Optimalizace cytokinem indukovaných zabíječských buněk u pacientů s glioblastomem (KillGlio)

Cílem této studie je optimalizovat expanzní a výrobní protokol CIK buněk získaných od pacientů s glioblastomem (GBM) a posoudit jejich interakci s klinickými proměnnými, včetně použití konkomitantní terapie steroidy a alkylační chemoterapie. Studie se zabývá několika hypotézami, z nichž každá odpovídá konkrétnímu cíli projektu.

Pro optimalizaci výrobního procesu je primární hypotéza, že přidání hemoderivátů (jako je komerční lidské sérum nebo lyzát získaný z krevních destiček) může zvýšit efektivitu produkce buněk CIK (primární cíl: vyšší násobek expanze) a zlepšit kvalitu konečného buněčného produktu. (sekundární cíl: vyšší životaschopnost CIK a protirakovinná aktivita). Tato hypotéza je podpořena publikovanými údaji, ale nebyla testována na buňkách CIK expandovaných od pacientů s GBM.

Druhým cílem studie je vyhodnotit potenciální nepříznivé účinky běžně používaných neuroonkologických terapií na buňky CIK. Konkrétně předpokládáme, že steroidy, jako je dexamethason, mohou mít škodlivý účinek tím, že projevují cytotoxicitu a snižují protirakovinnou aktivitu buněk CIK. Ačkoli tato hypotéza byla prokázána pro jiné typy lymfocytů, nebyla prozkoumána pro buňky CIK. Stanovení potenciálních prahů toxicity (střední toxická dávka) by mohlo poskytnout cenné informace mimo neuroonkologické aplikace, vezmeme-li v úvahu široké použití buněk CIK při léčbě hematologických a solidních nádorů.

Kromě toho bude studie zkoumat potenciální negativní vliv temozolomidu na terapii CIK. Temozolomid, alkylační činidlo, prokázal rozdílnou cytotoxicitu pro lymfocyty, přičemž T buňky jsou citlivější než NK buňky. Hypotézou je, že CIK buňky mohou zdědit citlivost na temozolomid z jejich CD3+ T buněčných původů. To je zvláště důležité, protože nedávná multicentrická klinická studie fáze III hodnotící terapii CIK v GBM plánovaných infuzích CIK buněk, aby se shodovala s adjuvantní fází standardního režimu, který zahrnuje vyšší dávku temozolomidu.

Druhá část studie se zaměří na zkoumání imunitních únikových mechanismů používaných GBM k vyhýbání se HLA-nezávislému imunosurveillanci, jako je ten zprostředkovaný buňkami CIK.

K dosažení těchto cílů budou pacienti s GBM zařazeni do nemocnice San Raffaele před zahájením radiochemoterapie spolu se zdravými dárci (HD) jako kontrolami. Každý účastník poskytne jeden vzorek periferní krve (přibližně 10 ml) ve zkumavce s EDTA. Studie je navržena jako průřezová studie s jediným časovým bodem pro odběr biologického vzorku. Během 24 měsíců bude zapsáno přibližně 40 účastníků (20 pacientů a 20 zdravých dobrovolníků), což nám umožní zaměřit se na Cíl 1 (5 pacientů a 5 HD), Cíl 2 (5 pacientů a 5 HD) a průzkumnou analýzu ( 10 pacientů a 10 HD). Je plánováno další období 12 měsíců bez náboru pro analýzu dat a přípravu rukopisu.

Epidemiologická data budou shromažďována pro všechny subjekty, včetně věku, pohlaví, příslušných komorbidit a užívání léků. U pacientů s GBM budou zaznamenány další podrobnosti o onkologické anamnéze, včetně užívání steroidů (ano/ne, dávkování a načasování) a načasování chirurgické léčby.

Po odběru krve budou mononukleární buňky periferní krve (PBMC) izolovány centrifugací na gradientu Ficoll a expandovány in vitro po dobu 21 dnů, se sekvenčním ošetřením IFN-y, OKT3 a IL-2. Buňky budou ručně spočítány pomocí barviva trypanové modři a jejich fenotyp bude charakterizován průtokovou cytometrií. Protirakovinná aktivita CIK buněk bude hodnocena jejich kokultivací s gliomovými buňkami a vyhodnocením jejich degranulační schopnosti (CD107a test) a cytotoxické aktivity proti cílovým buňkám, jak je detekováno průtokovou cytometrií.