Sytokiinien aiheuttamien tappajasolujen optimointi glioblastoomapotilailla (KillGlio)

Tämän tutkimuksen tavoitteena on optimoida glioblastoomapotilailta (GBM) saatujen CIK-solujen laajennus- ja valmistusprotokolla ja arvioida niiden vuorovaikutusta kliinisten muuttujien kanssa, mukaan lukien samanaikainen steroidihoidon ja alkyloivan kemoterapian käyttö. Tutkimus käsittelee useita hypoteeseja, joista jokainen vastaa hankkeen tiettyä tavoitetta.

Valmistusprosessin optimoinnissa ensisijainen hypoteesi on, että hemojohdannaisten (kuten kaupallisen ihmisseerumin tai verihiutaleperäisen lysaatin) lisääminen voi parantaa CIK-solutuotannon tehokkuutta (ensisijainen päätepiste: suurempi kertainen laajeneminen) ja parantaa lopullisen solutuotteen laatua. (toissijainen päätetapahtuma: korkeampi CIK-elinkyky ja syövän vastainen aktiivisuus). Tätä hypoteesia tukevat julkaistut tiedot, mutta sitä ei ole testattu GBM-potilaista kasvatetuilla CIK-soluilla.

Tutkimuksen toisena tavoitteena on arvioida yleisesti käytettyjen neuroonkologian hoitojen mahdollisia haittavaikutuksia CIK-soluihin. Erityisesti oletamme, että steroideilla, kuten deksametasonilla, voi olla haitallinen vaikutus, koska ne aiheuttavat sytotoksisuutta ja vähentävät CIK-solujen syövänvastaista aktiivisuutta. Vaikka tämä hypoteesi on osoitettu muille lymfosyyttityypeille, sitä ei ole tutkittu CIK-solujen osalta. Mahdollisten myrkyllisyyden kynnysarvojen määrittäminen (mediaani toksinen annos) voisi tarjota arvokasta tietoa neuroonkologian sovellusten lisäksi, kun otetaan huomioon CIK-solujen laaja käyttö hematologisten ja kiinteiden kasvainten hoidossa.

Lisäksi tutkimuksessa tarkastellaan temotsolomidin mahdollista negatiivista vaikutusta CIK-hoitoon. Temotsolomidi, alkyloiva aine, on osoittanut erilaista sytotoksisuutta lymfosyyteille, ja T-solut ovat herkempiä kuin NK-solut. Tässä oletetaan, että CIK-solut voivat periä herkkyyden temotsolomidille CD3+-T-solualkuperäistään. Tämä on erityisen olennaista, koska äskettäin tehdyssä monikeskustutkimuksessa, vaiheen III kliinisessä tutkimuksessa, jossa arvioitiin CIK-hoitoa GBM-suunniteltujen CIK-soluinfuusioiden yhteydessä, niin että se osuu samaan aikaan tavanomaisen hoito-ohjelman adjuvanttivaiheen kanssa, joka sisältää suuremman temotsolomidin annoksen.

Tutkimuksen toinen osa keskittyy GBM:n käyttämien immuunipakomekanismien tutkimiseen HLA-riippumattoman immuunivalvonnan, kuten CIK-solujen välittämän, välttämiseksi.

Näiden tavoitteiden saavuttamiseksi GBM-potilaat rekisteröidään San Raffaelen sairaalaan ennen sädekemoterapian aloittamista sekä terveet luovuttajat (HD:t) kontrolleina. Jokainen osallistuja toimittaa yhden ääreisveren (noin 10 ml) EDTA-putkeen. Tutkimus on suunniteltu poikkileikkaustutkimukseksi, jossa on yksi aikapiste biologisten näytteiden keräämiselle. Noin 40 osallistujaa (20 potilasta ja 20 tervettä vapaaehtoista) otetaan mukaan 24 kuukauden ajanjaksolle, joten voimme kohdistaa tavoitteen 1 (5 potilasta ja 5 HD:tä), tavoitteeseen 2 (5 potilasta ja 5 HD:tä) ja tutkivaan analyysiin ( 10 potilasta ja 10 HD:tä). Aineiston analysointia ja käsikirjoituksen valmistelua varten on suunniteltu 12 kuukauden lisärekrytointikielto.

Kaikista koehenkilöistä kerätään epidemiologisia tietoja, mukaan lukien ikä, sukupuoli, asiaankuuluvat liitännäissairaudet ja lääkkeiden käyttö. GBM-potilaille tallennetaan lisää onkologisia historiatietoja, mukaan lukien steroidien käyttö (kyllä/ei, annostus ja ajoitus) ja kirurgisen hoidon ajoitus.

Verenkeräyksen jälkeen perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) eristetään Ficoll-gradienttisentrifugoinnilla ja niitä kasvatetaan in vitro 21 päivän ajan IFN-y:n, OKT3:n ja IL-2:n peräkkäisillä käsittelyillä. Solut lasketaan manuaalisesti käyttämällä trypaaninsinistä väriainetta, ja niiden fenotyyppi karakterisoidaan virtaussytometrian avulla. CIK-solujen syövänvastainen aktiivisuus arvioidaan viljelemällä niitä yhdessä glioomasolujen kanssa ja arvioimalla niiden degranulaatiokyky (CD107a-määritys) ja sytotoksinen aktiivisuus kohdesoluja vastaan, kuten virtaussytometrialla havaitaan.