Optimering af cytokininducerede dræberceller hos glioblastompatienter (KillGlio)

Formålet med denne undersøgelse er at optimere udvidelsen og fremstillingsprotokollen for CIK-celler opnået fra patienter med glioblastom (GBM) og at vurdere deres interaktion med kliniske variabler, herunder brugen af ​​samtidig steroidbehandling og alkylerende kemoterapi. Undersøgelsen behandler flere hypoteser, der hver svarer til et specifikt formål med projektet.

Til optimering af fremstillingsprocessen er den primære hypotese, at tilføjelse af hæmoderivater (såsom kommercielt humant serum eller blodpladeafledt lysat) kan øge effektiviteten af ​​CIK-celleproduktion (primært endepunkt: højere foldekspansion) og forbedre kvaliteten af ​​det endelige celleprodukt (sekundært endepunkt: højere CIK-levedygtighed og anticanceraktivitet). Denne hypotese understøttes af publicerede data, men er ikke blevet testet på CIK-celler ekspanderet fra GBM-patienter.

Det andet formål med undersøgelsen er at evaluere de potentielle negative virkninger af almindeligt anvendte neuro-onkologiske terapier på CIK-celler. Specifikt antager vi, at steroider, ligesom dexamethason, kan have en skadelig virkning ved at udøve cytotoksicitet og reducere anticanceraktiviteten af ​​CIK-celler. Selvom denne hypotese er blevet demonstreret for andre lymfocyttyper, er den ikke blevet undersøgt for CIK-celler. Etablering af potentielle tærskler for toksicitet (median toksisk dosis) kunne give værdifuld information ud over neuro-onkologiske applikationer, i betragtning af den brede anvendelse af CIK-celler til behandling af hæmatologiske og solide tumorer.

Derudover vil undersøgelsen undersøge den potentielle negative indvirkning af temozolomid på CIK-terapi. Temozolomid, et alkyleringsmiddel, har vist differentiel cytotoksicitet for lymfocytter, hvor T-celler er mere følsomme end NK-celler. Hypotesen her er, at CIK-celler kan arve følsomheden over for temozolomid fra deres CD3+ T-celleoprindelse. Dette er særligt relevant, da et nyligt multicenter fase III klinisk forsøg, der evaluerer CIK-terapi i GBM planlagte CIK-celleinfusioner, så det falder sammen med den adjuvante fase af standardregimet, som involverer en højere dosis af temozolomid.

Den anden del af undersøgelsen vil fokusere på at udforske de immunflugtsmekanismer, der anvendes af GBM til at unddrage sig HLA-uafhængig immunovervågning, som den, der medieres af CIK-celler.

For at nå disse mål vil GBM-patienter blive indskrevet på San Raffaele Hospital før starten af ​​radiokemoterapi, sammen med raske donorer (HD'er) som kontroller. Hver deltager giver en enkelt perifer blodprøve (ca. 10 ml) i et EDTA-rør. Undersøgelsen er designet som en tværsnitsundersøgelse med et enkelt tidspunkt for biologisk prøveindsamling. Ca. 40 deltagere (20 patienter og 20 raske frivillige) vil blive tilmeldt over en 24-måneders periode, hvilket giver os mulighed for at målrette mål 1 (5 patienter og 5 HD'er), Mål 2 (5 patienter og 5 HD'er) og den eksplorative analyse ( 10 patienter og 10 HD'er). Der er planlagt en yderligere ikke-rekrutteringsperiode på 12 måneder til dataanalyse og manuskriptforberedelse.

Epidemiologiske data vil blive indsamlet for alle emner, inklusive alder, køn, relevante komorbiditeter og medicinbrug. For GBM-patienter vil der blive registreret yderligere onkologiske historiedetaljer, herunder steroidbrug (ja/nej, dosering og timing) og timing af kirurgisk behandling.

Efter blodopsamling vil perifere blodmononukleære celler (PBMC'er) blive isoleret ved Ficoll-gradientcentrifugering og ekspanderet in vitro i 21 dage med sekventielle behandlinger af IFN-y, OKT3 og IL-2. Celler tælles manuelt ved hjælp af trypanblåt farvestof, og deres fænotype vil blive karakteriseret ved flowcytometri. Anticanceraktiviteten af ​​CIK-celler vil blive vurderet ved at dyrke dem sammen med gliomceller og evaluere deres degranuleringsevne (CD107a-assay) og cytotoksiske aktivitet mod målceller, som påvist ved flowcytometri.