Оптимизация цитокин-индуцированных клеток-киллеров у пациентов с глиобластомой (KillGlio)

Целью данного исследования является оптимизация протокола размножения и производства клеток CIK, полученных от пациентов с глиобластомой (ГБМ), и оценка их взаимодействия с клиническими переменными, включая использование сопутствующей стероидной терапии и алкилирующей химиотерапии. В исследовании рассматривается множество гипотез, каждая из которых соответствует конкретной цели проекта.

Для оптимизации производственного процесса основная гипотеза заключается в том, что добавление гемопроизводных (таких как коммерческая человеческая сыворотка или лизат, полученный из тромбоцитов) может повысить эффективность производства клеток CIK (первичная конечная точка: более высокая кратность расширения) и улучшить качество конечного клеточного продукта. (вторичная конечная точка: более высокая жизнеспособность CIK и противораковая активность). Эта гипотеза подтверждается опубликованными данными, но не была проверена на клетках CIK, полученных от пациентов с GBM.

Вторая цель исследования — оценить потенциальные побочные эффекты обычно используемых нейроонкологических методов лечения на клетки CIK. В частности, мы предполагаем, что стероиды, такие как дексаметазон, могут оказывать вредное воздействие, оказывая цитотоксичность и снижая противораковую активность клеток CIK. Хотя эта гипотеза была продемонстрирована для других типов лимфоцитов, она не исследовалась для клеток CIK. Установление потенциальных порогов токсичности (средней токсической дозы) может предоставить ценную информацию, выходящую за рамки нейроонкологии, учитывая широкое использование клеток CIK при лечении гематологических и солидных опухолей.

Кроме того, в исследовании будет изучено потенциальное негативное влияние темозоломида на терапию CIK. Темозоломид, алкилирующий агент, продемонстрировал дифференциальную цитотоксичность в отношении лимфоцитов, при этом Т-клетки более чувствительны, чем NK-клетки. Гипотеза заключается в том, что клетки CIK могут наследовать чувствительность к темозоломиду от своих CD3+ Т-клеток. Это особенно актуально, поскольку недавнее многоцентровое клиническое исследование III фазы по оценке терапии CIK при GBM запланировало инфузию клеток CIK так, чтобы она совпадала с адъювантной фазой стандартного режима, который включает более высокую дозу темозоломида.

Вторая часть исследования будет сосредоточена на изучении механизмов иммунного ускользания, используемых GBM для уклонения от HLA-независимого иммунонадзора, например, опосредованного клетками CIK.

Для достижения этих целей пациенты с ГБМ будут госпитализированы в больницу Сан-Раффаэле до начала радиохимиотерапии вместе со здоровыми донорами (HD) в качестве контроля. Каждый участник предоставит один образец периферической крови (приблизительно 10 мл) в пробирку с ЭДТА. Исследование спроектировано как перекрестное исследование с единым моментом сбора биологических образцов. Примерно 40 участников (20 пациентов и 20 здоровых добровольцев) будут набраны в течение 24-месячного периода, что позволит нам достичь цели 1 (5 пациентов и 5 HD), цели 2 (5 пациентов и 5 HD) и исследовательского анализа ( 10 пациентов и 10 HD). Для анализа данных и подготовки рукописи запланирован дополнительный период в 12 месяцев без набора персонала.

Эпидемиологические данные будут собраны по всем субъектам, включая возраст, пол, соответствующие сопутствующие заболевания и использование лекарств. Для пациентов с ГБМ будут записаны дополнительные подробности онкологического анамнеза, включая использование стероидов (да/нет, дозировка и время) и время хирургического лечения.

После сбора крови мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) будут выделены центрифугированием в градиенте фиколла и размножены in vitro в течение 21 дня с последовательной обработкой IFN-γ, OKT3 и IL-2. Клетки будут подсчитываться вручную с использованием красителя трипанового синего, а их фенотип будет характеризоваться методом проточной цитометрии. Противораковую активность клеток CIK будут оценивать путем их совместного культивирования с клетками глиомы и оценки их способности к дегрануляции (анализ CD107a) и цитотоксической активности против клеток-мишеней, определяемых с помощью проточной цитометрии.