réalisée pour un échange de fluide demi-volume.

Concevez le protocole de test de sensibilité aux médicaments selon les exigences du tableau suivant, configurez le groupe témoin, le groupe blanc et le groupe de test de drogue, le médicament a été dissous conformément aux instructions et dilué 4 fois en 6 concentrations avec un milieu organoïde, respectivement ; à l'aide d'un test de viabilité cellulaire luminescente, le médicament a été testé à différentes concentrations de concentration semi-inhibitrice (CI50), d'inhibition des cellules tumorales (IR), du degré d'écart de la CI50 par rapport à la concentration sanguine du médicament, de l'ASC (zone sous la dose -courbe de réponse), les critères d'évaluation des résultats du test de sensibilité aux médicaments prennent la CI50 et l'IR comme indices principaux, ainsi que le degré d'écart de la CI50 par rapport à la concentration sanguine du médicament et les résultats de l'ASC comme jugement auxiliaire (pour plus de détails, veuillez vous référer à 3.10.3), évaluer les effets sur la survie et la prolifération de la classe d'organismes et donner des conseils cliniques sur l'utilisation du médicament.

Tableau 1 Méthodes de regroupement des tests de sensibilité aux médicaments Méthode de regroupement des tests de sensibilité aux médicaments Groupe vierge : aucun organoïde, aucun médicament ajouté, 6 puits répétés par plaque. Groupe témoin : inoculé avec des organoïdes, aucune exposition supplémentaire au médicament. Groupe de test de drogue : inoculé avec un organoïde, ajouter une exposition au médicament. 3.1.4 Schémas thérapeutiques d'association de médicaments de chimiothérapie Tableau 2 Médicaments de chimiothérapie par perfusion Gemcitabine □ Pirorubicine □ Épirubicine □ Silvestrol □ Adriamycine (doxorubicine) □ 3.2 Site d'étude et population étudiée (source et critères d'exclusion d'inclusion) Voir le plan de l'étude pour plus de détails 3.3 Variables (facteurs) et mesures de l'étude Les positifs Le groupe témoin n’a pas été soumis à une culture organoïde ni à des tests de sensibilité aux médicaments organoïdes.

Les patients restants ont été soumis à des tests de sensibilité aux médicaments organoïdes conformément au protocole de test de sensibilité aux médicaments, en utilisant un test de viabilité des cellules luminescentes pour tester la concentration semi-inhibitrice (IC50) du médicament, le taux d'inhibition (IR) des cellules tumorales, le degré de l'écart de la CI50 par rapport à la concentration sanguine du médicament et de l'ASC (l'aire sous la courbe dose-réponse) à différentes concentrations, et les critères d'évaluation des résultats des tests de sensibilité aux médicaments étaient basés sur la CI50,IR comme principaux indices avec l'écart IC50 par rapport à la concentration sanguine du médicament, les résultats de l'ASC constituent un jugement auxiliaire (voir 3.10.3 pour plus de détails), pour évaluer son effet sur la survie et la prolifération des organes de classe.

Les patients ayant subi une culture organoïde et des tests de sensibilité aux médicaments ont subi une instillation vésicale d'agents chimiothérapeutiques selon l'expérience des cliniciens. Les cinq médicaments perfusés comprenaient la gemcitabine, le piroxicam, l'épirubicine, la mitomycine et l'adriamycine (doxorubicine). Selon la sensibilité de leurs médicaments de perfusion dans le test de sensibilité aux médicaments organoïdes, ils ont été divisés en groupe de perfusion de médicaments sensibles aux organoïdes et groupe de perfusion de médicaments non sensibles aux organoïdes. Schéma de perfusion : comprenant la chimiothérapie de perfusion d'induction (4 à 8 semaines après la chirurgie, 1 fois par semaine, 4 fois au total) et la chimiothérapie de perfusion d'entretien (1 fois par mois, 11 fois au total).

Schéma de perfusion de BCG : 6 perfusions d'induction suivies de 3 perfusions de rappel une fois toutes les 2 semaines pour maintenir une bonne réponse immunitaire, suivies de 10 perfusions d'entretien une fois par mois pour un total de 19 perfusions sur 1 an.

Mesures cliniques : les deux groupes de patients du groupe de perfusion de médicaments sensibles aux organoïdes et du groupe de perfusion de médicaments non sensibles aux organoïdes ont été suivis et analysés pour les critères d'évaluation primaires et secondaires de l'étude, et une analyse de survie unidirectionnelle de Kaplan-Meier a été réalisée. pour comparer les différences de taux de récidive entre les deux groupes. Le modèle de proportion de risque COX a été utilisé pour analyser le rapport de risque de récidive selon le sexe, l'âge, le stade et le grade de la tumeur entre les deux groupes.

3.4 Résultats de l'étude Les critères RECIST1.1 ont été utilisés pour l'évaluation de l'efficacité, et les critères Choi et mRECIST ont été utilisés comme critères auxiliaires d'évaluation de l'efficacité.

Critères d'évaluation principaux de l'étude : taux de survie sans récidive tumorale à un an, taux de survie sans récidive tumorale à trois ans.

Critères secondaires : taux de survie sans progression tumorale à un an, taux de survie sans progression tumorale à trois ans.

3.5 Suivi Les deux groupes de patients du groupe de perfusion de médicaments sensibles aux organes et du groupe de perfusion de médicaments non sensibles aux organes ont été suivis et analysés pour les critères d'évaluation primaires et secondaires de l'étude.

La cystoscopie est la méthode de choix lors de l'examen des patients atteints de NMIBC et il n'existe pas d'alternative non invasive à la cystoscopie. Par conséquent, le suivi du NMIBC doit reposer sur une cystoscopie régulière. Si des lésions suspectes de la muqueuse vésicale sont détectées lors de l'examen, une biopsie doit être réalisée pour clarifier les résultats pathologiques. Une cytologie exfoliative urinaire, une TDM/CTU ou une IRM/IRM sont réalisées si nécessaire, mais aucune ne peut remplacer complètement la cystoscopie.

Le plan de révision de la cystoscopie : le NMIBC à faible risque est réalisé une fois à 3 mois et 12 mois après l'intervention chirurgicale la 1ère année, et une fois par an ensuite jusqu'à la 3ème année ; le NMIBC à risque intermédiaire est effectué une fois à 3 mois, 6 mois et 12 mois après la chirurgie, tous les 6 mois la 2e année, et chaque année par la suite jusqu'à la 3e année ; Le NMIBC à haut risque est effectué tous les 3 mois au cours des 2 premières années, et tous les 6 mois par la suite jusqu'à la 3ème année.

3.6 Taille de l'échantillon Une taille d'échantillon de 293 cas était suffisante pour répondre aux exigences relatives aux critères d'évaluation de l'étude.

Il y a eu 73 cas dans le groupe de perfusion de médicaments organoïdes non sensibles et 110 cas chacun dans le groupe de perfusion de médicaments sensibles aux organoïdes et dans le groupe témoin positif.

Base de calcul :

1. Calcul de la taille de l'échantillon pour le critère d'évaluation de l'étude sur le taux de survie sans tumeur à un an : le taux de survie sans tumeur à un an devrait être de 73 % dans le groupe de perfusion de médicament sensible aux organoïdes et de 50 % dans le groupe non sensible aux organoïdes. groupe de perfusion de médicament, avec unilatéral α = 0,05, β = 0,2 et le rapport des tailles d'échantillon des deux groupes est de 1 (groupe expérimental : groupe témoin), les tailles d'échantillon des deux groupes sont de 55 cas dans le groupe expérimental, 55 cas dans le groupe témoin et 110 cas dans le groupe témoin positif. 55 cas dans le groupe témoin, totalisant 110 cas, et en considérant une excrétion de 20 %, un échantillon total de 138 cas est requis.
2. Calculez la taille de l'échantillon en fonction du critère d'évaluation de l'étude sur le taux de survie sans tumeur à trois ans : on s'attend à ce que le taux de survie sans tumeur à trois ans du groupe de perfusion de médicament sensible aux organoïdes soit de 63 %, et les trois Le taux de survie sans tumeur du groupe de perfusion de médicament insensible aux organoïdes sera de 40 %, et le taux unilatéral α = 0,05, β = 0,2, et le rapport des tailles d'échantillon des deux groupes sera de 1 (groupe expérimental : groupe témoin ), de sorte que les tailles d'échantillon des deux groupes seront calculées comme 58 cas dans le groupe expérimental, 58 cas dans le groupe témoin et 11 cas dans le groupe témoin, en tenant compte d'une excrétion de 20 % et d'une taille d'échantillon totale de 138 cas seront nécessaires. 58 cas dans le groupe témoin, totalisant 116 cas, et en considérant une excrétion de 20 %, un échantillon total de 146 cas était requis.
3. Selon les résultats de la littérature, le taux de survie sans tumeur à un an du groupe témoin positif est de 75 % et, selon le pré-test, le taux de survie sans tumeur à un an de la perfusion de médicament sensible aux organoïdes. Le groupe devrait être de 73 % et la valeur seuil de non-infériorité est de 0,2 (groupe témoin-groupe expérimental), et le rapport entre les tailles d'échantillon des deux groupes est un, l'alpha unilatéral étant de 0,05 et le bêta de 0,2. , la taille de l'échantillon des deux groupes est calculée comme étant 74 cas du groupe de perfusion de médicament sensible aux organoïdes, 74 cas du groupe témoin positif et un total de 116 cas du groupe expérimental. 74 cas, et 74 cas dans le groupe témoin positif, pour un total de 148 cas. En considérant une excrétion de 20 %, la taille totale de l'échantillon requise est de 186 cas.
4. Selon les résultats de la littérature, le taux de survie sans tumeur à trois ans du groupe témoin positif est de 65 % et, selon le pré-test, le taux de survie sans tumeur à trois ans de la perfusion de médicament sensible aux organoïdes groupe devrait être de 63 %, et la valeur seuil de non-infériorité est de 0,2 (groupe témoin-groupe test), et le rapport entre les tailles d'échantillon des deux groupes est de 1 si l'alpha unilatéral est de 0,05 et le bêta est de 0,05. 0,2, la taille de l'échantillon des deux groupes est calculée comme étant 88 cas du groupe de perfusion de médicament sensible aux organoïdes et 88 cas du groupe témoin positif. 88 cas et 88 cas dans le groupe témoin positif, totalisant 176 cas, et en tenant compte d'une excrétion de 20 %, un échantillon total de 220 cas était requis.

3.7 Organigramme des techniques de recherche Cette section (images) décrit le parcours technique du projet. 3.8 Collecte et gestion des données Les données ont été collectées par observation et enregistrement, et les données originales ont été vérifiées élément par élément pour garantir qu'elles étaient cohérentes avec celles des enregistrements originaux. A la fin de l’expérience, il a été remis au statisticien pour analyse statistique.

3.9 Méthodes d'analyse statistique Les données mesurées sont généralement des statistiques descriptives avec des valeurs moyennes, écarts types, médianes, minimales et maximales. Pour les variables catégorielles, des statistiques descriptives seront effectuées en fonction de la fréquence et du pourcentage.

Le logiciel statistique SPSS a été utilisé pour l'analyse statistique. Les données de mesure ont été exprimées sous forme de moyenne ± écart type (x ± s), test t, ANOVA unidirectionnelle (test post hoc comparaisons deux par deux utilisant la méthode LSD), le test du chi carré a été utilisé pour comparer les taux, et la méthode de Spearman a été utilisée pour les analyses de corrélation. p < 0,05 a été considéré comme une différence statistiquement significative.

3.10 Contrôle qualité 3.10.1 Résultats de coloration HE et d'immunohistochimie des organes de classe Conforme aux résultats des tests pathologiques, indiquant que les échantillons d'organoïdes et de tumeurs construits peuvent mieux conserver la stabilité pathologique.

3.10.2 Analyse organoïde WES ou RNA-Seq Les échantillons d'organoïdes et de tumeurs construits peuvent mieux conserver la stabilité génétique. 3.10.3 Critères d'évaluation des résultats des tests de sensibilité aux médicaments La norme d'évaluation des résultats des tests de sensibilité aux médicaments a IC50, IR comme indice principal, avec le degré d'écart entre IC50 et la concentration sanguine du médicament, les résultats de l'ASC comme jugement auxiliaire, lorsque les indices sensibles IC50, IR sont réunies en même temps, elle est considérée comme sensible ; lorsqu'il n'est pas possible de respecter les indices IC50, IR en même temps, IC50 combiné avec l'IC50 et la nécessité de concentrer le rapport du plus petit degré de différence dans les résultats de la sensibilité.

3.10.3.1 Critères d'évaluation IC50. IC50>20× Non sensible

1×<IC50≤20× Faible sensibilité 0,5×<IC50≤1× Modérément sensible IC50≤0,5× très sensible Le groupe sensible comprend les personnes fortement sensibles et moyennement sensibles, et le groupe insensible comprend les personnes faiblement sensibles et résistantes.

3.10.3.2 "Critères d'évaluation du taux d'inhibition des tumeurs IR". IR <30 % est insensible et classé comme négatif ; IR≥30 % est sensible et classé comme positif, dans lequel 30 %≤IR<50 % est une faible sensibilité, 50 %≤IR<70 % est une sensibilité modérée et IR≥70 % est une sensibilité élevée.

Taux de sensibilité = nombre de cas avec IR ≥ 30% / nombre total de cas dans le groupe.

3.10.3.3 Calcul du degré d'écart de l'IC50 par rapport à la concentration sanguine : le degré d'écart par rapport à la concentration sanguine fait référence au degré de différence entre la valeur IC50 obtenue à partir du test de sensibilité au médicament et la concentration sanguine, et est calculé comme IC50/concentration sanguine.

Plus le rapport est petit, plus le médicament est efficace. 3.10.3.4 Critères d'évaluation des résultats de l'ASC (aire sous la courbe médicament-temps) : Le calcul spécifique de l'AUC implique généralement l'intégration de la courbe concentration-temps.

L'ASC est étroitement liée à la relation dose-réponse. Dans la courbe dose-réponse de l’efficacité d’un médicament, l’ASC est un indicateur composite de l’effet global d’un médicament sur un organisme entre la dose et la réponse. Une ASC plus élevée est généralement associée à un meilleur effet thérapeutique.

3.11 Traitement post-étude de l'organoïde Les organoïdes construits avec succès dans cette étude seront uniformément détruits et éliminés après l'étude conformément aux normes d'élimination des déchets biomédicaux.