Протокол исследования для оценки эффективности перфузионных химиотерапевтических агентов при раке мочевого пузыря на основе органоидной технологии

1. Актуальность: Рак мочевого пузыря — злокачественная опухоль, исходящая из уроэпителия мочевого пузыря, занимающая первое место по заболеваемости опухолями мочеполовой системы в Китае. Среди них наиболее распространенным является уроэпителиальный рак мочевого пузыря, на его долю приходится более 90% случаев рака мочевого пузыря. По глубине инвазии опухоли в мочевой пузырь и прогностическим характеристикам рак мочевого пузыря клинически подразделяют на немышечно-инвазивный рак мочевого пузыря (НМИРМП) и мышечно-инвазивный рак мочевого пузыря (МИРМП), при этом НМИРМП является основным типом, на долю которого приходится около 75% всех больных раком мочевого пузыря.

   НМИРМЖ обычно лечат с помощью трансуретральной резекции опухоли мочевого пузыря (ТУРБт). Несмотря на то, что НМИРМЖ находится на ранних стадиях заболевания, он имеет высокую частоту рецидивов: исследования показывают, что частота рецидивов в течение 5 лет составляет примерно 70%. Таким образом, послеоперационная химиотерапия перфузии мочевого пузыря стала ключевой терапевтической мерой для предотвращения рецидива рака мочевого пузыря. Более 60 лет люди изучают более эффективные препараты и методы перфузии мочевого пузыря. В 1961 году Тиотепа использовался для перфузионной терапии мочевого пузыря и получил определенная степень эффективности в предотвращении рецидивов поверхностных опухолей мочевого пузыря. В 1976 году Моралес полагал, что рак мочевого пузыря связан с иммунодефицитом, и, соответственно, перфузионная терапия мочевого пузыря БЦЖ оказалась чрезвычайно успешной, создав новый способ иммунотерапии опухолей мочевого пузыря. , который получил широкое признание и до сих пор считается наиболее эффективным препаратом для перфузии мочевого пузыря. Однако инстилляция БЦЖ может вызывать серьезные побочные эффекты, включая гранулемы уретры и предстательной железы, раздражение мочевого пузыря, лихорадку, гематурию и другие местные проявления и системные гриппоподобные симптомы, что приводит к непереносимости и прекращению лечения у некоторых пациентов, что ограничивает широкий клинический опыт. применение БЦЖ. Исследования показали, что внутрипузырная инстилляция химиотерапевтических агентов в мочевой пузырь может снизить частоту рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря в краткосрочной перспективе примерно на 15–20%, а частоту отдаленных рецидивов - примерно на 6%. В настоящее время существует множество вариантов химиотерапевтических агентов для инстилляции мочевого пузыря, включая (1) пирензолубицин; (2) гемцитабин; (3) митомицин; (4) эпирубицин; (5) доксорубицин; (6) чередование инфузионной химиотерапии с гемцитабином и пирензолубицином; и (7) другие комбинированные инфузионные химиотерапевтические препараты. Однако из-за большого разнообразия химиотерапевтических препаратов выбор лекарств в основном зависит от клинического опыта или определенных результатов исследований, единого стандарта не существует, он является слепым, эмпирическим и рандомизированным. Китайские рекомендации по диагностике и лечению урологических заболеваний также не предусматривают подбор перфузионных препаратов, а отдельные пациенты к некоторым химиотерапевтическим препаратам демонстрируют естественную резистентность, когда в клинике определяется, что пациент не чувствителен к применению препарата, препарат вызывает серьезные токсичные побочные эффекты и даже приводят к явлению множественной лекарственной устойчивости (множественная лекарственная устойчивость, MDR), так что клиническая частота рецидивов по-прежнему достигает 36–44%, и в то же время Опухоль этой группы больных быстро прогрессирует, теряя возможность повторного выбора метода лечения. Поэтому вопрос о том, как избежать выбора первичных лекарственно-устойчивых препаратов и напрямую выбирать препараты с высокой чувствительностью для достижения индивидуализированной химиотерапии, стал горячей точкой в ​​исследованиях перфузионной химиотерапии мочевого пузыря.

   Реализация прецизионной терапии опухолей во многом зависит от выявления чувствительности к лекарствам. Благодаря точным индивидуализированным экспериментам по скринингу химиотерапевтических препаратов можно определить наиболее эффективный и наименее токсичный терапевтический режим для каждого пациента перед началом лечения, поэтому предложение химиотерапевтического режима для одного пациента является новым направлением исследований для реализации точного лечения. рака мочевого пузыря и повысить эффективность химиотерапии рака мочевого пузыря. Ранее наиболее часто используемыми доклиническими моделями были традиционные линии опухолевых клеток и ксенотрансплантаты опухолевой ткани человеческого происхождения (PDX). Метод культивирования линий опухолевых клеток прост, но недостаточен для моделирования состояния роста опухолевых клеток у пациентов, а препараты, проверенные с помощью его системы скрининга лекарств, имеют низкую ценность для клинического применения. PDX, хотя он может моделировать характеристики опухоли in vivo и сохранять опухоль. микроокружения, имеет очевидные ограничения, такие как низкая стабильная туморогенность, длительный период моделирования и оценки (от полугода до одного года), трудоемкий и трудоемкий, а также его трудно создать и использовать для высокопроизводительного скрининга лекарств. Поэтому разработка моделей анализа чувствительности к лекарствам, которые могут имитировать гетерогенность и сложность рака мочевого пузыря, стала необходимой для разработки более персонализированных терапевтических и профилактических стратегий для минимизации риска и оптимизации эффективности медицинских вмешательств путем воздействия на уникальные генетические и экологические факторы. и особенности образа жизни людей.

   Органоиды, полученные из пациента (PDO), представляют собой трехмерные органоидные структуры, образованные стволовыми клетками, самоорганизующимися in vitro, которые могут дифференцироваться в несколько типов органоспецифичных клеток и могут демонстрировать взаимодействия между клетками и окружающим клеткой матриксом, а также модели пространственного расположения, воссоздавая in vitro некоторые ключевые функции и структуры реальных органов, имеющие стабильный фенотип. структуры со стабильными фенотипическими и генетическими характеристиками. По сравнению с двумерными линиями опухолевых клеток и PDX, опухолевые органоиды можно культивировать непосредственно с использованием собственных тканей пациента, и в то же время эти органоиды могут хорошо воспроизводить некоторые ключевые характеристики первичных опухолей, сохранять патоморфологию и биологические механизмы. тканей пациента, сохраняют гетерогенность опухолевых тканей и более реалистичное микроокружение опухоли, а также имеют короткий цикл роста. Его полезно использовать у клинических больных раком для тестирования чувствительности к лекарственным препаратам лучевой терапии, препаратам молекулярного таргетинга, противоопухолевым антителам и другим лекарствам, чтобы предсказать реакцию пациента на лекарства, что потенциально может помочь в принятии решений о клиническом лечении.

   В 2018 году журнал Science сообщил об исследовании использования метастатических опухолеподобных органов желудочно-кишечного тракта для тестирования чувствительности к лекарствам, в ходе которого сравнивались различия в чувствительности между 21 клиническим пациентом и соответствующими им PDO к ряду таргетных и химиотерапевтических препаратов, и результаты показали, что сильная согласованность между ними. По сравнению с фактическими исходами пациентов, PDO были хорошо предсказаны (чувствительность 100%, специфичность 93%, положительная прогностическая ценность 88% и отрицательная прогностическая ценность 100%). В 2020 году Яо И и др. сконструировали 96 органоидов рака прямой кишки, используя биопсию 112 случаев местно-распространенного рака прямой кишки, и выбрали 80 из них для проверки их реакции на лучевую терапию. Результаты показали, что органоиды рака прямой кишки были чувствительны к лучевой терапии и воздействию пациента. клинический ответ. Результаты показали, что чувствительность органоидов рака прямой кишки к лучевой терапии в высокой степени соответствовала клиническому ответу пациентов (чувствительность 78%, специфичность 92%, точность 84%). Впоследствии при таких опухолях, как рак желудка и рак молочной железы, также было обнаружено соответствие между PDO и реакцией опухолевых пациентов на лекарства. Yan HHN и др. создали библиотеку органоидов рака желудка, используя опухолевые ткани, парараковые ткани и метастазы в лимфатические узлы 34 пациентов с раком желудка. У двоих из них развились метастазы опухоли, и после операции им назначили комбинацию цисплатина и 5-ФУ, оба из которых дали хороший ответ. Другой случай получал химиотерапию перед операцией и не ответил на капецитабин после операции. Исследование чувствительности соответствующих соединений ПДО в этих трех случаях показало, что чувствительность ПДО к лекарственному средству полностью соответствовала клиническому ответу каждого пациента. Guillen KP и соавт. сконструировали PDX и PDO, используя образцы опухолей из устойчивых к эндокринной терапии, пациенты с рецидивирующим и метастатическим раком молочной железы, и эти образцы были исследованы гистоморфологически, геномно и на чувствительность к лекарствам. Результаты показали, что как PDX, так и PDO рака молочной железы сильно снижали гистобиологические и геномные свойства исходных опухолей, и оба последовательно реагировали на противоопухолевые препараты. У пациентки с трижды негативным раком молочной железы на стадии IIA в этом исследовании метастазы в печени развились примерно через 1 год после прохождения предоперационной химиотерапии и хирургического лечения. Исследователи подвергли конструкции PDO и PDX тесту на чувствительность к лекарственным средствам ex vivo и обнаружили, что ингибитор микротрубочек эрибулин оказывает наилучший терапевтический эффект. На основании этого результата пациентам было рекомендовано пройти курс лечения эрибулином, что привело к полной ремиссии метастазов в печени в течение почти 5 месяцев после приема дозы. Эти исследования в некоторой степени подтверждают возможность использования PDO в лечении пациентов с клиническими опухолями. Также было показано, что путем сравнения разницы в реакции на лекарства между нормоподобными органами и ПДО было обнаружено, что препараты с высокой селективностью помогают снизить токсические побочные эффекты у клинических пациентов. Таким образом, очевидно, что тестирование чувствительности к лекарственным препаратам, проводимое PDO для определения наиболее подходящей схемы лечения, поможет улучшить клиническую эффективность пациентов с опухолями, снизить токсические побочные эффекты, риск лекарственной устойчивости и вероятность рецидива опухоли, а также максимизировать преимущества лечения. пациенты.

   Поэтому, опираясь на органоидные модели рака мочевого пузыря, полученные от пациента, мы проведем эксперименты по тестированию чувствительности к лекарствам при перфузионной химиотерапии рака мочевого пузыря без мышечно-инвазивного воздействия, создадим стандартизированную систему тестирования чувствительности к лекарствам для органоидов рака мочевого пузыря и сформулируем стандарты скрининга для тестирования чувствительности к лекарствам. органоиды рака мочевого пузыря, чтобы определить оптимальную схему комбинации лекарств, помочь в клинической разработке новых индивидуальных протоколов лечения и провести многоцентровую клиническую проверку для достижения настоящего «тестирования лекарств-заменителей».

2. Вопросы и цели исследования Вопросы исследования: В этом исследовании сравниваются годовая выживаемость без опухолей без рецидивов и трехлетняя выживаемость без опухолей без рецидивов у пациентов в группе, получавшей органоид-чувствительные лекарственные средства, в группе, в которой вводили органоид-нечувствительные лекарства, и группу инфузии БЦЖ посредством когортного исследования, а разницу в частоте рецидивов между тремя группами сравнивают с помощью одностороннего анализа выживаемости K-M. Оценка для оценки значения анализов чувствительности опухолеподобных органов к лекарствам при выборе индивидуальной перфузионной химиотерапии при раке мочевого пузыря.

   Цель исследования: оценить практическую ценность экспериментов по чувствительности опухолеподобных органов к лекарствам при проведении индивидуальной перфузионной химиотерапии при раке мочевого пузыря путем наблюдения за клинической эффективностью метода чувствительности к лекарствам опухолеподобных органов при проведении послеоперационной перфузионной химиотерапии у пациентов с раком мочевого пузыря.

   Подробности см. в разделе «Показатели результатов».

3. Методика исследования 3.1. Дизайн исследования. Этот протокол основан на Техническом руководстве по клиническим испытаниям противоопухолевых препаратов и предполагает многоцентровое когортное исследование.

3.1.1 Группирование Подробности см. в разделе «Группы и вмешательства» 3.1.2. Органоидный препарат рака мочевого пузыря

1. Сбор образцов рака мочевого пузыря Процесс сбора образцов соответствует больничной этике и подписанному информированному согласию. У пациентов, включенных в эксперимент, должен быть патологоанатомически диагностирован рак мочевого пузыря, а размер образцов опухоли, взятых хирургическим путем, должен быть, насколько это возможно, больше 0,8 см*3 для патологической проверки, органоидной культуры, теста на чувствительность к лекарствам и т. д. Опухолевые ткани следует собирать с учетом времени ишемии тканей и криоконсервации, а время сбора должно быть в пределах 5 минут при удалении тканей из кровообращения человека, чтобы избежать стрессового некроза опухолевых тканей из-за ранней гипоксии.
2. Подготовка органов при раке мочевого пузыря. В процессе обработки тканей для обработки образцов тканей использовались физическое измельчение и расщепление коллагеназой, а обработанные и переваренные органоиды перед культивированием необходимо было фильтровать через клеточные сита различного диаметра, чтобы получить полученные органоиды. единообразные по размеру и способствуют унификации стандартов. Затем их посадили в трехмерный матричный гель и культивировали в специальной среде.
3. Размножение и культивирование органоидов рака мочевого пузыря. Статус роста органоидов наблюдали микроскопически, а иммуногистохимию и иммунофлуоресценцию использовали для характеристики органоидов, подтверждения наличия опухолевых клеток и оценки их морфологии. Карциноидные органы рака мочевого пузыря пассировали и замораживали.

3.1.3 Тестирование чувствительности органоидов опухоли мочевого пузыря к лекарственному средству. После наблюдения за количеством органоидов под микроскопом, чтобы достичь количества, которое можно подвергнуть тестированию на чувствительность к лекарственному средству, органоидную среду аспирировали и выбрасывали. Добавьте в чашку Петри 3 мл пищеварительного раствора, раздвиньте капли, переварите при 37℃, продуйте органоиды и наблюдайте под микроскопом, когда органоиды переварятся в однородную клеточную массу, содержащую 2-3 клетки, добавьте в 2 раза объем пищеварительного раствора для прекращения пищеварения. 1500 об/мин, центрифугируйте клетки в течение 3 минут, а затем аспирируйте и выбросьте супернатант.

Ресуспендируйте клетки со средой, старайтесь не образовывать пузырьков воздуха, разбавьте среду и гель в соотношении 1:1,5, затем инокулируйте смешанный гель из расчета 10 мкл/лунку с помощью одноканальной пипетки в предварительно охлажденные 384-луночные планшеты с 3000 органоидами. на лунку (данную операцию проводили на льду). После смешивания среды с жевательной резинкой в ​​соотношении 1:1 (40 мкл:40 мкл) среду распределяли в 384-луночный планшет по 10 мкл/лунку в качестве контрольной группы. После осторожного постукивания по 384-луночному планшету так, чтобы капли геля лежали ровно на дне лунок, планшет помещали в инкубатор на 30 минут, чтобы дать каплям геля затвердеть, и добавляли предварительно нагретую среду BCOs в количестве 40 мкл. /хорошо. В лунки для тестирования на наркотики, а также в пустые лунки вокруг контрольных лунок добавляли 40 мкл раствора PBS и помещали в инкубатор с диоксидом углерода, чтобы предотвратить испарение жидкости и высыхание капель геля.

Через 3 дня инкубации и наблюдения проводили микроскопическое наблюдение за состоянием образца в каждой лунке при замене жидкости на половину объема.

Разработайте протокол теста на чувствительность к лекарственному средству в соответствии с требованиями следующей таблицы, создайте контрольную группу, контрольную группу и группу тестирования лекарственного средства, лекарственное средство растворяли в соответствии с инструкциями и разбавляли в 4 раза до 6 концентраций органоидной средой соответственно; с помощью люминесцентного анализа жизнеспособности клеток препарат испытывали при различных концентрациях полуингибирующей концентрации (IC50), ингибировании опухолевых клеток (IR), степени отклонения IC50 от концентрации препарата в крови, AUC (площадь под дозой -кривая ответа), критериями оценки результатов анализа лекарственной чувствительности в качестве основных показателей являются IC50 и ИР, а также степень отклонения IC50 от концентрации препарата в крови и результаты AUC в качестве вспомогательной оценки (подробнее см. пожалуйста, обратитесь к 3.10.3), оценить влияние на выживаемость и пролиферацию класса организмов и дать клинические рекомендации по применению препарата.

Таблица 1. Методы группировки тестов на чувствительность к лекарственным средствам. Метод группировки тестов на чувствительность к лекарственным средствам. Пустая группа: без органоидов, без добавления лекарств, 6 повторных лунок на планшет. Контрольная группа: инокулирована органоидами, без дополнительного воздействия лекарств. Группа тестирования на наркотики: инокулирована органоидом, добавьте воздействие препарата. 3.1.4 Комбинированные схемы химиотерапии Таблица 2 Перфузионные химиотерапевтические препараты Гемцитабин □ Пирорубицин □ Эпирубицин □ Сильвестрол □ Адриамицин (доксорубицин) □ 3.2 Место исследования и популяция исследования (источник и критерии исключения) Подробности см. в дизайне исследования 3.3 Переменные исследования (факторы) и измерения Положительный результат контрольную группу не подвергали органоидной культуре, а также тестированию чувствительности к органоидным препаратам.

Остальным пациентам проводили исследование органоидной лекарственной чувствительности в соответствии с протоколом тестирования лекарственной чувствительности с использованием люминесцентного анализа жизнеспособности клеток для определения полуингибирующей концентрации (IC50) препарата, скорости ингибирования (IR) опухолевых клеток, степени отклонения IC50 от концентрации препарата в крови и AUC (площадь под кривой «доза-реакция») при различных концентрациях, а критерии оценки результатов тестирования чувствительности к лекарственному средству основывались на IC50,IR как основных показателях. при отклонении IC50 от концентрации препарата в крови AUC является вспомогательной оценкой (см. 3.10.3). подробнее), чтобы оценить его влияние на выживание и пролиферацию органов класса.

Пациентам, прошедшим органоидную культуру и тестирование на лекарственную чувствительность, согласно опыту клиницистов, проводили инстилляцию химиотерапевтических средств в мочевой пузырь. Пять перфузируемых препаратов включали гемцитабин, пироксикам, эпирубицин, митомицин и адриамицин (доксорубицин). В зависимости от чувствительности их перфузионных препаратов в тесте на чувствительность к органоидным лекарственным средствам они были разделены на группу перфузионных препаратов, чувствительных к органоидам, и группу перфузий нечувствительных к органоидным препаратам. Режим перфузии: включающий индукционную перфузионную химиотерапию (через 4-8 недель после операции, 1 раз в неделю, всего 4 раза) и поддерживающую перфузионную химиотерапию (1 раз в месяц, всего 11 раз).

Схема инфузии БЦЖ: 6 индукционных инфузий, затем 3 ревакцинации один раз каждые 2 недели для поддержания хорошего иммунного ответа, затем 10 поддерживающих инфузий один раз в месяц, всего 19 инфузий в течение 1 года.

Клинические измерения: две группы пациентов в группе перфузии органоид-чувствительного лекарственного средства и группе перфузии органоид-нечувствительного лекарственного средства были прослежены и проанализированы на предмет первичных и вторичных конечных точек исследования, а также был проведен односторонний анализ выживаемости Каплана-Мейера. сравнить различия в частоте рецидивов между двумя группами. Модель доли риска ЦОГ использовалась для анализа соотношения риска рецидива в зависимости от пола, возраста, стадии и степени опухоли пациентов между двумя группами.

3.4 Результаты исследования Критерии RECIST1.1 использовались для оценки эффективности, а критерии Чой и критерии mRECIST использовались в качестве вспомогательных критериев оценки эффективности.

Первичные конечные точки исследования: годовая выживаемость без рецидива опухоли, трехлетняя выживаемость без рецидива опухоли.

Вторичные конечные точки: годовая выживаемость без прогрессирования опухоли, трехлетняя выживаемость без прогрессирования опухоли.

3.5. Последующее наблюдение. Две группы пациентов в группе органоподобной перфузии лекарственного средства и в группе органоподобной нечувствительной перфузии лекарственного средства находились под наблюдением и анализировались на предмет первичных и вторичных конечных точек исследования.

Цистоскопия является методом выбора при обследовании пациентов с НМИРМЖ, и неинвазивной альтернативы цистоскопии не существует. Таким образом, последующее наблюдение за НМИРМЖ должно основываться на регулярной цистоскопии. Если при обследовании обнаружены подозрительные поражения слизистой оболочки мочевого пузыря, для уточнения патологоанатомических данных следует провести биопсию. При необходимости проводят эксфолиативную цитологию мочи, КТ/КТУ или МРТ/МРУ, но ни один из них не может полностью заменить цистоскопию.

План обзора цистоскопии: NMIBC низкого риска проводится один раз через 3 месяца и 12 месяцев после операции в течение 1-го года и один раз в год в дальнейшем до 3-го года; НМИМК промежуточного риска проводится один раз через 3, 6 и 12 месяцев после операции, каждые 6 месяцев на 2-м году жизни и каждый год в дальнейшем до 3-го года; NMIBC высокого риска проводится каждые 3 месяца в течение первых 2 лет и каждые 6 месяцев в дальнейшем до 3-го года.

3.6 Размер выборки Размер выборки в 293 случая был достаточен для выполнения требований по конечным точкам исследования.

Было 73 случая в группе перфузии лекарственного средства, нечувствительной к органоидам, и по 110 случаев в группе перфузии лекарственного средства, чувствительной к органоидам, и в группе положительного контроля.

Основа расчета:

1. Расчет размера выборки для конечной точки исследования показателя выживаемости без опухолей в течение одного года: ожидается, что показатель выживаемости без опухолей в течение одного года составит 73% в группе, получавшей органоид-чувствительные инфузии лекарств, и 50% в группе, нечувствительной к органоидам. группа инфузии лекарственного средства с односторонним α = 0,05, β = 0,2 и соотношением размеров выборки двух групп равно 1 (экспериментальная группа: контрольная группа), размеры выборки двух групп составляют 55 случаев в экспериментальной группе, 55 случаев в контрольной группе и 110 случаев в группе положительного контроля. 55 случаев в контрольной группе, всего 110 случаев, и с учетом 20% выделения вируса, общий размер выборки составит 138 случаев.
2. Рассчитайте размер выборки в соответствии с конечной точкой трехлетнего исследования выживаемости без опухолей: ожидается, что трехлетняя выживаемость без опухолей в группе, получавшей органоид-чувствительные лекарственные препараты, будет равна 63%, а в группе, получавшей трехлетнюю выживаемость без опухолей, она составит 63%. Годовая безопухолевая выживаемость в группе с инфузией органоидно-нечувствительного препарата составит 40%, а одностороннее α = 0,05, β = 0,2, а соотношение размеров выборки двух групп будет равно 1 (экспериментальная группа: контрольная группа). ), так что размеры выборки двух групп будут рассчитаны как 58 случаев в экспериментальной группе, 58 случаев в контрольной группе и 11 случаев в контрольной группе, принимая во внимание выделение 20% и общий размер выборки Потребуется 138 дел. В контрольной группе было 58 случаев, всего 116 случаев, с учетом 20% выделения вируса, общий размер выборки составил 146 случаев.
3. По данным литературы, годовая безопухолевая выживаемость группы положительного контроля составляет 75%, а по данным предварительного теста - годовая безопухолевая выживаемость пациентов с инфузией органоид-чувствительного препарата. ожидается, что группа составит 73%, а пороговое значение не меньшей эффективности - 0,2 (контрольная группа - экспериментальная группа), а соотношение размеров выборки двух групп равно единице с односторонним альфа - 0,05 и бета - 0,2. Размер выборки двух групп рассчитан как 74 случая в группе, в которой вводили органоид-чувствительный препарат, 74 случая в группе положительного контроля и в общей сложности 116 случаев в экспериментальной группе. 74 случая и 74 случая в группе положительного контроля, всего 148 случаев. Учитывая выделение 20%, общий требуемый размер выборки составляет 186 случаев.
4. По результатам литературы трехлетняя безопухолевая выживаемость группы положительного контроля составляет 65%, а по данным предварительного теста трехлетняя безопухолевая выживаемость группы органоид-чувствительного препарата. ожидается, что группа составит 63%, а пороговое значение не меньшей эффективности составит 0,2 (контрольная группа-тестовая группа), а соотношение размеров выборки двух групп будет равно 1, если односторонняя альфа равна 0,05, а бета равна 0,2, размер выборки двух групп рассчитан как 88 случаев в группе, получавшей органоид-чувствительный препарат, и 88 случаев в группе положительного контроля. 88 случаев и 88 случаев в группе положительного контроля, всего 176 случаев и с учетом 20% выделения, общий размер выборки составил 220 случаев.

3.7 Блок-схема методов исследования В этом разделе (изображения) описан технический маршрут проекта. 3.8 Сбор и управление данными Данные собирались путем наблюдения и записи, а исходные данные проверялись по пунктам, чтобы гарантировать их соответствие данным в исходных записях. По окончании эксперимента его передавали статистику для статистического анализа.

3.9 Методы статистического анализа Измеренные данные обычно представляют собой описательную статистику со средним значением, стандартным отклонением, медианой, минимальным и максимальным значениями. Для категориальных переменных описательная статистика будет выполняться в соответствии с частотой и процентом.

Для статистического анализа применялось статистическое программное обеспечение SPSS. Данные измерений выражались в виде среднего значения ± стандартное отклонение (x ± s), t-теста, однофакторного дисперсионного анализа (апостериорный тест, сравнение два на два с использованием метода LSD), для сравнения показателей использовался критерий хи-квадрат, и метод Спирмена использовался для корреляционного анализа. p<0,05 считали, что разница статистически значима.

3.10 Контроль качества 3.10.1 Результаты окрашивания HE и иммуногистохимии органов класса Соответствуют результатам патологоанатомических исследований, что указывает на то, что сконструированные образцы органоидов и опухолей могут лучше сохранять патологическую стабильность.

3.10.2 Органоидный анализ WES или RNA-Seq. Сконструированные образцы органоидов и опухолей могут лучше сохранять генетическую стабильность. 3.10.3 Критерии оценки результатов теста на чувствительность к лекарственному средству Стандарт оценки результатов теста на чувствительность к лекарственному средству имеет IC50,IR в качестве основного показателя, со степенью отклонения между IC50 и концентрацией лекарственного средства в крови, результаты AUC в качестве вспомогательной оценки, когда IC50, IR чувствительные индексы встречаются одновременно, это считается чувствительным; когда невозможно удовлетворить IC50, ИК-индексы одновременно, IC50 в сочетании с IC50 и необходимость концентрации соотношения меньшей степени разницы в результатах чувствительности.

3.10.3.1 Критерии оценки IC50. IC50>20× Не чувствителен

1×<IC50≤20× Низкая чувствительность 0,5×<IC50≤1× Умеренная чувствительность IC50≤0,5× высокочувствительные. К чувствительным относятся сильночувствительные и умеренно чувствительные, к нечувствительным - слабочувствительные и устойчивые.

3.10.3.2 Критерии оценки степени ингибирования опухоли ИР. IR <30% нечувствителен и классифицируется как отрицательный; IR≥30% является чувствительным и классифицируется как положительный, при этом 30%≤IR<50% — низкая чувствительность, 50%≤IR<70% — умеренная чувствительность, а IR≥70% — высокая чувствительность.

Уровень чувствительности = количество случаев с ИР ≥ 30% / общее количество случаев в группе.

3.10.3.3 Расчет степени отклонения IC50 от концентрации в крови: степень отклонения от концентрации в крови относится к степени разницы между значением IC50, полученным в результате теста на чувствительность к лекарственному средству, и концентрацией в крови и рассчитывается как IC50/концентрация в крови.

Чем меньше соотношение, тем эффективнее препарат. 3.10.3.4 Критерии оценки результатов AUC (площадь под кривой зависимости препарата от времени): Конкретный расчет AUC обычно включает интегрирование кривой концентрации от времени.

AUC тесно связана с зависимостью «доза-реакция». На кривой зависимости эффективности лекарственного средства от дозы AUC представляет собой составной показатель общего воздействия лекарственного средства на организм между дозой и ответом. Более высокая AUC обычно связана с лучшим терапевтическим эффектом.

3.11 Обработка органоидов после исследования Органоиды, успешно созданные в этом исследовании, будут равномерно уничтожены и утилизированы после исследования в соответствии с нормами утилизации биомедицинских отходов.