Otimizando células assassinas induzidas por citocinas em pacientes com glioblastoma (KillGlio)

O objetivo deste estudo é otimizar o protocolo de expansão e fabricação de células CIK obtidas de pacientes com glioblastoma (GBM) e avaliar sua interação com variáveis ​​clínicas, incluindo o uso de terapia concomitante com esteroides e quimioterapia alquilante. O estudo aborda múltiplas hipóteses, cada uma correspondendo a um objetivo específico do projeto.

Para a otimização do processo de fabricação, a hipótese principal é que a adição de hemoderivados (como soro humano comercial ou lisado derivado de plaquetas) pode aumentar a eficiência da produção de células CIK (endpoint primário: maior expansão de dobras) e melhorar a qualidade do produto celular final (endpoint secundário: maior viabilidade de CIK e atividade anticancerígena). Esta hipótese é apoiada por dados publicados, mas não foi testada em células CIK expandidas de pacientes com GBM.

O segundo objetivo do estudo é avaliar os potenciais efeitos adversos das terapias neuro-oncológicas comumente usadas nas células CIK. Especificamente, levantamos a hipótese de que os esteróides, como a dexametasona, podem ter um efeito prejudicial ao exercer citotoxicidade e reduzir a atividade anticancerígena das células CIK. Embora esta hipótese tenha sido demonstrada para outros tipos de linfócitos, ela não foi explorada para células CIK. O estabelecimento de limites potenciais de toxicidade (dose tóxica média) poderia fornecer informações valiosas além das aplicações neuro-oncológicas, considerando o amplo uso de células CIK no tratamento de tumores hematológicos e sólidos.

Além disso, o estudo examinará o potencial impacto negativo da temozolomida na terapia CIK. A temozolomida, um agente alquilante, mostrou citotoxicidade diferencial para linfócitos, sendo as células T mais sensíveis que as células NK. A hipótese aqui é que as células CIK podem herdar a sensibilidade à temozolomida de suas origens nas células T CD3+. Isto é particularmente relevante, como um recente ensaio clínico multicêntrico de Fase III que avaliou a terapia CIK em GBM programou infusões de células CIK para coincidir com a fase adjuvante do regime padrão, que envolve uma dosagem mais elevada de temozolomida.

A segunda parte do estudo se concentrará na exploração dos mecanismos de escape imunológico empregados pelo GBM para escapar da imunovigilância independente do HLA, como a mediada pelas células CIK.

Para atingir esses objetivos, os pacientes com GBM serão inscritos no Hospital San Raffaele antes do início da radioquimioterapia, juntamente com doadores saudáveis ​​(HDs) como controles. Cada participante fornecerá uma única amostra de sangue periférico (aproximadamente 10 ml) em tubo de EDTA. O estudo foi desenhado como um estudo transversal com um único momento para coleta de amostras biológicas. Aproximadamente 40 participantes (20 pacientes e 20 voluntários saudáveis) serão inscritos ao longo de um período de 24 meses, permitindo-nos atingir o Objetivo 1 (5 pacientes e 5 HDs), o Objetivo 2 (5 pacientes e 5 HDs) e a análise exploratória ( 10 pacientes e 10 HDs). Está previsto um período adicional de não recrutamento de 12 meses para análise de dados e preparação do manuscrito.

Os dados epidemiológicos serão coletados para todos os indivíduos, incluindo idade, sexo, comorbidades relevantes e uso de medicamentos. Para pacientes com GBM, detalhes adicionais da história oncológica serão registrados, incluindo uso de esteróides (sim/não, dosagem e momento) e momento do tratamento cirúrgico.

Após a coleta de sangue, as células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) serão isoladas por centrifugação em gradiente Ficoll e expandidas in vitro por 21 dias, com tratamentos sequenciais de IFN-γ, OKT3 e IL-2. As células serão contadas manualmente utilizando corante azul de tripano e seu fenótipo será caracterizado por citometria de fluxo. A atividade anticancerígena das células CIK será avaliada co-cultivando-as com células de glioma e avaliando sua capacidade de desgranulação (ensaio CD107a) e atividade citotóxica contra células alvo, conforme detectado por citometria de fluxo.