Ottimizzazione delle cellule killer indotte da citochine nei pazienti con glioblastoma (KillGlio)

Lo scopo di questo studio è ottimizzare il protocollo di espansione e produzione delle cellule CIK ottenute da pazienti con glioblastoma (GBM) e valutare la loro interazione con variabili cliniche, incluso l'uso concomitante di terapia steroidea e chemioterapia alchilante. Lo studio affronta molteplici ipotesi, ciascuna corrispondente a uno scopo specifico del progetto.

Per l'ottimizzazione del processo di produzione, l'ipotesi primaria è che l'aggiunta di emoderivati ​​(come siero umano commerciale o lisato derivato dalle piastrine) possa aumentare l'efficienza della produzione di cellule CIK (endpoint primario: maggiore espansione delle pieghe) e migliorare la qualità del prodotto cellulare finale (endpoint secondario: maggiore vitalità della CIK e attività antitumorale). Questa ipotesi è supportata da dati pubblicati ma non è stata testata su cellule CIK espanse da pazienti con GBM.

Il secondo obiettivo dello studio è valutare i potenziali effetti avversi delle terapie neuro-oncologiche comunemente utilizzate sulle cellule CIK. Nello specifico, ipotizziamo che gli steroidi, come il desametasone, possano avere un effetto dannoso esercitando citotossicità e riducendo l'attività antitumorale delle cellule CIK. Sebbene questa ipotesi sia stata dimostrata per altri tipi di linfociti, non è stata esplorata per le cellule CIK. Stabilire potenziali soglie di tossicità (dose tossica media) potrebbe fornire informazioni preziose oltre le applicazioni neuro-oncologiche, considerando l’ampio utilizzo delle cellule CIK nel trattamento dei tumori ematologici e solidi.

Inoltre, lo studio esaminerà il potenziale impatto negativo della temozolomide sulla terapia CIK. La temozolomide, un agente alchilante, ha mostrato una citotossicità differenziale per i linfociti, con le cellule T più sensibili delle cellule NK. L'ipotesi qui è che le cellule CIK possano ereditare la sensibilità alla temozolomide dalle loro origini di cellule T CD3+. Ciò è particolarmente rilevante, poiché un recente studio clinico multicentrico di Fase III che ha valutato la terapia CIK nel GBM ha programmato infusioni di cellule CIK in concomitanza con la fase adiuvante del regime standard, che prevede un dosaggio più elevato di temozolomide.

La seconda parte dello studio si concentrerà sull'esplorazione dei meccanismi di fuga immunitaria utilizzati dal GBM per eludere l'immunosorveglianza HLA-indipendente, come quella mediata dalle cellule CIK.

Per raggiungere questi obiettivi, i pazienti affetti da GBM verranno arruolati presso l'Ospedale San Raffaele prima dell'inizio della radiochemioterapia, insieme a donatori sani (HD) come controlli. Ciascun partecipante fornirà un singolo campione di sangue periferico (circa 10 ml) in una provetta EDTA. Lo studio è concepito come uno studio trasversale con un unico punto temporale per la raccolta di campioni biologici. Verranno arruolati circa 40 partecipanti (20 pazienti e 20 volontari sani) in un periodo di 24 mesi, consentendoci di raggiungere l'Obiettivo 1 (5 pazienti e 5 HD), l'Obiettivo 2 (5 pazienti e 5 HD) e l'analisi esplorativa ( 10 pazienti e 10 HD). È previsto un ulteriore periodo di non reclutamento di 12 mesi per l'analisi dei dati e la preparazione del manoscritto.

Verranno raccolti dati epidemiologici per tutti i soggetti, inclusi età, sesso, comorbilità rilevanti e utilizzo di farmaci. Per i pazienti con GBM, verranno registrati ulteriori dettagli sull'anamnesi oncologica, incluso l'uso di steroidi (sì/no, dosaggio e tempistica) e i tempi del trattamento chirurgico.

Dopo la raccolta del sangue, le cellule mononucleari del sangue periferico (PBMC) verranno isolate mediante centrifugazione su gradiente Ficoll ed espanse in vitro per 21 giorni, con trattamenti sequenziali di IFN-γ, OKT3 e IL-2. Le cellule verranno contate manualmente utilizzando il colorante trypan blue e il loro fenotipo sarà caratterizzato mediante citometria a flusso. L'attività antitumorale delle cellule CIK sarà valutata co-coltivandole con cellule di glioma e valutando la loro capacità di degranulazione (saggio CD107a) e l'attività citotossica contro le cellule bersaglio, come rilevato mediante citometria a flusso.