Optimización de las células asesinas inducidas por citoquinas en pacientes con glioblastoma (KillGlio)

El objetivo de este estudio es optimizar el protocolo de expansión y fabricación de células CIK obtenidas de pacientes con glioblastoma (GBM) y evaluar su interacción con variables clínicas, incluido el uso de terapia con esteroides concomitante y quimioterapia alquilante. El estudio aborda múltiples hipótesis, cada una de las cuales corresponde a un objetivo específico del proyecto.

Para la optimización del proceso de fabricación, la hipótesis principal es que la adición de hemoderivados (como suero humano comercial o lisado derivado de plaquetas) puede mejorar la eficiencia de la producción de células CIK (criterio de valoración principal: mayor expansión) y mejorar la calidad del producto celular final. (criterio de valoración secundario: mayor viabilidad de CIK y actividad anticancerígena). Esta hipótesis está respaldada por datos publicados, pero no se ha probado en células CIK expandidas de pacientes con GBM.

El segundo objetivo del estudio es evaluar los posibles efectos adversos de las terapias neurooncológicas de uso común en las células CIK. Específicamente, planteamos la hipótesis de que los esteroides, como la dexametasona, pueden tener un efecto perjudicial al ejercer citotoxicidad y reducir la actividad anticancerígena de las células CIK. Aunque esta hipótesis se ha demostrado para otros tipos de linfocitos, no se ha explorado para las células CIK. Establecer umbrales potenciales de toxicidad (dosis tóxica media) podría proporcionar información valiosa más allá de las aplicaciones de neurooncología, considerando el uso amplio de células CIK en el tratamiento de tumores sólidos y hematológicos.

Además, el estudio examinará el posible impacto negativo de la temozolomida en la terapia CIK. La temozolomida, un agente alquilante, ha mostrado citotoxicidad diferencial para los linfocitos, siendo las células T más sensibles que las células NK. La hipótesis aquí es que las células CIK pueden heredar la sensibilidad a la temozolomida de sus orígenes de células T CD3+. Esto es particularmente relevante, ya que un reciente ensayo clínico multicéntrico de Fase III que evalúa la terapia CIK en GBM programó infusiones de células CIK para que coincidieran con la fase adyuvante del régimen estándar, que implica una dosis más alta de temozolomida.

La segunda parte del estudio se centrará en explorar los mecanismos de escape inmunológico empleados por GBM para evadir la inmunovigilancia independiente de HLA, como la mediada por las células CIK.

Para lograr estos objetivos, los pacientes con GBM se inscribirán en el Hospital San Raffaele antes del inicio de la radioquimioterapia, junto con donantes sanos (HD) como controles. Cada participante proporcionará una única muestra de sangre periférica (aproximadamente 10 ml) en un tubo con EDTA. El estudio está diseñado como un estudio transversal con un único momento para la recolección de muestras biológicas. Se inscribirán aproximadamente 40 participantes (20 pacientes y 20 voluntarios sanos) durante un período de 24 meses, lo que nos permitirá centrarnos en el objetivo 1 (5 pacientes y 5 HD), el objetivo 2 (5 pacientes y 5 HD) y el análisis exploratorio ( 10 pacientes y 10 HD). Está previsto un período adicional de no contratación de 12 meses para el análisis de datos y la preparación del manuscrito.

Se recopilarán datos epidemiológicos de todos los sujetos, incluida la edad, el sexo, las comorbilidades relevantes y el uso de medicamentos. Para los pacientes con GBM, se registrarán detalles adicionales del historial oncológico, incluido el uso de esteroides (sí/no, dosis y momento) y el momento del tratamiento quirúrgico.

Después de la extracción de sangre, las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislarán mediante centrifugación en gradiente de Ficoll y se expandirán in vitro durante 21 días, con tratamientos secuenciales de IFN-γ, OKT3 e IL-2. Las células se contarán manualmente con tinte azul tripán y su fenotipo se caracterizará mediante citometría de flujo. La actividad anticancerígena de las células CIK se evaluará cocultándolas con células de glioma y evaluando su capacidad de desgranulación (ensayo CD107a) y actividad citotóxica contra células diana, detectada mediante citometría de flujo.