Optimalisering av cytokininduserte drepeceller hos glioblastompasienter (KillGlio)

Målet med denne studien er å optimalisere utvidelsen og produksjonsprotokollen for CIK-celler oppnådd fra pasienter med glioblastom (GBM) og å vurdere deres interaksjon med kliniske variabler, inkludert bruk av samtidig steroidbehandling og alkylerende kjemoterapi. Studien tar for seg flere hypoteser, som hver tilsvarer et spesifikt mål med prosjektet.

For optimalisering av produksjonsprosessen er den primære hypotesen at tilsetning av hemoderivater (som kommersielt humant serum eller blodplate-avledet lysat) kan øke effektiviteten av CIK-celleproduksjon (primært endepunkt: høyere fold ekspansjon) og forbedre kvaliteten på det endelige celleproduktet (sekundært endepunkt: høyere CIK-levedyktighet og antikreftaktivitet). Denne hypotesen støttes av publiserte data, men har ikke blitt testet på CIK-celler utvidet fra GBM-pasienter.

Det andre målet med studien er å evaluere de potensielle negative effektene av vanlig brukte nevro-onkologiske terapier på CIK-celler. Spesifikt antar vi at steroider, som deksametason, kan ha en skadelig effekt ved å utøve cytotoksisitet og redusere antikreftaktiviteten til CIK-celler. Selv om denne hypotesen har blitt demonstrert for andre lymfocytttyper, har den ikke blitt utforsket for CIK-celler. Etablering av potensielle terskler for toksisitet (median toksisk dose) kan gi verdifull informasjon utover nevro-onkologiske applikasjoner, tatt i betraktning den brede bruken av CIK-celler i behandling av hematologiske og solide svulster.

I tillegg vil studien undersøke den potensielle negative effekten av temozolomid på CIK-terapi. Temozolomide, et alkyleringsmiddel, har vist differensiell cytotoksisitet for lymfocytter, med T-celler som er mer følsomme enn NK-celler. Hypotesen her er at CIK-celler kan arve følsomheten for temozolomid fra deres CD3+ T-celleopprinnelse. Dette er spesielt relevant, ettersom en nylig multisenter fase III klinisk studie som evaluerer CIK-terapi i GBM planlagte CIK-celleinfusjoner for å falle sammen med adjuvantfasen til standardregimet, som involverer en høyere dose temozolomid.

Den andre delen av studien vil fokusere på å utforske immunfluktmekanismene som brukes av GBM for å unngå HLA-uavhengig immunovervåking, som den som medieres av CIK-celler.

For å nå disse målene vil GBM-pasienter bli registrert ved San Raffaele Hospital før oppstart av radiokjemoterapi, sammen med friske donorer (HD) som kontroller. Hver deltaker vil gi en enkelt perifer blodprøve (ca. 10 ml) i et EDTA-rør. Studien er utformet som en tverrsnittsstudie med et enkelt tidspunkt for biologisk prøveinnsamling. Omtrent 40 deltakere (20 pasienter og 20 friske frivillige) vil bli registrert over en 24-måneders periode, noe som lar oss målrette mål 1 (5 pasienter og 5 HDer), Mål 2 (5 pasienter og 5 HDer), og den utforskende analysen ( 10 pasienter og 10 HD). En ekstra ikke-rekrutteringstid på 12 måneder er planlagt for dataanalyse og manuskriptutarbeidelse.

Epidemiologiske data vil bli samlet inn for alle emner, inkludert alder, kjønn, relevante komorbiditeter og medisinbruk. For GBM-pasienter vil ytterligere onkologisk historie bli registrert, inkludert steroidbruk (ja/nei, dosering og tidspunkt) og tidspunkt for kirurgisk behandling.

Etter blodinnsamling vil perifere blodmononukleære celler (PBMC) bli isolert ved Ficoll-gradientsentrifugering og utvidet in vitro i 21 dager, med sekvensielle behandlinger av IFN-y, OKT3 og IL-2. Celler vil telles manuelt ved hjelp av trypanblått fargestoff, og deres fenotype vil bli karakterisert ved flowcytometri. Antikreftaktiviteten til CIK-celler vil bli vurdert ved å dyrke dem sammen med gliomceller og evaluere deres degranuleringsevne (CD107a-analyse) og cytotoksiske aktivitet mot målceller, som påvist ved flowcytometri.