Optimering av cytokininducerade mördarceller hos glioblastompatienter (KillGlio)

Syftet med denna studie är att optimera expansions- och tillverkningsprotokollet för CIK-celler erhållna från patienter med glioblastom (GBM) och att bedöma deras interaktion med kliniska variabler, inklusive användning av samtidig steroidbehandling och alkylerande kemoterapi. Studien tar upp flera hypoteser som var och en motsvarar ett specifikt syfte med projektet.

För optimering av tillverkningsprocessen är den primära hypotesen att tillsats av hemoderivat (såsom kommersiellt humant serum eller blodplättshärlett lysat) kan förbättra effektiviteten av CIK-cellproduktion (primärt slutpunkt: högre veckexpansion) och förbättra kvaliteten på den slutliga cellprodukten (sekundärt effektmått: högre CIK-viabilitet och anticanceraktivitet). Denna hypotes stöds av publicerade data men har inte testats på CIK-celler expanderade från GBM-patienter.

Det andra syftet med studien är att utvärdera de potentiella negativa effekterna av vanliga neuro-onkologiska terapier på CIK-celler. Specifikt antar vi att steroider, som dexametason, kan ha en skadlig effekt genom att utöva cytotoxicitet och minska anticanceraktiviteten hos CIK-celler. Även om denna hypotes har visats för andra lymfocyttyper, har den inte undersökts för CIK-celler. Att fastställa potentiella trösklar för toxicitet (toxisk mediandos) skulle kunna ge värdefull information bortom neuroonkologiska tillämpningar, med tanke på den breda användningen av CIK-celler vid behandling av hematologiska och solida tumörer.

Dessutom kommer studien att undersöka den potentiella negativa effekten av temozolomid på CIK-terapi. Temozolomide, ett alkylerande medel, har visat differentiell cytotoxicitet för lymfocyter, där T-celler är känsligare än NK-celler. Hypotesen här är att CIK-celler kan ärva känsligheten för temozolomid från deras CD3+ T-cellsursprung. Detta är särskilt relevant, eftersom en nyligen genomförd klinisk fas III-studie med multicenter som utvärderar CIK-terapi i GBM-schemalagda CIK-cellinfusioner för att sammanfalla med den adjuvanta fasen av standardregimen, som involverar en högre dos av temozolomid.

Den andra delen av studien kommer att fokusera på att utforska de immunflyktmekanismer som används av GBM för att undvika HLA-oberoende immunövervakning, som den som medieras av CIK-celler.

För att uppnå dessa mål kommer GBM-patienter att skrivas in på San Raffaele-sjukhuset innan radiokemoterapin påbörjas, tillsammans med friska donatorer (HD) som kontroller. Varje deltagare kommer att ge ett enda perifert blodprov (cirka 10 ml) i ett EDTA-rör. Studien är utformad som en tvärsnittsstudie med en enda tidpunkt för biologisk provtagning. Cirka 40 deltagare (20 patienter och 20 friska frivilliga) kommer att registreras under en 24-månadersperiod, vilket gör att vi kan inrikta oss på Mål 1 (5 patienter och 5 HD), Mål 2 (5 patienter och 5 HD) och den explorativa analysen ( 10 patienter och 10 HD). Ytterligare en icke-rekryteringsperiod på 12 månader planeras för dataanalys och manuskriptberedning.

Epidemiologiska data kommer att samlas in för alla ämnen, inklusive ålder, kön, relevanta komorbiditeter och läkemedelsanvändning. För GBM-patienter kommer ytterligare onkologisk historia att registreras, inklusive steroidanvändning (ja/nej, dosering och tidpunkt) och tidpunkt för kirurgisk behandling.

Efter blodinsamling kommer perifera blodmononukleära celler (PBMC) att isoleras genom Ficoll-gradientcentrifugering och expanderas in vitro i 21 dagar, med sekventiella behandlingar av IFN-y, OKT3 och IL-2. Celler kommer att räknas manuellt med trypanblått färgämne, och deras fenotyp kommer att karakteriseras av flödescytometri. Anticanceraktiviteten hos CIK-celler kommer att utvärderas genom att samodla dem med gliomceller och utvärdera deras degranuleringsförmåga (CD107a-analys) och cytotoxiska aktivitet mot målceller, som detekteras med flödescytometri.