Optimisation des cellules tueuses induites par les cytokines chez les patients atteints de glioblastome (KillGlio)

Le but de cette étude est d'optimiser le protocole d'expansion et de fabrication de cellules CIK obtenues à partir de patients atteints de glioblastome (GBM) et d'évaluer leur interaction avec des variables cliniques, y compris l'utilisation concomitante d'une corticothérapie et d'une chimiothérapie alkylante. L'étude aborde plusieurs hypothèses, chacune correspondant à un objectif spécifique du projet.

Pour l'optimisation du processus de fabrication, l'hypothèse principale est que l'ajout d'hémodérivés (tels que le sérum humain commercial ou le lysat dérivé des plaquettes) peut améliorer l'efficacité de la production de cellules CIK (critère principal : expansion plus élevée) et améliorer la qualité du produit cellulaire final. (critère secondaire : viabilité du CIK et activité anticancéreuse plus élevées). Cette hypothèse est étayée par les données publiées mais n'a pas été testée sur des cellules CIK développées à partir de patients atteints de GBM.

Le deuxième objectif de l'étude est d'évaluer les effets indésirables potentiels des thérapies neuro-oncologiques couramment utilisées sur les cellules CIK. Plus précisément, nous émettons l’hypothèse que les stéroïdes, comme la dexaméthasone, pourraient avoir un effet néfaste en exerçant une cytotoxicité et en réduisant l’activité anticancéreuse des cellules CIK. Bien que cette hypothèse ait été démontrée pour d’autres types de lymphocytes, elle n’a pas été explorée pour les cellules CIK. L’établissement de seuils potentiels de toxicité (dose toxique médiane) pourrait fournir des informations précieuses au-delà des applications en neuro-oncologie, compte tenu de l’utilisation généralisée des cellules CIK dans le traitement des tumeurs hématologiques et solides.

De plus, l'étude examinera l'impact négatif potentiel du témozolomide sur le traitement CIK. Le témozolomide, un agent alkylant, a montré une cytotoxicité différentielle pour les lymphocytes, les cellules T étant plus sensibles que les cellules NK. L'hypothèse ici est que les cellules CIK pourraient hériter de la sensibilité au témozolomide de leurs origines cellulaires T CD3+. Ceci est particulièrement pertinent, car un récent essai clinique multicentrique de phase III évaluant le traitement CIK dans le GBM a programmé des perfusions de cellules CIK pour coïncider avec la phase adjuvante du régime standard, qui implique une dose plus élevée de témozolomide.

La deuxième partie de l'étude se concentrera sur l'exploration des mécanismes d'échappement immunitaire utilisés par le GBM pour échapper à l'immunosurveillance indépendante de HLA, comme celle médiée par les cellules CIK.

Pour atteindre ces objectifs, les patients atteints de GBM seront inscrits à l'hôpital San Raffaele avant le début de la radiochimiothérapie, avec des donneurs sains (HD) comme témoins. Chaque participant fournira un seul échantillon de sang périphérique (environ 10 ml) dans un tube EDTA. L'étude est conçue comme une étude transversale avec un seul moment pour la collecte d'échantillons biologiques. Environ 40 participants (20 patients et 20 volontaires sains) seront recrutés sur une période de 24 mois, nous permettant de cibler l'objectif 1 (5 patients et 5 HD), l'objectif 2 (5 patients et 5 HD) et l'analyse exploratoire ( 10 patients et 10 HD). Une période supplémentaire de non-recrutement de 12 mois est prévue pour l'analyse des données et la préparation des manuscrits.

Des données épidémiologiques seront collectées pour tous les sujets, y compris l'âge, le sexe, les comorbidités pertinentes et l'utilisation de médicaments. Pour les patients atteints de GBM, des détails supplémentaires sur les antécédents oncologiques seront enregistrés, y compris l'utilisation de stéroïdes (oui/non, posologie et calendrier) et le calendrier du traitement chirurgical.

Après le prélèvement sanguin, les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) seront isolées par centrifugation sur gradient de Ficoll et développées in vitro pendant 21 jours, avec des traitements séquentiels d'IFN-γ, OKT3 et IL-2. Les cellules seront comptées manuellement à l'aide du colorant bleu trypan et leur phénotype sera caractérisé par cytométrie en flux. L'activité anticancéreuse des cellules CIK sera évaluée en les co-culturant avec des cellules de gliome et en évaluant leur capacité de dégranulation (test CD107a) et leur activité cytotoxique contre les cellules cibles, telles que détectées par cytométrie en flux.