优化胶质母细胞瘤患者中细胞因子诱导的杀伤细胞 (KillGlio)

本研究的目的是优化从胶质母细胞瘤 (GBM) 患者获得的 CIK 细胞的扩增和制造方案，并评估其与临床变量的相互作用，包括同时使用类固醇治疗和烷化化疗。 该研究提出了多个假设，每个假设都对应于该项目的一个特定目标。

对于制造工艺优化，主要假设是添加血液衍生物（例如商业人血清或血小板衍生裂解物）可以提高 CIK 细胞生产的效率（主要终点：更高的倍数扩增）并提高最终细胞产品的质量（次要终点：更高的 CIK 活力和抗癌活性）。 这一假设得到了已发表数据的支持，但尚未在从 GBM 患者中扩增的 CIK 细胞上进行测试。

该研究的第二个目的是评估常用的神经肿瘤疗法对 CIK 细胞的潜在副作用。 具体来说，我们假设类固醇（如地塞米松）可能通过发挥细胞毒性并降低 CIK 细胞的抗癌活性而产生有害影响。 尽管这一假设已在其他淋巴细胞类型中得到证实，但尚未针对 CIK 细胞进行探索。 考虑到 CIK 细胞在治疗血液肿瘤和实体瘤中的广泛应用，建立潜在的毒性阈值（中位毒性剂量）可以提供神经肿瘤学应用之外的有价值的信息。

此外，该研究还将探讨替莫唑胺对 CIK 治疗的潜在负面影响。 替莫唑胺是一种烷化剂，对淋巴细胞表现出不同的细胞毒性，其中 T 细胞比 NK 细胞更敏感。 这里的假设是 CIK 细胞可能从其 CD3+ T 细胞起源继承了对替莫唑胺的敏感性。 这是特别相关的，因为最近一项评估 GBM 中 CIK 疗法的多中心 III 期临床试验安排 CIK 细胞输注与标准方案的辅助阶段相一致，其中涉及更高剂量的替莫唑胺。

该研究的第二部分将重点探索 GBM 所采用的免疫逃逸机制，以逃避 HLA 独立的免疫监视，如 CIK 细胞介导的免疫监视。

为了实现这些目标，GBM 患者将在放化疗开始前被纳入圣拉斐尔医院，并以健康捐献者 (HD) 为对照组。 每位参与者将在 EDTA 管中提供一份外周血样本（约 10 毫升）。 该研究被设计为一项横断面研究，具有单一时间点的生物样本收集。 将在 24 个月的时间内招募大约 40 名参与者（20 名患者和 20 名健康志愿者），使我们能够实现目标 1（5 名患者和 5 名 HD）、目标 2（5 名患者和 5 名 HD）以及探索性分析（ 10 名患者和 10 名 HD）。 计划额外有 12 个月的非招募期用于数据分析和稿件准备。

将为所有受试者收集流行病学数据，包括年龄、性别、相关合并症和药物使用情况。 对于 GBM 患者，将记录额外的肿瘤病史详细信息，包括类固醇的使用（是/否、剂量和时间）和手术治疗时间。

采血后，通过 Ficoll 梯度离心分离外周血单核细胞 (PBMC)，并在体外扩增 21 天，并依次进行 IFN-γ、OKT3 和 IL-2 处理。 将使用台盼蓝染料对细胞进行手动计数，并通过流式细胞术表征其表型。 CIK细胞的抗癌活性将通过将其与神经胶质瘤细胞共培养并评估其脱粒能力（CD107a测定）和针对靶细胞的细胞毒活性（通过流式细胞术检测）来评估。