Optimalisatie van door cytokine geïnduceerde killercellen bij glioblastoompatiënten (KillGlio)

Het doel van deze studie is om het uitbreidings- en productieprotocol van CIK-cellen verkregen van patiënten met glioblastoom (GBM) te optimaliseren en hun interactie met klinische variabelen te beoordelen, waaronder het gebruik van gelijktijdige behandeling met steroïden en alkylerende chemotherapie. De studie behandelt meerdere hypothesen, die elk overeenkomen met een specifiek doel van het project.

Voor de optimalisatie van het productieproces is de primaire hypothese dat het toevoegen van hemodirivaten (zoals commercieel menselijk serum of van bloedplaatjes afgeleid lysaat) de efficiëntie van de CIK-celproductie kan verbeteren (primair eindpunt: hogere vouwexpansie) en de kwaliteit van het uiteindelijke celproduct kan verbeteren. (secundair eindpunt: hogere CIK-levensvatbaarheid en antikankeractiviteit). Deze hypothese wordt ondersteund door gepubliceerde gegevens, maar is niet getest op CIK-cellen die zijn geëxpandeerd bij GBM-patiënten.

Het tweede doel van de studie is het evalueren van de mogelijke nadelige effecten van veelgebruikte neuro-oncologische therapieën op CIK-cellen. Concreet veronderstellen we dat steroïden, zoals dexamethason, een schadelijk effect kunnen hebben door cytotoxiciteit uit te oefenen en de antikankeractiviteit van CIK-cellen te verminderen. Hoewel deze hypothese is aangetoond voor andere typen lymfocyten, is deze niet onderzocht voor CIK-cellen. Het vaststellen van potentiële drempels voor toxiciteit (mediane toxische dosis) zou waardevolle informatie kunnen opleveren die verder gaat dan neuro-oncologische toepassingen, gezien het brede gebruik van CIK-cellen bij de behandeling van hematologische en solide tumoren.

Bovendien zal de studie de potentiële negatieve impact van temozolomide op de CIK-therapie onderzoeken. Temozolomide, een alkyleringsmiddel, heeft een verschillende cytotoxiciteit voor lymfocyten laten zien, waarbij T-cellen gevoeliger zijn dan NK-cellen. De hypothese hier is dat CIK-cellen de gevoeligheid voor temozolomide kunnen erven van hun CD3+ T-celoorsprong. Dit is met name relevant omdat een recent multicenter fase III klinisch onderzoek waarin CIK-therapie bij GBM-geplande CIK-celinfusies werd geëvalueerd, samenviel met de adjuvante fase van het standaardregime, dat een hogere dosering temozolomide omvat.

Het tweede deel van de studie zal zich richten op het onderzoeken van de immuunontsnappingsmechanismen die door GBM worden gebruikt om HLA-onafhankelijke immunosurveillance te omzeilen, zoals die gemedieerd door CIK-cellen.

Om deze doelstellingen te bereiken zullen GBM-patiënten vóór aanvang van de radiochemotherapie in het San Raffaele-ziekenhuis worden ingeschreven, samen met gezonde donoren (HD's) als controlegroep. Elke deelnemer levert één perifeer bloedmonster (ongeveer 10 ml) in een EDTA-buisje. Het onderzoek is opgezet als een cross-sectioneel onderzoek met één enkel tijdstip voor het verzamelen van biologische monsters. Ongeveer 40 deelnemers (20 patiënten en 20 gezonde vrijwilligers) zullen worden ingeschreven over een periode van 24 maanden, waardoor we ons kunnen richten op doelstelling 1 (5 patiënten en 5 HD’s), doelstelling 2 (5 patiënten en 5 HD’s) en de verkennende analyse ( 10 patiënten en 10 HD’s). Er is een extra niet-rekruteringsperiode van twaalf maanden gepland voor data-analyse en manuscriptvoorbereiding.

Er zullen epidemiologische gegevens worden verzameld voor alle onderwerpen, inclusief leeftijd, geslacht, relevante comorbiditeiten en medicatiegebruik. Voor GBM-patiënten zullen aanvullende gegevens over de oncologische geschiedenis worden vastgelegd, waaronder het gebruik van steroïden (ja/nee, dosering en tijdstip) en het tijdstip van de chirurgische behandeling.

Na de bloedafname zullen perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's) worden geïsoleerd door middel van Ficoll-gradiëntcentrifugatie en in vitro worden geëxpandeerd gedurende 21 dagen, met opeenvolgende behandelingen van IFN-γ, OKT3 en IL-2. Cellen zullen handmatig worden geteld met behulp van trypaanblauwe kleurstof, en hun fenotype zal worden gekarakteriseerd door flowcytometrie. De antikankeractiviteit van CIK-cellen zal worden beoordeeld door ze samen met glioomcellen te kweken en hun degranulatievermogen (CD107a-test) en cytotoxische activiteit tegen doelcellen te evalueren, zoals gedetecteerd door flowcytometrie.