교모세포종 환자의 사이토카인 유발 살해 세포 최적화 (KillGlio)

이 연구의 목적은 교모세포종(GBM) 환자로부터 얻은 CIK 세포의 확장 및 제조 프로토콜을 최적화하고 병용 스테로이드 요법 및 알킬화 화학요법의 사용을 포함한 임상 변수와의 상호 작용을 평가하는 것입니다. 이 연구는 각각 프로젝트의 특정 목표에 해당하는 여러 가설을 다룹니다.

제조 공정 최적화를 위한 1차 가설은 혈액유도제(예: 상업용 인간 혈청 또는 혈소판 유래 용해물)를 추가하면 CIK 세포 생산 효율성을 향상시키고(1차 평가변수: 더 높은 배수 확장) 최종 세포 제품의 품질을 향상시킬 수 있다는 것입니다. (2차 평가변수: 더 높은 CIK 생존력 및 항암 활성). 이 가설은 공개된 데이터에 의해 뒷받침되지만 GBM 환자에서 확장된 CIK 세포에 대해서는 테스트되지 않았습니다.

이 연구의 두 번째 목표는 일반적으로 사용되는 신경종양 치료법이 CIK 세포에 미치는 잠재적인 부작용을 평가하는 것입니다. 구체적으로 우리는 덱사메타손과 같은 스테로이드가 세포 독성을 발휘하고 CIK 세포의 항암 활성을 감소시켜 해로운 효과를 가질 수 있다는 가설을 세웠습니다. 이 가설은 다른 림프구 유형에 대해 입증되었지만 CIK 세포에 대해서는 탐구되지 않았습니다. 독성(중간 독성 용량)에 대한 잠재적 임계값을 설정하면 혈액학적 및 고형 종양 치료에 CIK 세포를 광범위하게 사용하는 것을 고려하여 신경종양학 적용을 넘어서는 귀중한 정보를 제공할 수 있습니다.

또한, 이 연구에서는 CIK 치료에 대한 테모졸로미드의 잠재적인 부정적인 영향을 조사할 것입니다. 알킬화제인 테모졸로마이드(Temozolomide)는 림프구에 대해 차등적인 세포독성을 나타냈으며, T 세포는 NK 세포보다 더 민감합니다. 여기서 가설은 CIK 세포가 CD3+ T 세포 기원으로부터 테모졸로미드에 대한 민감성을 물려받을 수 있다는 것입니다. 이는 더 높은 용량의 테모졸로미드를 포함하는 표준 요법의 보조 단계와 일치하도록 GBM 예정된 CIK 세포 주입에서 CIK 치료법을 평가하는 최근 다기관 3상 임상 시험과 관련이 있습니다.

연구의 두 번째 부분에서는 CIK 세포가 중재하는 것과 같은 HLA 비의존적 면역 감시를 회피하기 위해 GBM이 사용하는 면역 탈출 메커니즘을 탐구하는 데 중점을 둘 것입니다.

이러한 목표를 달성하기 위해 GBM 환자는 건강한 기증자(HD)와 함께 방사선 화학 요법을 시작하기 전에 San Raffaele 병원에 등록됩니다. 각 참가자는 EDTA 튜브에 단일 말초 혈액 샘플(약 10ml)을 제공합니다. 이 연구는 생물학적 샘플 수집을 위한 단일 시점을 갖는 단면 연구로 설계되었습니다. 약 40명의 참가자(환자 20명과 건강한 지원자 20명)가 24개월 동안 등록되어 목표 1(환자 5명 및 HD 5명), 목표 2(환자 5명 및 HD 5명) 및 탐색적 분석( 환자 10명 및 HD 10명). 데이터 분석 및 원고 준비를 위해 추가로 12개월의 비모집 기간이 계획되어 있습니다.

연령, 성별, 관련 동반질환, 약물 사용 등 모든 주제에 대해 역학 데이터가 수집됩니다. GBM 환자의 경우 스테로이드 사용(예/아니오, 복용량 및 시기) 및 수술 치료 시기를 포함하여 추가적인 종양학적 병력 세부 정보가 기록됩니다.

혈액 수집 후, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 Ficoll 구배 원심분리에 의해 분리되고 IFN-γ, OKT3 및 IL-2의 순차적 처리를 통해 21일 동안 시험관 내에서 확장됩니다. 세포는 트립판 블루 염료를 사용하여 수동으로 계산되며, 세포의 표현형은 유세포 분석을 통해 특성화됩니다. CIK 세포의 항암 활성은 신경아교종 세포와 함께 배양하고 탈과립 능력(CD107a 분석)과 유세포 분석으로 검출된 표적 세포에 대한 세포독성 활성을 평가함으로써 평가됩니다.