Optymalizacja komórek zabójczych indukowanych przez cytokiny u pacjentów z glejakiem wielopostaciowym (KillGlio)

Celem tego badania jest optymalizacja protokołu ekspansji i wytwarzania komórek CIK uzyskanych od pacjentów z glejakiem wielopostaciowym (GBM) oraz ocena ich interakcji ze zmiennymi klinicznymi, w tym stosowaniem jednoczesnej terapii steroidowej i chemioterapii alkilującej. W badaniu postawiono wiele hipotez, z których każda odpowiadała konkretnemu celowi projektu.

W przypadku optymalizacji procesu produkcyjnego podstawowa hipoteza jest taka, że ​​dodanie hemopochodnych (takich jak dostępna w handlu surowica ludzka lub lizat pochodzenia płytkowego) może zwiększyć wydajność produkcji komórek CIK (główny punkt końcowy: większa krotność ekspansji) i poprawić jakość końcowego produktu komórkowego (drugorzędowy punkt końcowy: wyższa żywotność CIK i aktywność przeciwnowotworowa). Hipoteza ta jest poparta opublikowanymi danymi, ale nie została przetestowana na komórkach CIK namnożonych od pacjentów z GBM.

Drugim celem badania jest ocena potencjalnego niekorzystnego wpływu powszechnie stosowanych terapii neuroonkologicznych na komórki CIK. W szczególności stawiamy hipotezę, że steroidy, takie jak deksametazon, mogą mieć szkodliwy wpływ poprzez wywieranie cytotoksyczności i zmniejszanie aktywności przeciwnowotworowej komórek CIK. Chociaż hipotezę tę wykazano dla innych typów limfocytów, nie badano jej w przypadku komórek CIK. Ustalenie potencjalnych progów toksyczności (mediany dawki toksycznej) może dostarczyć cennych informacji wykraczających poza zastosowania neuroonkologiczne, biorąc pod uwagę szerokie zastosowanie komórek CIK w leczeniu nowotworów hematologicznych i litych.

Dodatkowo w badaniu zbadany zostanie potencjalny negatywny wpływ temozolomidu na terapię CIK. Temozolomid, środek alkilujący, wykazał zróżnicowaną cytotoksyczność w stosunku do limfocytów, przy czym limfocyty T są bardziej wrażliwe niż komórki NK. Hipoteza jest taka, że ​​komórki CIK mogą odziedziczyć wrażliwość na temozolomid od komórek T CD3+. Jest to szczególnie istotne, ponieważ niedawne wieloośrodkowe badanie kliniczne III fazy oceniające terapię CIK w zaplanowanych wlewach komórek CIK GBM zbiega się z fazą leczenia uzupełniającego standardowego schematu leczenia, który obejmuje wyższą dawkę temozolomidu.

Druga część badania skupi się na badaniu mechanizmów ucieczki immunologicznej stosowanych przez GBM w celu uniknięcia nadzoru immunologicznego niezależnego od HLA, takiego jak ten, w którym pośredniczą komórki CIK.

Aby osiągnąć te cele, pacjenci z GBM zostaną zapisani do szpitala San Raffaele przed rozpoczęciem radiochemioterapii, wraz ze zdrowymi dawcami (HD) jako grupą kontrolną. Każdy uczestnik dostarczy pojedynczą próbkę krwi obwodowej (około 10 ml) w probówce EDTA. Badanie zaprojektowano jako badanie przekrojowe z jednym punktem czasowym pobierania próbek biologicznych. Około 40 uczestników (20 pacjentów i 20 zdrowych ochotników) zostanie zapisanych w ciągu 24 miesięcy, co umożliwi nam osiągnięcie Celu 1 (5 pacjentów i 5 HD), Celu 2 (5 pacjentów i 5 HD) oraz analizę eksploracyjną ( 10 pacjentów i 10 HD). Przewidziany jest dodatkowy okres nierekrutacyjny wynoszący 12 miesięcy na analizę danych i przygotowanie manuskryptu.

Gromadzone będą dane epidemiologiczne dotyczące wszystkich uczestników, obejmujące wiek, płeć, istotne choroby współistniejące i stosowane leki. W przypadku pacjentów z GBM zostaną zapisane dodatkowe szczegóły wywiadu onkologicznego, w tym stosowanie sterydów (tak/nie, dawkowanie i czas) oraz czas leczenia chirurgicznego.

Po pobraniu krwi komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) zostaną wyizolowane przez wirowanie w gradiencie Ficoll i namnożone in vitro przez 21 dni, z sekwencyjnym traktowaniem IFN-γ, OKT3 i IL-2. Komórki będą zliczane ręcznie przy użyciu barwnika błękitu trypanu, a ich fenotyp będzie scharakteryzowany za pomocą cytometrii przepływowej. Aktywność przeciwnowotworowa komórek CIK zostanie oceniona poprzez wspólną hodowlę ich z komórkami glejaka i ocenę ich zdolności do degranulacji (test CD107a) i aktywności cytotoksycznej wobec komórek docelowych, co wykryje się za pomocą cytometrii przepływowej.